1、山楂葉總黃酮對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用<                             作者：紀(jì)影實(shí) 李紅 曲極冰 楊世杰【摘要】   目的 探討山楂葉總黃酮（FMCL）對(duì)腦缺血再灌注(CIR)損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法 采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，對(duì)其進(jìn)行行為指標(biāo)評(píng)

2、分，TTC染色測(cè)定梗死范圍，HE染色檢測(cè)腦 組織 病理變化，透射電鏡檢測(cè)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化，并檢測(cè)大鼠腦組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及一氧化氮（NO）含量的變化。結(jié)果 FMCL可明顯改善大鼠神經(jīng)行為，縮小梗死范圍，減輕腦組織病理改變，并可提高腦組織中SOD活性，降低腦組織中MDA及NO含量（P0.05或P0.01）。結(jié)論 FMCL可減輕CIR神經(jīng)細(xì)胞損傷，其機(jī)制可能與抗自由基損傷、減輕NO神經(jīng)毒性有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】   山楂葉總黃酮； 腦缺血再灌注；腦梗死    【Abstract】  Objective 

3、 To investigate the protective effects of flavone mixture of crataegus leaves（FMCL）on cerebral ischemiareperfusion(CIR) injury in rats. Methods  The CIR model was built through thread block . The neurologic deficit score and infarction area were measured. Then pathological change in injury brai

4、n tissue was detected by HE stain and transmission electron microscope. At the same time, the levels of superoxide dismutase (SOD),malondialdehyde (MDA) and nitric oxide(NO) in brain tissue were observed. Results  FMCL reduced cerebral infarction area, and relieved the injury of brain tissue. I

5、t also increased the activity of SOD and decreased the contents of MDA and NO in a dosedependent manner（P0.05 or 0.01）.  Conclusions  FMCL has a protective effect on CIR injury. Its mechanism maybe  relate to antiradicals damage and lessen the neurotoxicity of NO.    【K

6、ey words】  FMCL；Cerebral ischemiareperfusion; Cerebral infarction山楂葉總黃酮（FMCL）是從花期山楂的葉子中提取的黃酮類化合物的總稱，已從中分離出30余種單體。研究顯示，F(xiàn)MCL具有多方面的藥理作用，如擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、強(qiáng)心、抗心肌缺血等1，但對(duì)腦缺血再灌注（CIR）損傷的作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)模擬CIR損傷模型，研究FMCL對(duì)CIR損傷的保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制，為其 臨床 應(yīng)用 提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1  材料與方法 1.1  藥品及儀器  FMCL由長(zhǎng)春三九生物制藥提供，批號(hào)030510；

7、舒血寧（ShXN）金陵藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)030728；紅四氮唑（TTC） 中國(guó) 醫(yī)藥上海化學(xué)試劑總廠，批號(hào)20031103；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)試劑盒均由南京建成生物公司提供；6010紫外分光光度計(jì)由安捷倫分析儀器廠生產(chǎn)； GFD200半自動(dòng)生化測(cè)定儀由山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn)；JEM1200EX 電子 顯微鏡，日本光電株式會(huì)社。1.2  動(dòng)物分組及給藥 60只雄性Wistar大鼠（吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供），體重300350 g，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，即假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性藥組（舒血寧1.8 ml/kg）、FM

8、CL高、中、低劑量組（100、30和10 mg/kg），每日腹腔注射(ip)給藥1次（前兩組為相同體積的生理鹽水），連續(xù)給藥5 d。1.3  CIR損傷模型的制備 于末次給藥后30 min，上述動(dòng)物經(jīng)ip水合氯醛(350 mg/kg)麻醉。仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，行頸正中切口，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈（CCA）， 再分離出頸外動(dòng)脈（ECA）結(jié)扎，在ECA下方分離頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）及其小分支翼腭動(dòng)脈（PPA）并結(jié)扎之。結(jié)扎CCA近心端和ECA，用動(dòng)脈夾夾閉CCA，并在CCA剪開一小口，將直徑0.175 mm的尼龍線插入約18 mm，遇阻即止，阻塞大腦中動(dòng)脈起始部，然后逐層縫合肌肉和皮膚

9、，單籠飼養(yǎng)。術(shù)后自由進(jìn)食水，2 h后拔出栓線使血流再灌注22 h，假手術(shù)組僅分離右側(cè)CCA、ICA頸內(nèi)動(dòng)脈及ECA，其余同上。1.4  神經(jīng)功能評(píng)分 大鼠CIR 22 h后進(jìn)行行為指標(biāo)評(píng)分，標(biāo)準(zhǔn)為：活動(dòng)正常者為0分；豎毛，輕度運(yùn)動(dòng)低下者為0.5分；前肢屈曲運(yùn)動(dòng)障礙者為1.0分；行動(dòng)不協(xié)調(diào)，屈曲姿勢(shì)，旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)者為2.0分；偏癱，不能站立和行走者為3.0分；痙攣，昏睡者為4.0分；死亡者為5.0分（術(shù)后2 h以上死亡者）。得分高者運(yùn)動(dòng)障礙明顯。1.5  腦梗死面積測(cè)定 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠立即斷頭取腦，去除小腦和低位腦干，在前聯(lián)合處將腦組織行冠狀切片，間隔4

10、mm，共5片，放入2TTC磷酸鹽緩沖液(pH7.4) 37水浴10 min，正常腦組織呈深紅色，梗死腦組織呈白色。將每片組織照相，選擇每一切面的尾側(cè)面，應(yīng)用BI 2000 軟件 處理系統(tǒng) 計(jì)算 各部分面積，以各片非染色區(qū)面積之和與各片腦組織面積之和的百分比計(jì)算腦梗死范圍。1.6  HE染色  實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，斷頭取腦，腦組織片置入4多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片， HE染色，于光學(xué)顯微鏡（200倍）下觀察病理變化。1.7  透射電鏡觀察 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠用10%水合氯醛麻醉， 4多聚甲醛4戊二醛150 ml灌流固定。取1 mm×1 mm

11、5;1 mm大小的腦組織（海馬CA1區(qū)），4戊二醛固定2 h，1鋨酸固定2 h，經(jīng)梯度酒精及95%丙酮逐級(jí)脫水，氧化丙烯浸透1 h，Epon 812環(huán)氧樹脂包埋聚合，37過(guò)夜，60 24 h，醋酸雙氧鈾檸檬酸鉛雙重染色后，在JEM1200EX電子顯微鏡下進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察，攝片。1.8  腦組織勻漿中SOD、MDA、NO含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，斷頭取腦，切取缺血側(cè)大腦中動(dòng)脈（MCA）供血區(qū)腦組織0.1 g，用冰生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，4離心(3 000 r/min)15 min，取上清，測(cè)定SOD活性、MDA及NO含量。1.9  統(tǒng)計(jì) 學(xué)處理 數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。 2  結(jié)  果 2.1  FMCL對(duì)CIR大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分(3.65&