1、 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁1USP 39阿奇霉素阿奇霉素Azithromycin C38H72N2O12 xH2O （無水物） 749.00 83905-01-5(2R, 3S, 4R, 5R, 8R, 10R, 11R, 12R, 13S, 14R)-13- (2, 6-二脫氧-3-C-甲基-3-O-甲基-L-核-己吡喃糖基)氧 -2-乙基-3, 4, 10-三羥基-3, 5, 6, 8, 10, 12, 14-七甲基-11- 3, 4, 6-三脫氧-3-(二甲氨基)-D-木-己吡喃糖基 氧-1-氧雜-6-氮雜環十五烷-15-酮。 9-氧代-9a-氮雜-9a-甲基-

2、9a-高紅霉素 A 一水合物 767.02 121479-24-4 二水合物 785.02 117772-70-0定義定義阿奇霉素含一分子或兩分子的水。按無水物計算，每 mg 阿奇霉素中C38H72N2O12的含量應為 945g1030g。USP 參比對照品參比對照品阿奇霉素 USP 參比對照品；（USP Azithromycin RS）氮雜紅霉素 A USP 參比對照品；(USP Azaerythtomycin A RS)阿奇霉素 USP 鑒別對照品；(USP Azithromycin Identity RS)德糖胺阿奇霉素 USP 參比對照品（USP Desosaminylazithrom

3、ycin RS）N-去甲基阿奇霉素 USP 參比對照品（USP N-Demethylazithromycin RS） 阿奇霉素雜質 F USP 參比對照品 （USP Azithromycin Related Compound F 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁2RS）【鑒別鑒別】A：紅外吸收 。（如果樣品的紅外譜圖與標準譜圖不同時，用相同體積的甲醇溶解等量的樣品和對照品，在真空條件下，水浴加熱至 80 ，持續 30 分鐘，揮干溶劑。用殘渣再做檢測。 ）B：在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試樣品溶液中阿奇霉素峰的保留時間應與對照品溶液中阿奇霉素峰的保留時間一致。比旋度比旋度

4、：-45 -49 ，溫度 20。 測試溶液：20mg/ml, 無水乙醇溶液。結晶性結晶性 ：應符合要求。（當為無定形時, 大多數微粒不存在雙折射和消光位置。 ）pH 值值 ： 9.011.0。樣品儲備溶液：4mg/ml 的甲醇溶液；樣品溶液：用水將樣品儲備溶液（體積比：1:1）稀釋成 2mg/ml 的溶液。水分，水分，方法1 ：當標為無結晶水時不得大于 2.0%；二水合物，水分在 4.0% 5.0%之間；一水合物在 1.8% 4.0% 之間 ，當干燥失重測定符合要求時，水分可以在4.0% 6.5% 。 干燥失重干燥失重 （當標簽標示為一水合物，且水分含量在 4.06.5范圍內時，進行此項測定。

5、 ）熱分析 ： 注：用于檢測的量可依據儀器的靈敏度進行適當的調整。 精確稱量 10mg 阿奇霉素，在一適宜的校準儀器中，用“熱解重量分析法”測定揮發性物質的含量。在 35ml/min 恒定速率氮氣氛中，將樣品以 10/min 的速率從環境溫度加熱到 150。在“差示熱分析圖”中，標示出干燥失重的導數（每分鐘失重的百分數） ；計算 70、130處的轉折拐點：從環境溫度到 70，失重不多于 4.5；70拐點到 130拐點，失重量在1.82.6。含量含量 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁3溶液 A：10M 氫氧化鉀溶液溶液 B：將 6.7g/l 磷酸氫二鉀溶液用溶液 A 調節 pH

6、 至 11.0。溶液 C：將 6.7g/l 磷酸氫二鉀溶液用磷酸調節 pH 至 11.0。流動相：乙腈：溶液 B（60:40）稀釋液：乙腈：溶液 C（60:40）系統適應性溶液：阿奇霉素 USP RS、氮雜紅霉素 A USP RS 分別按下法制備 0.5mg/ml 的溶液。先將阿奇霉素 USP RS 和氮雜紅霉素 A USP RS 溶解于乙腈中，取 5%的最終溶液，用稀釋液定容。對照品溶液：阿奇霉素 USP RS 按下法制備 0.53mg/ml 的溶液。先將阿奇霉素 USP RS 溶解于乙腈中，取 2%的最終溶液，用稀釋液定容。樣品溶液：阿奇霉素樣品按下法制備 0.53mg/ml 的溶液。先將

7、阿奇霉素樣品溶解于乙腈中，取 2%的最終溶液，用稀釋液定容。 色譜系統 (見色譜法，系統適應性)；模式：液相色譜法檢測波長：UV 210nm色譜柱：4.6-mm 25-cm，用粒徑為 5-m 的 L67柱溫：40流速：1mL/ 分鐘。進樣量：10l。系統適應性系統適應性進樣：對照品溶液和系統適應性溶液。備注氮雜紅霉素 A 的相對保留時間為 0.7，阿奇霉素為 1.0適應性要求適應性要求分離度：氮雜紅霉素 A 與阿奇霉素的分離度不得少于 3；系統適應性溶液。拖尾因子范圍：阿奇霉素峰的拖尾因子應為 0.81.5；對照品溶液。相對標準偏差：不大于 1.10%；對照品溶液。分析分析 2016 年 4

8、月 1 日 第 頁 共 28 頁4進樣：對照品溶液和樣品溶液。按下式計算每 mg 阿奇霉素中含 C38H72N2O12的量，單位是 g： (rU / rS)（Cs/Cu）P式中：rU 樣品溶液中的峰響應值； rS 對照品溶液中的峰響應值。 Cs對照品溶液中 USP 阿奇霉素 RS 的濃度； Cu樣品溶液中阿奇霉素的濃度； PUSP 阿奇霉素參比對照品的效價（g/mg 阿奇霉素）限度：按無水物計，9451030g/mg。 雜質雜質 無機雜質無機雜質熾灼殘渣熾灼殘渣 ：0.3， 炭化殘留物用 2ml 硝酸及 5 滴濃硫酸潤濕。重金屬，重金屬，方法二方法二 ：25ppm。有機雜質有機雜質方法 1 備

