1、菌落總數測定（一）實驗材料1.儀器與設備：恒溫培養箱、托盤天平、電爐、吸管、三角瓶、平皿、試管、試管架、酒精燈、滅菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蠟筆。2.培養基和試劑：75%乙醇、0.85%生理鹽水、平板計數瓊脂培養基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL、pH 7.0±0.2 3.待檢樣：利樂包裝鮮牛奶250mL（二）實驗方法與步驟1.檢驗程序菌落總數檢驗程序：檢樣做成幾個適當倍數的稀釋液選擇3個適宜稀釋度各以1mL之量分別入滅菌平皿內每皿內加入4615-20mL營養瓊脂置36±1恒溫箱內培養（48±2）h取出

2、 菌落數報告2.檢樣稀釋及培養（1）以無菌操作，將檢樣包裝打開，用吸管取25mL鮮牛奶，放于含有225mL滅菌生理鹽水的500mL滅菌玻璃三角瓶內（瓶內預先置適當數量的玻璃珠），經充分振搖做成1:10的均勻稀釋液。（2）用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1:100的稀釋液。（3）另取1mL的滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL滅菌吸管。（4）根據食品衛生檢驗標準要求和檢樣的菌落數量，選擇3個連續適宜稀釋度即10、101、102，分別在作

3、10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應及時將涼至46營養瓊脂培養基注入平皿15mL20mL，并轉動平皿使與稀釋檢樣混合均勻，同時將平板計數瓊脂培養基傾入加有1mL稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內作空白對照。（6）等瓊脂凝固后，翻轉平板，置36±1恒溫箱內培養（48±2）h取出，計算平板內菌落數目乘以倍數，即得1mL樣品所含菌落總數。 （三）檢樣中細菌菌落總數的計算與報告1.菌落計算方法（1）菌落計數方法做平板菌落計數時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數后，求出同稀

4、釋度的各平板平均菌落總數。（2）菌落計數的報告平板菌落數的選擇選取菌落數在30300 CFU之間的平板作為菌落總數測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應采用兩個平板平均數，稀釋度的選擇應選擇平均菌落數在30300 CFU之間的稀釋度，乘以稀釋倍數報告之。若有兩個稀釋度，其生長的菌落數均在30300之間， 按以下公式計算：式中：N = 樣品中菌落數C = 含適宜范圍CFU的平板菌落數之和n1 = 第一稀釋度（低稀釋度）平板個數n2 = 第二稀釋度（高稀釋度）平板個數d = 稀釋因子（第一稀釋度） 若所有稀釋度的平均菌落數均大于300 CFU，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之，若所有稀

5、釋度的平均菌落數均小于30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告若所有稀釋度及樣品原液均無菌落生長，則以小于l乘以最低稀釋倍數報告之，若所有稀釋度的平均菌落數均不在30300 CFU之間，其中一部分大于300 CFU或小于30 CFU時，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。菌落數的報告菌落數小于100 CFU 時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。菌落數大于或等于100 CFU 時，第3 位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數字，后面用0 代替位數；也可用10 的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。稱重取樣以CFU/g 為單位報告，體積取樣以CFU/mL 為單位報告。（四）實驗報告平皿菌落計數時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數后，求出同稀釋度的各平板的平均菌落總數