1、真誠為您提供優質參考資料，若有不當之處，請指正。膠質瘤的免疫治療研究進展劉海龍摘要 膠質瘤是神經系統最常見的惡性腫瘤，由于其較高惡性程度，尤其是三期和四期膠質瘤，以及高復發率，其治療方式若單純依靠手術治療，則很大程度上難以完全切除，甚至不能切除。免疫治療在對抑制腫瘤細胞生長、誘發腫瘤細胞凋亡等方面起到了重要作用，主要的免疫療法包括使用重組細胞因子、單克隆抗體、分子疫苗、過繼性淋巴細胞等。免疫治療輔助手術等其他治療方式，可明顯抑制腫瘤細胞生長，減緩其他治療方式的毒副作用，延長患者生存期。關鍵詞 膠質瘤 免疫治療膠質瘤起源于神經上皮組織，占顱內腫瘤的4050%，是神經系統最常見的惡性腫瘤。分為星形

2、膠質細胞瘤、少突膠質細胞瘤、室管膜瘤、髓母細胞瘤、多形性膠質細胞瘤等。根據北京神經外科研究所統計，膠質瘤的綜合發病年齡在3040歲范圍內，以大腦半球膠質瘤最為多見。根據Knudso的“二次打擊”學說，目前雖對膠質瘤的發病原因缺乏完全清楚的認識，但認為誘發腫瘤的因素包括遺傳因素、物理因素、化學因素、生物因素等的綜合作用。臨床表現以顱內壓增高癥狀以及局灶性癥狀和體征為主，如頭痛、嘔吐、運動障礙、感覺障礙等。隨著醫學的發展和人們對膠質瘤認識的深入，對其治療已經由原來單純依靠手術治療發展為如今的以手術治療為主的綜合治療，包括手術、化療、放療、基因治療、免疫治療、中醫中藥治療、心理治療等。目前，人們逐漸

3、認識到膠質瘤的發病與患者的免疫力低下有關，故對于膠質瘤的免疫治療關注程度日益加深。膠質瘤的免疫治療主要是通過增強機體自身免疫，來達到防御腫瘤和殺傷腫瘤的目的，被稱為是繼手術、放療、化療之后的第四種治療模式，具有特異性強、毒副反應輕、長期記憶等特點。人體免疫系統主要包括非特異性免疫和特異性免疫兩大類，而特異性免疫主要通過細胞核體液免疫發揮作用。其中巨噬細胞、CD8+T淋巴細胞對腫瘤的監測和殺傷起到了重要作用。免疫治療則主要是通過調控非特異性免疫中的巨噬細胞和特異性免疫中的CD8+T淋巴細胞起作用，包括重組細胞因子、單克隆抗體、分子疫苗、過繼性淋巴細胞、樹突狀細胞等幾種方法。一、 細胞因子細胞因子

4、是腫瘤免疫治療的核心，膠質瘤細胞本身即可分泌多種細胞因子如IL-2、TGF-10、PGE-2等，這些細胞因子協同或拮抗，相互作用構成細胞因子網絡，促使腫瘤細胞發生、發展、復發和轉移等。目前，研究人員希望可以通過一種或者幾種細胞因子作用于人體，發揮其自身的細胞毒作用或輔助特異性免疫作用，達到殺傷腫瘤的目的。細胞因子治療膠質瘤的作用機制主要有：1）輔助特異性細胞毒性T細胞反應；2）增強NK細胞的溶解細胞作用；3）刺激T細胞、NK細胞分泌IFN-；4）血管形成抑制劑；5）增強腫瘤細胞MHC抗原表達，從而增強腫瘤細胞免疫原性；6）抑制部分細胞因子對免疫系統的調節；7）抑制腫瘤細胞增長，誘導分化。目前，

5、經常使用的細胞因子主要有干擾素、腫瘤壞死因子、表皮生長因子等。Ohno等人和Ogbomo等人主要對EGFRv展開研究，發現膠質瘤細胞表面特異性表達3C10/CD3，EGFRv可以滲透到腫瘤內部作用于腫瘤細胞，明顯延緩膠質瘤細胞的生長。干擾素在治療膠質瘤中的作用已被多數研究人員重視，部分使用IFN-，部分使用IFN-。田道鋒、郭宗澤和李光宗等人主要對IFN-進行了研究。田道鋒等人將MSCs-hIFN-瘤內注射觀察荷瘤鼠的臨床表現和生存時間，使用MRI顯示腫瘤大小，幷體外培養C6膠質瘤組織病理學檢查和腫瘤組織IFN-免疫組化染色，結果發現體外培養C6細胞的生長受到不同程度的抑制，體內發現注射MSC