9、注如果雜質譜中有紅霉素 A 肟和紅霉素 A 亞胺醚，用方法 1。 使用的水電阻系數不小于 18 Mohm-cm.流動相 乙腈：溶液 A（250:750） 。用 5M 氫氧化鉀調節 pH 至10.550.05。溶液 A20mM 磷酸二氫鉀的水溶液。對照品儲備溶液稱取并用乙腈溶解一定量的 USP 德糖胺阿奇霉素參比對照品（USP Desosaminylazithromycin RS） ，USPN-去甲基阿奇霉素參比對照品（USP N-Demethylazithromycin RS） 、USP 氮雜紅霉素 A 對照品（USP Azaerythromycin A RS）和 USP 阿奇霉素參比對照品，

10、獲得已知濃度分別為45g/mL, 105g/mL, 150g/mL 和 160g/mL 的溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁5對照品溶液將對照品儲備溶液用流動相稀釋，獲得已知德糖胺阿奇霉素 USP 參比對照品（USP Desosaminylazithromycin RS） ，N-去甲基阿奇霉素USP 參比對照品（USP N-Demethylazithromycin RS）和阿奇霉素 USP 參比對照品的濃度分別為 0.9g/ mL, 2.1g/mL 和 3.2g/mL 的溶液。樣品溶液 0.33mg/ml。稱取一定量的阿奇霉素，放入合適的容量瓶中，加入乙腈（乙腈用量為容

11、量瓶體積的 5%） ，若有必要可超聲處理使溶解。用流動相稀釋至刻度，混勻。 色譜系統（見色譜法）類型：液相色譜儀。液相色譜儀配有一個安培型電化學檢測器（該檢測器配有一個雙玻璃碳電極，在氧化性保護模式下操作，電極 1 設置在 +0.70 V，電極 2 設置在+0.85 V） ； 色譜柱：色譜柱：分析柱：4.6-mm 15-cm，粒徑 3-m 的 L49 填充。檢測器預熱：28自動進樣器：5流速：1mL/ 分鐘。進樣量：50l。系統適應性系統適應性進樣：對照品溶液。適應性要求分離度：阿奇霉素和氮雜紅霉素 A 之間的分離度應不低于 3.0。拖尾因子：阿奇霉素峰的拖尾因子2.0，N-去甲基阿奇霉素峰的

12、拖尾因子2.5。相對標準偏差：各雜質相對標準偏差10.0%。分析進樣：對照品溶液和樣品溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁6備注記錄樣品溶液的色譜圖，時間不少于阿奇霉素峰保留時間的 3.3倍。按下列公式計算阿奇霉素中德糖胺阿奇霉素（Desosaminylazithromycin） 、N-去甲基阿奇霉素（N-Demethylazithromycin）和氮雜紅霉素 A 的百分比：(rU / rS)（Cs/Cu）F100式中：rU 樣品溶液中相應待測物質的峰面積； rS 對照品溶液中相應待測物質的峰面積。 Cs對照品溶液中 USP 參比對照品的濃度（g/ml） ； Cu樣品溶液

13、的濃度（g/ml） ； F單位轉換（0.001mg/g）按下列公式計算阿奇霉素中其他有關物質的百分比： (rU / rS)（Cs/Cu）F100式中：rU 樣品溶液中其他單個雜質的峰面積； rS 對照品溶液中阿奇霉素的峰面積。 Cs對照品溶液中 USP 阿奇霉素參比對照品的濃度（g/ml） ； Cu樣品溶液的濃度（g/ml） ； F單位轉換（0.001mg/g） 限度要求：見雜質表 1.雜質表 1名稱相對保留時間限度， （%）紅霉素 A 亞胺醚Erythrinycin A iminoether0.190.5德糖胺阿奇霉素（Desosaminylazithromycin）0.290.3紅霉素 A

14、 肟0.370.5 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁7Erythromycin A oximeN-去甲基阿奇霉素（N-Demethylazithromycin）0.490.7氮雜紅霉素 AAzaerythromycin A0.801.0阿奇霉素1.03-去氧基阿奇霉素（阿奇霉素 B）3-Deoxyazithromycin2.331.0總雜質3.0方法方法 2備注如果雜質譜中有紅霉素 A 肟和紅霉素 A 亞胺醚，用方法 1。 溶液 A1.8mg/ml 無水磷酸氫二鈉的水溶液。用 1N 氫氧化鈉溶液或 10%磷酸調節 pH 至 8.9。溶液 B乙腈和甲醇的混合液（3:1）.溶液

15、C1.73mg/ml 磷酸二氫銨溶液。用氨水 TS 調節 pH 至10.00.05。溶液 D甲醇、乙腈和溶液 C（7:6:7） 。流動相見如下梯度表。時間（分鐘）溶液 A（%）溶液 B（%）05050254555304060802575815050935050系統適應性溶液用溶液 D 溶解，獲得已知 USP 阿奇霉素雜質 F 參比對照品濃度為 0.0165mg/ml、USP 德糖胺阿奇霉素參比對照品濃度為0.027mg/ml 的溶液。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁8對照品溶液用溶液 D 溶解，獲得已知 USP 阿奇霉素參比對照品濃度為86g/ml 的溶液。樣品溶液用溶液

