1、乳腺癌VEGFC mRNA的表達與淋巴結轉移的關系         11-01-07 13:29:00     編輯：studa20              作者：王虎霞，盛薇，王光輝，樊林，單濤，趙偉，李萌【摘要】  目的 探討乳腺癌血管內皮生長因子C(VEGFC)的表達與乳腺癌淋巴結轉移等臨床病理指標之間的關系。方法 用逆轉錄聚合酶

2、鏈反應(RTPCR)法檢測60例乳腺浸潤性導管癌VEGFC mRNA的表達情況，取15例乳腺纖維腺瘤標本作為對照。結果 乳腺癌組VEGFC mRNA的陽性表達率及表達程度明顯高于對照組(P均<0.01);乳腺癌淋巴結轉移組VEGFC mRNA的表達率及表達程度高于淋巴結非轉移組(P均<0.05);VEGFC mRNA的表達與乳腺癌淋巴結轉移呈正相關(r=0.638，P<0.01)。結論 乳腺癌中VEGFC mRNA的表達水平增高;VEGFC mRNA的表達促進乳腺癌淋巴結轉移。 【關鍵詞】  乳腺癌;血管內皮生長因子C mRNA;淋巴結轉移ABSTRACT: Obj

3、ective To study the expression of vascular endothelial growth factor C (VEGFC) in breast cancer and its correlation with clinicopathological indexes of lymph node metastasis. Methods Reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR) method was adopted in detecting VEGFCmRNA expression in 60 ca

4、ses of breast infiltrative tubular cancer. We took 15 cases of breast fibroadenoma as controls. Results The positive rate and degree of VEGFCmRNA expression were higher in the breast cancer group than in the control group (P<0.01). VEGFCmRNA expression was significantly higher in the lymph node m

5、etastasispositive group than in lymph node metastasisnegative group (P<0.05). VEGFCmRNA expression was positively correlated with lymph node metastasis (r=0.638, P<0.01). Conclusion VEGFCmRNA expression was higher in breast cancer and it promoted lymph node metastasis in breast cancer.KEY WORD

6、S: breast cancer; vascular endothelial growth factor C mRNA; lymph node metastasis研究表明，血管內皮細胞生長因子C(vascular endothelial growth factor C, VEGFC)是較特異的促淋巴管內皮生長因子，在乳腺癌淋巴管的生成及淋巴結轉移中發揮著不可忽視的作用1。目前關于VEGFC基因水平的研究，國內報道較少。本研究通過逆轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chainreaction, RTPCR)法檢測乳腺癌組織中VEGFC mRNA

7、的表達，以三磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)為內對照對目的基因進行半定量分析，探討VEGFC基因表達與乳腺癌淋巴結轉移之間的關系。1 材料與方法1.1 標本來源 收集西安交通大學醫學院第一附屬醫院2006年3月2007年5月間乳腺浸潤性導管癌新鮮標本60例為研究對象，其中淋巴結轉移29例，無轉移31例。腫塊長徑2cm 23例，>2cm且5cm 30例，>5cm 7例。按WHO乳腺浸潤性導管癌病理學分級標準：級19例，級18例，級23例。所有患者均為女性，平均年齡(45.21±8.23)歲，術前均未接受放、化療等，均行乳腺癌改良根治術，清除淋巴結數目均大于15枚。取門診乳腺纖

8、維腺瘤新鮮標本15例作為對照。1.2 主要試劑 焦炭酸二乙酯(DEPC)購自Sigma公司;Trizol試劑購自Invitrogen公司;RevertAidTMcDNA第1鏈合成試劑盒購自MBI公司;2×Taq PCR MasterMix(KT201，含染料)及DNA Markers購自天根生物技術有限公司。引物由北京奧科生物技術有限責任公司合成。VEGFC引物1：ACCAAACAAGGAGCTGGATG，引物2：AAGAGGCCTTTTGCAGATGA，產物長度600bp，退火溫度58;GAPDH引物1：ATCATCCCTGCCTCTACTGG，引物2：CCCTCCGACGCCTG

9、CTTCAC，產物長度188bp，退火溫度58。1.3 方法 每例標本術后留取新鮮組織，用處理過的剪刀把組織剪成小塊，立即放入1mL/L的DEPC水溶液處理過的凍存管，迅速投入液氮，隨后轉送實驗室，-80冰箱保存。取100mg組織，Trizol法提取的總RNA，并進行RNA純度及完整性測定。按照RevertAidTMcDNA第1鏈合成試劑盒說明反轉錄，合成cDNA。取cDNA<1g(1L)進行PCR反應，GAPDH為內參照，采取分管擴增，反應體系25L，退火溫度58，34個循環。產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測，并送北京奧科生物技術有限責任公司測序。每批實驗均設有內參GAPDH作為對照，避免RN

10、A定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一、各孔間的溫度差等所造成的誤差。計算目的基因與內參基因吸光度的比值，即目的基因相對表達量，進行半定量比較。同時設有陰性對照，防止非特異性擴增，即PCR體系不加模板;PCR體系中只加內參引物而不加目的基因引物。1.4 結果判定 RNA純度及濃度測定：分光光度計讀取RNA溶液在260nm、280nm波長的吸光度比值A260/A280即RNA濃度。比值判定：A260/A280在1.82.0視為抽取的RNA純度較高，蛋白質和酚去除較干凈，該樣品可用于下一步實驗。RNA完整性鑒定：經10g/L瓊脂糖凝膠電泳，檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比

11、值。28S和18S條帶明亮、邊緣清晰、條帶銳利，并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，認為RNA質量是好的。1.5 統計學分析 實驗數值均以±s表示，由SPSS13.0統計分析軟件處理。計數資料比較采用2檢驗及Fisher確切概率法，計量資料采用t檢驗，相關分析用Spearman法。顯著性檢驗水平=0.05。2 結 果2.1 RNA檢測及VEGFC產物測序 本實驗經反復提取RNA，每例樣品RNA純度均符合要求。本實驗經RNA電泳顯示，每例樣品RNA質量均符合要求(圖1)。產物經純化和雙向測序，VEGFC目的片段符合預期擴增目標，無堿基錯配、突變等(圖2)。2.2 兩組VEGFC m

12、RNA表達率的比較 乳腺癌組VEGFC mRNA的陽性表達率為73.3%(44/60)，明顯高于對照組的13.3%(2/15)，差異有統計學意義(P<0.01)。2.3 VEGFC mRNA表達與乳腺癌臨床、病理相關參數的關系 乳腺癌淋巴結轉移組VEGFC mRNA的陽性表達率(86.2%)高于淋巴結無轉移組(61.3%)，差異有統計學意義(P<0.05)。在不同月經狀態、腫塊大小、病理分級、雌激素、孕激素受體及HER2表達分組中VEGFC mRNA表達均無顯著性差異(表1)。表1 VEGFC mRNA表達與乳腺癌臨床、病理相關參數的關系2.4 兩組VEGFC mRNA表達程度的比較 乳腺癌組VEGFC mRNA的相對表達量(0.561±0.3