1、資料實驗一、槐米中蘆丁的提取、精制和鑒定（-）實驗目的要求1 .制備蘆丁，供藥用。2 .通過蘆丁的制備，掌握黃酮類化合物的提取分離的原理和操作。3 .熟悉重結晶技巧。4 了解和掌握黃酮類化合物的一些主要性質和鑒定方法。（-）實驗的基本原理1 .蘆丁的提取原理利用蘆丁結構中含有多個酚羥基，呈酚酸性，能在堿水中溶解的性質，可用堿性溶劑進行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（堿溶酸沉法）。也可利用蘆丁在冷水中溶解度小，在熱水中溶解度大的性質進 行提取二2 .蘆丁的分離原理利用蘆丁結構在冷乙醇中溶解度小，在熱乙醇中溶解度大，以及在熱水中溶解度大，在冷水中溶解 度小的性質分離。蘆丁用溶劑加熱溶解后，趁熱抽濾

2、，濾液放冷后能析出而達到分離的目的（如不純可 再重復操作進行分離）。也可采用醇溶水沉法進行精制。3 .蘆丁的鑒定原理（1）利用吸附薄層色譜的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條件下進行展開，顯色，以達到鑒定 蘆丁的目的。（2）通過專屬的化學顯色反應（如三氯化鋁顯色反應），確定蘆丁的成分類型（黃酮類）。（三）實驗內容L用堿提法、水提法、醇提法提取槐米中蘆丁。2 .用酸沉法和冷卻過飽和法分離蘆丁。3 .溶劑重結晶精制蘆丁。4 .薄層色譜法和顯色反應鑒定蘆丁（四）實驗藥材儀器與試劑1,實驗藥材槐米20g。2 .儀器：磁力加熱攪拌器、旋轉蒸發儀、粉碎機、500ml燒杯，1000ml燒杯，50ml燒杯，2

3、50ml 園底燒瓶、500ml園底燒瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml錐形瓶、50ml錐形瓶、研缽、移液管、 減壓過濾裝置，布氏漏斗，抽濾瓶、層析缸等。3 .試劑：硼砂、氧化鈣、HCI、三氯化鋁、甲醇、乙醇、乙醒、丙酮、甲酸、濾紙、PH試紙等。（五）實驗步驟1 .提取（水提取法）稱取槐米粗粉20g,在研缽中研碎后放入500ml燒瓶中，加水200ml,用磁力加熱攪拌器加熱煮沸 30min,趁熱過濾。殘渣同法操作一次，合并兩次濾液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，減壓抽濾， 用少量蒸錨水洗滌蘆丁結晶，抽干，得粗制蘆丁，干燥，稱重，計算得率。2 .精制（醇-水重結晶法）取粗制蘆丁 1g,置于

4、250ml園底燒瓶中，加80W乙醇30ml加熱回流15分鐘，趁熱抽濾。濾液置 250ml燒杯中，向濾液中加蒸儲水(約34倍量)至溶液呈明顯混濁，室溫放置，抽濾得精致蘆丁。用 少量蒸鐲水洗滌蘆丁結晶，晾干，稱重。(六)過程與現象記錄Day 1 (2011-05-07)提取6稱取研碎的粗槐米20.02g,組裝儀器。原料放入500mL燒瓶中加水200mL (1-2),磁力攪拌加熱。燒瓶中為咖啡色懸浮液,有甘苦氣 味，沸騰前不斷產生小氣泡上,液體中有明顯漩渦(1-3)。1O2C。沸騰,產生大量氣泡,藥渣翻滾,漩 涵被氣泡遮蓋(l-4)o加熱過程中時常停止沸騰.續略升溫23C。隨著時間的延長,液體顏色加

5、深。 煮沸規程中應控制液量,過少難以提出藥品,過多容易噴出瓶口。3最初用抽濾法分離殘渣(1-5),但是溶液很稠且含糖分較多,難以流下(1-6),并且易阻塞和 沖破濾紙,還漸漸冷卻。后改用離心法、5000r,l5min(l-7),效果略好,但是溶液還是冷卻.溶解的提取 物較少。濾液為深黃色色、粘稠,氣味濃厚甘甜。4再次將濾渣至于放入500mL燒瓶中加水200mL磁力攪拌加熱30mg液體顏色略比笫一次深。將兩次得到的浸液(約300mL)收集放入冰箱備用。Day 2 (2011-05-08)2 .精制1 .將粗提物抽濾(1-7) (1-8) (1-9),干燥得粗制蘆丁 (1-10) o2 .取粗制蘆

6、丁1.008g,置于250ml園底燒瓶中,加8徽乙醇30ml,加熱回流15分鐘(1-11),加 熱前沒有充分分散固體粗提物,趁熱抽濾(1-12),得到黃色油狀液體(1-13)。3 .另旋轉蒸發粗提物的濾液(1-14),沒有產物。Day 3 (2011-05-14)3 .鑒定(1)點滴顯色反應 從放置一周的粗提物中取蘆丁的甲醇溶液(供試液)分別點在濾紙上,揮去溶 劑,紫外照射,光吸收明顯(1-15),然后分別添加供試液蘆丁的甲醇溶液和顯色劑型三氯化鋁乙醉溶 液,顯黃色(1-16),在紫外燈下入365rlm觀察有明顯亮斑(1-17) o(2)薄層色譜鑒定資料吸附劑:硅膠GF254薄層板(5.0cm

7、 X 10.0cm) o樣品：自制蘆丁(用甲醇溶解，濃度約對照品：蘆丁對照品的甲醇溶液。展開劑：三氯甲烷-甲醇-甲酸(7 ： 3 ： 0.5)顯 色：a光在可見光下觀察,然后在紫外光下觀察,有明顯紫外吸收。(365nm紫外燈下觀 剽b.遮擋硅膠板左側噴三氯化鋁試劑(1-18), 365nm紫外燈下觀察,右側有顯色劑 至黃色,左側有明顯紫外吸收(1-19)。4 .注意事項(1)硼砂因能與蘆丁中的鄰二酚羥基結合，起保護鄰二酚羥基，不被氧化破壞的作用。實臉證明， 提取時加入硼砂，產品的質量會好些。(2)石灰乳既能達到堿溶解提取蘆丁的目的，還可以除去槐米中大量的粘液質和酸性樹脂(形成鈣 鹽沉淀)，但PH不能過高和長時間煮沸，因為會導致蘆丁的水解而開環和形成鈣鰲合物，影響產品的質 量和產率。(3) PH過低(酸性太強)會使蘆丁形成洋鹽而收率降低。(4)稱量蘆丁時，先將帶濾紙的漏斗稱重，再將盛樣品的帶濾紙的漏斗稱重，差重即為樣品的重量。 (七)結果計算及分析產率小漏斗+濾紙重29.69g抽濾后小漏斗+濾紙+樣品重30.20g桂品凈重0.51g產率二(0.51/1.008) x 100=50.60比移值 Rf=3/5.75=0.522分析：1、水提法不能充分溶解蘆丁;2、精制時粗提物聚集成固體顆