16、D 溶解，獲得已知阿奇霉素濃度為 8.6mg/ml 的溶液。 色譜系統 (見色譜法) 模式：液相色譜儀。 檢測器：UV210nm。 色譜柱：一個 4.6-mm 25-cm 色譜柱；用 5-m 粒徑的 L1 填充。 柱溫：60 C。 流速：1ml/分鐘。 進樣量：50l。 系統適應性 進樣：系統適應性溶液和對照品溶液。 峰谷比值：1.4，系統適應性溶液。備注峰谷比值計算公式： R=Hp/Hv Hp：德糖胺阿奇霉素峰基線以上的高度； Hv：除德糖胺阿奇霉素峰和阿奇霉素雜質 F 峰外，基線以上的峰曲線最低點的高度。拖尾因子：0.81.5，對照品溶液。分析進樣：對照品溶液和樣品溶液。備注在阿奇霉素 3

17、-N-氧化物之前和在 3-脫氧阿奇霉素（阿奇霉素B）之后析出的峰忽略不計。面積小于對照品溶液中阿奇霉素峰面積 0.1 倍的峰忽略不計。按下式計算阿奇霉素中各雜質的百分比：(rU / rS)（Cs/Cu）PF1100/F2式中：rU 樣品溶液中各雜質的峰響應值； rS 對照品溶液中阿奇霉素的峰響應值； Cs對照品溶液中 USP 阿奇霉素參比對照品的濃度（mg/ml） ； 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁9 Cu樣品溶液中阿奇霉素的濃度（mg/ml） ； P USP 阿奇霉素 RS 的效價（g/mg 阿奇霉素） F1單位轉換系數（0.001mg/g） ； F2相對響應因子 (見表

18、 2)限度要求：見雜質表 2雜質表 2雜 質相對保留時間相對響應因子（F2）限度(, %)Azithromycin N-oxide 阿奇霉素-N-氧化物 a0.290.430.53-(N,N-didemethyl)-3-N-formylazithromycin3-(N,N-二去甲基)-3-N-甲酰阿奇霉素 b0.371.70.53-（N, N-didemethyl) azithromycin3-（N, N-二去甲基）阿奇霉素 c 0.431.00.5阿奇霉素雜質 F d0.513.80.5Desosaminylazithromycin德糖胺阿奇霉素 e0.541.00.33-N-4-(Acet

19、ylamino)phenyl-3,3-didemethylazithromycin 3-N-4-(乙酰氨基)苯基-3,3-二去甲基阿奇霉素0.55120.15N-demethyl-azithromycin N -去甲基-阿奇霉素 f0.611.00.7Azithromycin C （3-O-demethylazithromycin）阿奇霉素 C（3-O-去甲基阿奇霉素） g0.731.00.53-De(dimethylamino)-3-oxoazithromycin3-去（二甲氨基）-3-氧絡阿奇霉素 h0.761.50.53-N-4-(Acetylamino)phenylsulfonyl-3

20、-demethylazithromycin 3-N-4-(乙酰氨基)苯基磺酰基-3-去甲基阿奇霉素0.79100.5 Azaerythromycin A氮雜紅霉素 A i0.831.00.5Azithromycin impurity P阿奇霉素雜質 P j0.921.00.2阿奇霉素1.02-Desethyl-2-propylazithromycin2-去乙基-2-丙基阿奇霉素 k1.231.00.5 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁10雜 質相對保留時間相對響應因子（F2）限度(, %)3-N-demethyl-3-N-(4-methylphenyl)sulfonylazi

21、thromycin3-N-去甲基-3-N-(4-甲苯基)磺酰阿奇霉素 l1.2650.53-Deoxyazithromycin (azithromycin B)3-去氧阿奇霉素（阿奇霉素 B） m1.311.01.0其他未知單個雜質1.00.2總雜質3.0 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁11【包裝和貯藏包裝和貯藏】密封保存標示標示標簽應說明此為一水合物還是為二水合物。用任何方法制得的阿奇霉素，其含量均應該以無水物 C38H72N2O12來計算標示。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁12USP 附錄翻譯附錄翻譯紅外吸收紅外吸收6 種方法用于配制干性的試驗樣品

22、和分析用的參照標準。在試驗條件下，參照，指將樣品與溴化鉀充分混合。參照，指在試驗條件下將樣品在礦物油中分散。參照，指在試驗條件下將樣品懸浮于適當的壓片板之間（如：氯化鈉或溴化鉀） 。參照，指用專論中特定的溶劑配制已知濃度溶液，將該溶液在 0.1mm 目篩下檢測。參照，指在試驗條件下將樣品與用于削減全反射分析內部的反射因素密切聯系。參照，指在試驗條件下將樣品壓制成一個薄片進行紅外微觀分析。削減全反射和技術被認為是、和的替代方法，進行定量試驗，且參照標準圖譜也是按類似方法獲得的。 除非專論中有特別說明的，應在 2.6m 到 15m（3800cm-1650cm-1）的變化范圍內記錄試驗樣品和美國藥典

23、參比對照品的圖譜。供試樣品的配制應與參照對照品一致，應先將供試樣品按參比對照品的特定條件干燥，有其他的特殊要求或采用的該參照對照品在未經干燥的情況下除外。在相同波長下，只有當供試樣品與美國藥典參照對照品的配制一致時，可比性最大。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁13某些情況下，樣品的紅外圖譜與標準圖譜存在差異，可視為存在多晶型物，這種結果不經常被接受（見分光光度儀和光散過程） 。除非專論中有特別說明，應繼續進行試驗。如果紅外分析樣品和標準圖譜出現差異，在等體積合適的溶劑中，溶解等量的待測樣品和對照品，在相同條件下，在相似的容器內，蒸發溶液至干，對殘余物重復進行試驗。旋光度中的