6、s-hIFN-可以使腫瘤體積明顯縮小。郭宗澤等人則使用IFN-基因轉染膠質瘤來探討其對膠質瘤的生長抑制和誘導凋亡作用，結果示IFN-基因轉染可以明顯抑制腫瘤細胞增殖，轉染后48h和72h對腫瘤生長的抑制率達到37.3%和46.0%。IFN-基因轉染還可以誘導腫瘤細胞凋亡，轉然后48h和72h腫瘤細胞凋亡率達到31.7%和48.2%。李光宗等人通過建立陽離子脂質體介導IFN-基因轉染也同樣發現其可以抑制人膠質瘤的生長。王雪峰、鄧懷慈、張曉智和劉曉謙等人主要對IFN-進行了較為深入的研究。王雪峰等人通過逆轉錄病毒將IFN-基因導入大鼠膠質瘤細胞制成PA317IFN-細胞株，幷瘤內注射，觀察大鼠的生

7、存期后，結果發現治療組的大鼠平均生存期約為對照組的2倍。除單獨使用一種細胞因子治療膠質瘤外，研究人員逐漸嘗試將多種細胞因子聯合使用，如鄧懷慈等人將全反式維甲酸與IFN-聯合使用，其協同抑制人膠質瘤細胞系SHG-44惡性表型幷可誘導腫瘤細胞凋亡；劉曉謙等人將IL-4與IFN-基因聯合使用，王玉寶等人將腫瘤壞死因子與干擾素聯合使用治療膠質瘤，也同樣發現兩者具有明顯系統作用。雖然使用細胞因子治療膠質瘤已經取得一定進展，但仍然存在著關鍵問題尚未解決，如體外實驗雖然顯示了明顯的抗瘤效應，但是體內毒副作用明顯卻限制了其應用；使用細胞因子的劑量也較難掌握，劑量過小則難以受到成效，劑量過大則易導致血管源性腦水

8、腫。通過對前人實驗及經驗的總結，可以看出未來使用細胞因子治療膠質瘤主要應沿著兩個方向繼續發展：1）應更加提倡多種細胞因子聯合應用；2）目前多使用細胞因子全身靜脈給藥，而顱內或瘤內局部用藥效果更優。二、 單克隆抗體單克隆抗體可以通過多種機制治療膠質瘤，主要有：1）未經修飾的單抗通過效應細胞如巨噬細胞或補體殺傷膠質瘤細胞；2）拮抗腫瘤細胞因子如EGF-等發揮作用；3）利用單抗特異性結合靶點的特異性將抗癌藥物、藥物前體、毒素或放射性核素特異導向瘤體起到殺傷作用。其中，以單抗為特異性載體，以化療藥物、生物毒素和放射性核素為“生物彈頭”是單抗抗腫瘤的最常用免疫療法。因為單抗能夠特異性的識別和結合腫瘤細胞

9、幷將其攜帶的生物彈頭作用在腫瘤細胞上，起到殺傷腫瘤細胞作用。通常生物彈頭主要使用光動力、放射性核素、化療藥物等。詹奇等人將VCAM-1單克隆抗體與光動力聯合治療膠質瘤，發現光動力聯合抗VCAM-1抗體組、光動力組、抗VCAM-1抗體組的抑瘤率分別為80.7%，67.2%和54.6%。傅相平等人將單抗與放射性核素131I交聯對膠質瘤內放免治療，結果示單抗與131I交聯后靶向于腫瘤細胞核，并將負載的放射性核素輸送到腫瘤細胞內，由內向外摧毀腫瘤。陳劍等人將順鉑與單抗Anti-uPAR交聯抑制膠質瘤的增殖和uPAR蛋白的表達。除此之外，還有學者單獨使用單抗治療膠質瘤。王曉澎、游潮等人體外培養U251細

10、胞分為對照組、低劑量組和高劑量組，分別加入不同劑量的CD147/HAB18G單抗封閉細胞表面的CD147分子，并用免疫熒光法檢測各組細胞膜上MCT1表達分布改變，結果示相對對照組低劑量組和高劑量組其細胞膜有效表達均減少，CD147/HAB18G單抗通過干擾CD147對MCT1表達的引導使膠質瘤細胞膜上MCT1有效成分分布減少，從而抑制腫瘤生長。雖然單克隆抗體交聯生物彈頭能夠抑制膠質瘤細胞生長，但是由于鼠抗免疫原性強，限制了其在臨床中的應用。除此之外，如使用免疫毒素，其進入瘤體較少，彌散性差，非特異性結合正常組織，被快速清除。三、 分子疫苗分子疫苗是將腫瘤細胞或其合成的抗原肽制成腫瘤疫苗，保持其