24、旋光度中的藥品中比旋度781S表示由樣品溶液觀察到的光學旋光值計算而得到的比旋光度。除非特別說明，光學旋光值的測定是在 25時用 589nm 光線測得的。測定時使用光電偏光計，每一次測試前都需要將溶劑的旋光值調零。使用偏光計時，將同一個裝有空白溶劑的旋光管校正后，不少于 5 次測定的平均值是有效的。測試供試液旋光值時的溫度應保持在固定值的0.5。使用同一個旋光管測定樣品以及空白溶劑。每次讀數據時保持旋光管的角度一致。將旋光管放置在每次光線都能夠從同一方向通過的地方。除非有其他規定，比旋光度是以干燥品或者以無水基準來計算的。溶液的光學旋光值應在 30min 內測定，如果已知待測物質會發生消旋或者

25、旋光改變，那么應該小心注意將待測物溶解于溶劑與將溶液放于旋光管之間的時間標準化。結晶性結晶性在專論中要求對藥品進行結晶性分析時，需作此試驗。操作詳細介紹按照【776】 。【776】中的結晶性特征物質的結晶性可認為是，確定與專論中所需結晶性一致的一種特征。除個別專論有特殊要求外，在干凈的玻璃載玻片上，放上一些礦物質油包裹的樣品顆粒。用偏振顯微鏡檢測此混合物：當顯微鏡的級數旋轉時，此顆粒顯示雙折射（干涉色）和消光現象。pH理論（略）pH 計校正用的緩沖溶液計校正用的緩沖溶液 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁14pH 計校正用的緩沖溶液可以按照附表進行制備。國家科學與技術委員會（N

26、ational Institute of Science and Technology）有緩沖鹽所必需的純度。溶液可以存放在帶密封口或二氧化碳吸收管的硬質玻璃或者聚乙烯瓶中。新制的溶液使用不能超過 3 個月，并且溶液要用無二氧化碳水制備。表中給出了緩沖溶液的 pH 值隨溫度的變化值。這里所列的是適應于標出摩爾濃度的溶液。然而，為了方便制備，在摩爾濃度的基礎上，與其標出 1000g 溶劑不如稀釋成 1000ml體積。這里指示的量是考慮了其他因素計算出來的。標準緩沖液的 pH 值：溫度/草酸鉀0.05m苯二甲酸氫鉀 0.05m磷酸鹽0.05m硼砂0.01m氫氧化鈣飽和（25 ）101.674.00

27、6.929.3313.00151.674.006.909.2812.81201.684.006.889.2312.63251.684.016.869.1812.45301.684.026.859.1412.29351.694.026.849.1012.13401.694.046.849.0711.98451.704.056.839.0411.8451.74.066.839.0111.71 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁1501551.724.086.838.9911.57601.724.096.848.9611.45草酸鉀，0.05m精確稱取 KH3(C2O4)2H2O12

28、.61g，加水使溶解并稀釋至1000ml。苯二甲酸氫鉀，0.05m精確稱取在 100干燥 1 小時的KHC8H4O410.12g，加水使溶解并稀釋至 1000ml。磷酸鹽，0.05m精確稱取在 120干燥 2 小時的 Na2HPO43.53g 與3.39gKH2PO4，加水使溶解并稀釋至 1000ml。硼砂，0.01m精確稱取 Na2B4O710H2O3.80g，加水使溶解并稀釋至1000ml。避免空氣中二氧化碳進入。氫氧化鈣，飽和（25）于 25，用無二氧化碳的水制備氫氧化鈣的飽和溶液，取上清液使用。存放時應防止空氣中的二氧化碳進入。一旦混濁，應棄去重配。由于環境和所用 pH 計的不同，給出

29、一個適合于所有電勢測定 pH 計的用法說明是不實際的。一般的規則見一下幾段，這些規則是每個儀表廠家都實行的說明書。如果在使用前存在鹽橋，檢查電極。按需要補充鹽橋溶液，并且注意說明書或電極廠家標出的其它事項。 為了校正 pH 計，應選擇二種 pH 值相差小于 4 個 pH 單位的標準緩沖液，并使供試品的 pH 值處于二者之間。在測試溫度下向電池里加入第一種標準緩沖溶液。將溫度控制在溶液的溫度，調節刻度使儀器與表列數值一致。用第二種標準緩沖溶液多次沖洗電極和電池，然后在測試溫度將它加入到電池里。誤差應不大于0.07pH 單位。若大于此偏差，則應小心調節斜率或溫度使示值與第二種標準緩沖液的表列數值相

30、符。重復上述定位與斜率的調節操作，至儀器示值與標準緩沖液的規定數值相差不大于 0.02pH 單位。否則，需要檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。當系統運行滿意后，用少量待測液沖洗電極和電池幾次，將待測液加到電池里，讀取 pH 值。在測定 pH 時，用無二氧化 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁16碳水(見溶劑、指示劑與溶液的選擇的水)制備溶液或稀釋待測液。在所有的 pH測試中，都要使之有充足的時間穩定。指示劑和測試紙（見溶劑、指示劑與溶液中的指示劑和指示測試紙）的 pH值足夠接近就符合要求了。關于緩沖液的討論及測試與分析所需的標準緩沖液的成分，見溶劑、指示劑與溶液中的緩沖

31、溶液。水分，方法水分，方法 1方法方法1 （滴定滴定）用方法用方法1a測定水份，除非藥品單個說明中有特殊規定。測定水份，除非藥品單個說明中有特殊規定。方法方法1a（直接滴定）（直接滴定）試劑試劑按如下方法制備卡爾-費休氏（Karl Fischer）試劑。將125g碘加入到含有670ml甲醇以及170ml吡啶的溶液中，冷卻。用250ml量筒量取100ml吡啶，并置于冰浴中，通入二氧化硫直到溶液體積達到200ml。將此溶液慢慢地滴加到冷卻的碘混合物中，振蕩，直至碘溶解。將此溶液移到儀器中，在標定之前放置過夜。剛配制的此溶液1ml相當于5mg水，但是它會逐漸變質，故而應在使用前一小時內對其進行標定（

32、如果經常用的話，則需要每天進行標定） 。使用時，避光。將此溶液在密封良好、具玻璃瓶塞的容器中避光冷藏保存。商業上可用的、穩定的卡爾-費休氏試劑也可以使用。除了吡啶、乙醇和甲醇以外，包括溶劑或者堿在內的商業上銷售的試劑也可以使用。在一些藥品的單個說明書中，稀釋試劑應該按制造商提供的方法進行稀釋。甲醇或者其他合適的溶劑，如乙二醇甲醚也可作為稀釋液。樣品溶液樣品溶液除特別說明外，精密稱量大約含有10250mg水的供試品。如果供試品為推進式氣霧劑，在冷藏室中至少冷凍2h。在10或者更高的溫度下，測試10.0ml的混合均勻的樣品到滴定終點。如果供試品為膠囊，則不能少于4粒。如果供試品為片劑，則應在不影響

33、結果的大氣溫度、濕度的環境中將不少于4片的供試品磨成粉末后再進行測試。如果供試品吸濕，用干燥的注射器將一定體積的甲醇或其他適宜的溶劑注入到已“去皮”的容器中，稱重，振蕩至供試品溶解。利用同一注射器將此溶液 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁17轉移到測定方法中的滴定瓶中。用另外的甲醇或其他適宜的溶劑重復此步驟，并將洗液一并加入到上述滴定瓶中，并立即滴定。按“剩余滴定中水溶液標定剩余滴定中水溶液標定”中的方法，測定溶解供試品、洗滌容器及注射器時所用相同體積的溶劑中的水分含量，單位為mg；從滴定供試品所得水含量的數值(單位mg)中減去上述數值。在100的密閉環境中干燥3h，于干燥器

34、中冷卻，稱重,其與容器初始重量的差值即為供試品的重量。試劑標定試劑標定將足量的甲醇或其他溶劑加入到滴定瓶中,以蓋住電極為限；再加入試劑，直到滴定終點特征性顏色出現，或者直到約200mv電壓下產生10050mA的直流電。要測定痕量的水分含量（1） ，則需要用酒石酸鈉作為便利的水分參考物質。用差量法精確稱量150350mg酒石酸鈉（C4H4Na2O62H2O） ，并快速地加入到體系中，滴定到終點。水分平衡因子F，單位為mg水/ml試劑，可用以下式子計算：2（18.02/230.08）(W/V)其中，18.02、230.08分別為水、酒石酸鈉的分子質量；W是二水合酒石酸鈉的質量，單位mg；V為第二次

35、滴定時所消耗的試劑體積，單位ml。若要精密地測定水分含量（1） ，則須用純水作為參考物質。用稱量管，或者已稱重的注射器（或微型稱量管） ，依據差量法，快速地稱取25250mg水，具體的稱取量依據試劑濃度以及滴定管的尺寸來選擇（參考容量儀器容量儀器 31），滴定到終點，用下式計算水分平衡因子F，單位mg水/ml試劑：W/V其中，W是水的重量，單位mg；V為所用試劑的體積，單位ml。測定方法測定方法除有特別說明外，量取3540ml甲醇或其他溶劑到滴定瓶中，用試劑滴定到儀器標示的或者可視的滴定終點，以消耗任何存在的水分。 （此次滴定所消耗的體積沒有用途,因為它不會列入計算中） 。迅速地加入樣品溶液，

36、搖勻，再次用試劑滴定到儀器標示的或者可視的滴定終點。用下式計算樣品中的水分含量：SF其中，S為第二次滴定中所消耗的試劑體積，單位為ml；F為試劑的水分平衡因子。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁18方法方法1b（剩余滴定）（剩余滴定）儀器、試劑、樣品溶液儀器、試劑、樣品溶液與方法1a相同。剩余滴定中水溶液的標定剩余滴定中水溶液的標定用甲醇或其他溶劑將2ml水稀釋到1000ml制成水溶液水溶液。按“試劑標定試劑標定”中的方法,用25.0ml試劑標定此水溶液。用下式計算每1ml水溶液中水的含量，單位mg:VF/25其中，V為所消耗的試劑試劑體積；F為試劑的水分平衡因子。每周測定水

37、溶液中的水含量，并定期地對試劑進行標定。測定方法測定方法當藥品的單個說明書中要求需要用方法1b測量含水量時，量取3540ml甲醇或其他溶劑于滴定瓶中，用試劑滴定到儀器標示的或者可視的滴定終點。迅速地加入樣品溶液，搖勻；加入精確稱量的試劑(過量)。經過足夠的時間讓反應完全，用標定過的水溶液滴定未消耗的試劑到儀器標示的或者可視的滴定終點。用下式計算樣品中的水含量，單位mg：F(X-XR)其中，F為試劑的水分平衡因子；X為加入樣品后所加入試劑的體積，單位ml；X為用于中和未消耗掉的試劑所需已標定的水溶液的體積，單位ml；R為V/25的比值（每ml試劑/每ml水溶液） 。方法方法1c（庫侖滴定）（庫侖

38、滴定）儀器裝置儀器裝置任何商業提供的包括一個配有合適電極和磁力攪拌器的絕對密閉的儀器都是可用的。該裝置的微處理器控制著分析過程并顯示最后的結果。當消耗的電流能被完全測定時，不需要對儀器進行校正。試劑試劑見方法1a。樣品溶液樣品溶液如果樣品為可溶性固體，精確稱量一定量樣品，用無水甲醇或其他溶劑將其溶解。液體樣品亦可以按此法制備，或者也可在其他無水溶劑中制備。如果樣品是不溶性固體，用無水溶劑將水分萃取出來，精確稱量后，注入到電解質溶液中，或者依照蒸發的方法，在干燥的惰性氣體流中，在管中加熱樣品，水蒸氣和惰性氣體一同通入到電池中。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁19測定方法測定方

39、法精確稱量大約含0.55mg水(或者按照儀器說明所標示的量)的樣品溶液，用干燥的注射器注入陽極，搖勻，用庫侖滴定法滴定到測定終點。從儀器顯示上直接讀取測試溶液中的水分量，并計算其在物質中的百分量。做一次空白測定，以做一些必要的修正。灼燒殘渣灼燒殘渣 測定方法測定方法坩堝(可為硅、鉑、石英、瓷等材質)在60050下灼燒30min，然后在裝有硅膠或其他合適干燥劑的干燥器中冷卻，稱重。精確稱量供試品12g（或按各專論項下所規定的重量） ，置于該坩堝中。用少許硫酸（通常為1ml）濕潤樣品，在盡可能低的溫度下，小心加熱至樣品完全炭化，冷卻，除有特別說明外，用少許硫酸（約1ml）濕潤剩余物，小心加熱直到不

40、再有白色泡沫產生；然后在60050下（除有特別說明外）灼燒，直到殘留物完全灰化。在上述操作的過程中要確保不著火。在盛有硅膠或其他干燥劑的干燥器中冷卻，稱重，計算殘渣的百分含量。除特別說明外，如果殘渣重量超過了各藥品項下的限定值，則須重復用硫酸濕潤、加熱、灼燒等步驟，直到殘留物連續兩次的測量數值不大于0.5mg或者其百分含量在各專論的限定值內。 灼燒時置于一個通氣性良好的罩內，但要防止接觸空氣流，在盡可能低的溫度下達到碳的完全燃燒。如果想使用烘爐也可以，但要使溫度在60050下。烘爐的校正可以使用一個合適的數字溫度計，按標準和技術國家委員會的要求，用標準熱電偶去校準工作熱電偶探頭。烘爐的測量和控

41、制電路要通過檢測爐子的溫度控制裝置進行準確驗證，允許公差為25。重金屬，重金屬，方法二方法二 方法1 和 3 （略） 注：此方法用于汞、鉍、砷、銻、錫、鎘、銀、銅、鉬等金屬的檢測 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁20特殊試劑特殊試劑硝酸鉛貯備溶液硝酸鉛貯備溶液將159.8mg硝酸鉛溶解于100ml水中，加入1ml硝酸，用水稀釋到1000ml即得硝酸鉛備溶液。配制與儲存用的玻璃容器均不得含可溶解的鉛鹽。標準鉛溶液標準鉛溶液臨用前，用水將10.0ml的硝酸鉛貯備溶液稀釋至100.0ml。每1ml標準鉛溶液中含有相當于10g的鉛。利用此標準鉛溶液，配制成每100l標準鉛溶液中含1g

42、供試樣品的對照溶液，此溶液中相當于每1000000份待測樣品中有一份為鉛。方法方法此方法用于在方法I中不能產生清澈、無色的測試液的情況下，或者是由于自身聚合的性能而干擾形成金屬二價硫離子沉淀的物質，或者是揮發及不揮發性油。注意注意此方法不能用于汞金屬的檢測。PH=3.5醋酸緩沖液醋酸緩沖液將25.0g醋酸銨溶解于25ml水中，加入38.0ml的6N鹽酸溶液。若需要的話，用6N鹽酸或6N氫氧化銨溶液調PH值至3.5，用水稀釋至100ml，混合均勻。標準溶液標準溶液向50ml的比色管中加入2ml標準鉛溶液（20g的鉛） ，然后用水稀釋至25ml。在PH計或精密PH試紙檢測下，用1N醋酸或6N氨水調

43、PH值至3.04.0，用水稀釋至40ml，混合均勻。樣品溶液樣品溶液按下式計算測試所需樣品的質量，單位為g： 2.0/（1000L）其中，L為重金屬限度（%） 。將稱量的樣品置于坩堝中，加入足量的硫酸以濕潤樣品，在低溫下小心地灼燒樣品直至完全炭化。 （在灼燒過程中此坩堝需蓋上,但不用蓋得太緊密） 。加入2ml硝酸及5滴硫酸，小心加熱至不再有氣泡產生。在500600爐子中灼燒,直至碳完全燃燒。冷卻后加入4ml的6N鹽酸，蓋上蓋子，在蒸氣浴中煮15min，然后移去蓋子，慢慢在蒸氣浴上蒸發至干。用一滴鹽酸溶液潤濕殘留物后，再加入10ml熱水，煮2分鐘。然后滴加6N氨水調溶液為堿性（用石蕊試紙檢測），

44、用水稀釋至25ml后, 在PH計或精密PH試紙檢測下，用1N醋酸調PH值至3.04.0。如需要可過濾一遍，并用10ml水沖洗坩鍋和 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁21過濾器，將濾液和洗滌水倒入一個50ml的比色管中，最后用水稀釋至40ml，混合均勻。 測定方法測定方法向標準溶液、樣品溶液標準溶液、樣品溶液的試管中分別小心地加入2mlPH=3.5醋醋酸緩沖液酸緩沖液，然后加入1.2ml硫代乙酰胺丙三醇堿性試液（Thioacetamide-glycerin base TS） ，用水稀釋到50ml，搖勻，放置2min，在白色背景下，自上而下透視：樣品溶液的顏色要不深于標準溶液的顏

45、色。 注硫代乙酰胺丙三醇堿性試液（Thioacetamide-glycerin base TS）：將0.2ml硫代乙酰胺試液和1ml丙三醇堿性試液混合，沸水浴加熱20秒鐘。混合液即用即配。硫代乙酰胺試液：將4g硫代乙酰胺溶解于100ml水中。丙三醇堿性試液：向200g丙三醇中加水，使總重量達235g。再向其中加入140ml的1N氫氧化鈉溶液和50ml水。色譜中的系統適用性色譜中的系統適用性621高壓液相色譜法高壓液相色譜法高壓液相色譜法（HPLC），有時也稱為高效液相色譜法，是基于固體為固定相，液體為流動相的分離技術。分離是通過分配、吸附或者離子交換過程來完成，取決于所用的固定相類型。分析有機

46、物方面 HPLC 比氣相有明顯優勢。將待分析的混合物溶解在適宜的溶劑中，且大多數分離在室溫條件下即可進行。因此，大部分樣品包括難揮發或者熱不穩定性化合物可以被分離，而不需要分解或衍生成易揮發性物質。大部分藥物分析是基于分配色譜，并且在 30 分鐘內完成色譜分析。同氣相色譜一樣，化合物洗脫時間可以用容量因子 k 描述（參見符號術語表），它取決于被分析物的化學性質、流動相的組成和流速以及固定相的組成和表面積。柱長也是分離度的重要的決定性因素。只有具有不同容量因子的混合物才可以被 HPLC 分開。儀器裝置儀器裝置液相色譜是由流動相貯液瓶、在高壓下能夠使流動相通過系統的泵、將樣品引入流動相的進樣器、色

47、譜柱、檢測器和數據采集裝置（例如 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁22計算機、積分儀或記錄儀）組成的。短的、口徑小且含有密度較高的固定相填料的色譜柱可以為化合物在流動相和固定相間快速交換提供條件。除接收和報告檢測器輸出結果之外，計算機被用來控制色譜儀設置和操作，如此可為長期無人操作提供必要條件。泵系統HPLC 泵系統定量地將流動相通過高壓管路和裝置從儲液瓶運送到色譜柱。現代的系統包括一個或更多計算機控制的計量泵，可根據編訂好的程序按梯度色譜的要求來變化流動相的組成，或混合無梯度的流動相（即流動相有固定的溶劑比值）。然而，在預混和的無梯度流動相中各種成分的比例，與那些用多個泵系

48、統混合的相比，更能準確地控制。常見的情況為運行壓力高達 5000psi 或更高，此時泵的轉送速度可達 10ml/min。用于定量分析的泵應由惰性的耐流動相腐蝕的材料組成，且在輸送流動相過程中以不變的速率運送流動相，同時可以很小的波動運行很長一段時間。進樣器待測化合物在流動相或其他適當的溶液中溶解后，通過人工操作注射器或定量環，或者用自動進樣系統注入流動相。后者是由一個轉盤或轉送架和一個進樣裝置組成，轉盤或轉送架上面可以盛放帶有可刺破的膜或塞子的樣品瓶，進樣裝置可以將樣品從樣品瓶中轉移定量環中從而進入色譜系統。有些自動進樣器可以通過程序設計來控制樣品體積、進樣次數和定量環清洗循環、進樣時間間隔和

49、其它操作變量。當柱頭壓力小于 70 個大氣壓（約 1000 psi）時可以用注射器通過隔膜手動進樣。在較高壓力的情況下，必須有一個進樣閥。一些閥系統將定量環合并在一起，將定量環內所裝的供試品溶液在流動相中轉移至色譜柱。在另一些系統中，供試品溶液通過注射器注入空腔中，再轉動閥開關，使其進入流動相。色譜柱對于大多數藥物的分析，是通過將供試品溶液中的化合物分配于流動相和固定相之間來實現分離的。由非極性流動相和極性固定相組成的系統稱為正相色譜，反之，由極性流動相和非極性固定相組成的系統稱為反相色譜。分配色譜常被用于分子量小于 1000 的碳氫化合物的分析。化合物對固定相的親合力，以及因此而得到的在柱中

50、的保留時間，可以通過調節流動相的極性高低來控制。流動相的極性可以通過加入第二種和第三種有時甚至是第四種成分而改變。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁23現在典型的反相液相色譜的固定相是由有機相化學鍵合到硅膠或其他材料上而成。粒徑通常為 310m，但制備柱的大小可以達到 50m 甚至更高。帶有薄層有機相包裹的小顆粒可以提供低質量傳遞阻力，因此可以提供化合物在固定相和流動之間的快速傳遞。色譜柱的極性取決于鍵合官能團的極性，它包括從相對無極性的十八烷基硅烷到強極性的硝基。液體，未鍵合的固定相基本上不得溶于流動相。即使如此，常常需要用固定相來預飽和流動相以防止固定相從色譜柱中被剝離。

51、包裹在支持物上的聚合物固定相具有更好的耐用性。用于分析分離的色譜柱內徑通常為 25mm；制備色譜采用大內徑的色譜柱。對色譜柱升溫可能會獲得更有效的分離，但由于存在固定相降解或流動相揮發的可能性，故很少將其加熱到 60以上。除非在個論中另有規定，色譜柱應在室溫下使用。離子交換色譜用于分析分離分子量不超過 1500 的水溶性的、離子化的化合物。固定相通常是合成的有機樹脂，陽離子交換樹脂含有負電荷活性位點，用于分離堿性物質，例如胺；而陰離子交換樹脂含有正電荷活性位點，用于分離還有負電荷基團的化合物，例如磷酸、磺酸或羧酸。水溶性離子或離子化的化合物吸附到樹脂上，親合能力的不同產生了色譜分離。流動相的

52、pH、溫度、離子類型、離子濃度和有機物修飾劑可以影響平衡，可以調節這些變量來獲得所需的分離度。在分子排阻色譜中，色譜柱中填充的是多孔固定相。按照化合物分子量的大小進行色譜分離。分子量大的分子不能進入孔內而不保留地排出色譜柱。分子量小的分子進入孔內隨分子量降低而保留時間增加。這些色譜柱典型地應用于測量聚合物和大分子的降解（見分子排阻色譜一節）。檢測器許多藥典中的 HPLC 方法需要使用分光光度度檢測器。這種檢測器由在色譜柱的末端安裝的一個流通池構成。紫外光穿過流通池進入檢測器。當化合物從色譜柱上洗脫時，通過流通池產生吸收，導致測量的能量水平發生變化。固定波長、可變波長和多波長的檢測器被廣泛應用。

53、固定波長檢測器只能在一個單波長下操作，典型的為 254nm，由低壓力汞燈發射光源。可變波長檢測器含有一個連續的光源，例如氘燈或高壓氙燈，用一個單色器或干涉濾光片 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁24在操作者所選擇的波長處產生單色光。裝有單色器的可變波長檢測器的波長準確性需要按照生產廠商的程序方法進行檢查，如果檢測的波長偏離校正值超過3nm，就要對儀器進行重新校正。現在的可變波長檢測器在分析過程中可以程序地變化波長。多波長檢測器可以同時在兩個或更多波長下測量吸收情況。在二極管陣列多波長檢測器中，連續發射的光透過樣品池，然后分解成其組成的波長，用二極管陣列分別檢測。這些檢測器可以

54、獲得在整個紫外-可見范圍的吸收數據，因而可以提供給分析人員在多個、選擇性波長處的圖譜以及各洗脫峰的圖譜。二極管陣列檢測器與固定波長檢測器或可變波長檢測器相比，有較低的信噪比，因此不適于分析低濃度的化合物。示差折光檢測器測量單獨的流動相折光率與從色譜柱中流出的含有待測物質的流動相折光率之間的差異。示差折光檢測器用于檢測非紫外吸收的化合物，但其靈敏度比紫外檢測器低。它們對溶劑組成、流速和溫度的微小變化非常敏感，因此需要一個參比柱來獲得滿意的基線。熒光檢測器對那些本身具有熒光以及可以通過化合物的轉化或與熒光試劑在特定的官能團下配對轉變成熒光衍生物的化合物敏感。如果需要衍生化，可以色譜分離前衍生，試劑

55、也可以在進入檢測器前將其引入流動相中。電位、伏特或極譜電化學檢測器用于定量測定能在工作電極處被氧化或被還原的樣品。這些檢測器有選擇性、靈敏可信，但要求流動中不能溶解有氧氣和還原性金屬離子。必須使用無脈沖型泵，并且要確保流動相的 pH、離子強度和溫度保持恒定。工作電極容易被伴隨產生的具有可變響應值的還原產物污染。還有碳糊電極的電化學檢測器可以方便地用于定量測定納克級的易氧化化合物，特別是酚類和兒茶酚類。新的檢測器陸續被開發，以克服正在使用的檢測器的缺點。數據采集裝置現在的數據工作站可以收集和貯存檢測器輸出的結果，并且可以輸出峰高、峰面積、樣品鑒定和方法變量的色譜圖。它們(數據采集裝置)也可以用于

56、液相色譜編程，控制大多數變量，提供長時間的無人值守操作。 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁25數據也可以用簡單的手動測量記錄儀或單獨的積分儀來采集，它們可以完成從輸出峰面積到輸出帶有峰面積和峰高結果計算的色譜圖，以及貯存后來操作過程中得到的數據。操作步驟操作步驟流動相組成可以很大地影響色譜性能和被分離的混合化合物的分離度。對于準確定量的測定，必須使用高純度的試劑和“HPLC 級”有機溶劑。所使用水的質量要求具有低電導和低紫外吸收。特定類型檢測器（例如電化學、質譜）所用的試劑，可能要求制定附加的條件，以避免潛在的干擾。對于容量因子 k 來說，組成比溫度的影響更大。在分配色譜中，

57、決定分離的分配系數可以通過在流動相中加入其它化合物而發生變化。在離子交換色譜中，流動相的 pH 值和離子強度以及組成都會影響容量因子。使用在色譜運行的過程中連續變化流動相溶劑的組成的技術叫做梯度洗脫或程序變溶劑洗脫。它有時用于容量因子差別很大的混合化合物的色譜分離。對于溶劑組成變化敏感的檢測器，例如示差折光檢測器，使用梯度洗脫技術比較困難。檢測器必須具有一個很寬的線性動態范圍，被檢測化合物必須與其它干擾物分離。化合物的線性動態范圍是指檢測器信號響應值與化合物的量成正比的范圍。對于定量檢測的最大適應性，此范圍應該有大約三個數量級。HPLC 系統可以通過使用已知濃度的對照品與峰響應值作圖，按外標法

58、或內標法進行校正。如果使用自動進樣器，可以用外標法獲得可信的定量結果。這種方法可以通過直接比較供試品和對照品溶液峰響應值而直接獲得。如果必須使用注射器進樣，由于在高壓下的不重現性，需用已知量的不具干擾性的化合物做內部校正來獲得比較好的定量結果，將內標物加入到供試品溶液和對照品溶液中，將藥物峰面積響應值與內標物峰面積響應值的比值進行比較。由于儀器設備、進樣和技術的正常變化，需要進行系統適用性試驗以確保給定的操作系統是可用的。系統適用性試驗的主要特征在下文中闡述。對結果解釋，見色譜圖解釋一節。系統適用性系統適用性系統適用性是構成氣相和液相色譜方法所必須的部分。它們常用作證明色 2016 年 4 月 1 日 第 頁 共 28 頁26譜體系的分辨率和重現性適合所進行的分析。試驗依據于儀器、電子設備、分析操作和待分析的樣品，組成一個完整的體系。分辨率，R， （注參見符號術語表）具有代表柱子效率N的功能，用于說明待洗脫化合物能否彼此分別開來，建立系統的完全分辯能力，保證內標物能從藥物中分離出來。柱效率也可以說明系統適用性，尤其色譜圖中僅有一個峰時；然而，與直接測量相比，可靠性低。柱子效率是峰清晰度的一個量度，對于檢驗痕量化合物比較重要。在操作中，標準溶液的重復進樣要滿足精密度的要求。除非個別專論的特殊要求外，如果相對標準偏差要求2