11、抗原性，誘發宿主特異性的體液免疫或細胞免疫，從而通過患者自身殺滅腫瘤細胞。國內外對分子疫苗的研究主要集中在致敏樹突狀細胞、高免疫原性膠質瘤細胞疫苗、卡介苗等。目前，樹突狀細胞被認為是最具應用前景的腫瘤疫苗。研究人員多使用樹突狀細胞作為載體，將從膠質瘤中提取的抗原肽負載到樹突狀細胞上制備腫瘤疫苗，如趙麗波等人使用從膠質瘤中提取的熱休克蛋白-腫瘤肽提取物（HSP-PC），卜寧等人使用膠質瘤釋放的exosomes負載到樹突狀細胞上，花瑋等人則使用膠質瘤干細胞抗原肽。復旦大學附屬華山醫院花瑋等人選取了5例復發膠質瘤患者，每周一次皮下接種DC疫苗，共三次，聯合替莫唑胺化療，結果示5例膠質瘤標本中均含有不

12、同比率的CD133+細胞，DC疫苗接種后患者無明顯不良反應，聯合化療能延長患者生存期。另外，Ueda等人將從膠質瘤細胞或膠質瘤干細胞中提取的SOX6作為抗原肽致敏CTLs，并將其注射到荷瘤鼠中，結果示SOX6分子疫苗使HLA-A24或HLA-A2陽性的膠質瘤患者腫瘤生長受到抑制。除使用抗原肽、熱休克蛋白等，董超等人則通過溶瘤病毒新城疫病毒的溶瘤作用，提高免疫細胞殺傷腫瘤作用。新城疫病毒（NDV）其2HN基金表達產物能夠吸附唾液酸（SA）的受體和有神經氨酸酶（NA）催化的唾液酸裂解，其所具有的神經氨酸酶活性，可以去除腫瘤細胞表面的唾液酸，從而增強機體的免疫識別能力。目前的研究多數是以樹突狀細胞作

13、為載體，將一些具有抗原活性的物質負載其上。未來的研究更應該突破僅有樹突狀細胞的局限，進而研究病毒，如新城疫病毒、逆轉錄病毒等修飾自體瘤細胞。四、 過繼性免疫治療過繼性免疫治療，又稱為被動免疫療法，是取對腫瘤有免疫作用的供者淋巴細胞轉輸給腫瘤患者，或取患者自身的免疫細胞體外活化、增殖后，再輸入患者體內，使其在患者體內發揮抗腫瘤作用。常見的有CTL（細胞毒性T淋巴細胞）、CIK（細胞因子誘導的殺傷細胞）、NK細胞、巨噬細胞、LAK（淋巴因子激活的殺傷細胞）和TIL（腫瘤浸潤性淋巴細胞）等都在殺傷腫瘤細胞中起作用。目前，研究人員多使用患者自身的免疫細胞，通過細胞因子在體外活化，再回輸入患者體內。如張

14、春、常賀等人使用CD3與IL-2協同誘導PBMC，羅俊生等人先后使用PHA、CD3與IL-2以及人身皂苷、CD3與IL-2協同誘導PBMC，結果都顯示多種細胞因子同時應用具有協同效應，能夠使CD3AK細胞成為較CD3AK細胞增值能力、殺傷活性更強的免疫效應細胞。王啟宏等人通過體外培養人胚胎胸腺細胞（ETC）表面抗原的轉變，比較不同源LAK細胞、活化ETC聯合對TJ905細胞的體外作用效果，發現單獨ETC在體外對膠質瘤細胞無抑XXX用，而不同源LAK細胞核活化ETC聯合對TJ905人腦膠質瘤細胞具有殺傷作用。嚴欣江等人將IL-13受體2抗原肽致敏DC-CIK細胞，幷將其與U251細胞共培養24小

15、時后，檢測其對U251細胞殺傷率。在2007年，青島大學附屬醫院神經外科宮安靜等人就對DC誘導的CTLs與CIK及LAK細胞對膠質瘤的殺傷作用作一比較，發現從人外周血中誘導出的DC負載膠質瘤抗原后，激活的CTLs在體外對膠質瘤細胞能產生高效而特異的殺傷作用，明顯強于CIK細胞和LAK細胞。使用過繼性免疫治療方法治療膠質瘤關鍵是獲得足夠的殺傷活性強的免疫活性細胞。目前主要使用的LAK細胞、CIK細胞等靜脈注射或局部應用，因其數量有限、殺傷活性低下等缺陷限制了其在臨床中的應用與發展。使用多種細胞因子協同誘導，或將過繼性淋巴細胞與其他免疫療法如細胞因子、單克隆抗體等聯合使用治療膠質瘤已成趨勢，但如何

16、盡量在體外獲得足夠數量、足夠殺傷力的過繼性免疫細胞，仍然是未來需要重點關注的課題。五、 樹突狀細胞細胞免疫介導的免疫應答在機體抗腫瘤過程中起到了重要作用，T細胞的致敏、激活和擴增均依賴于抗原提呈細胞（APC）提呈相應的抗原肽幷提供共刺激信號，而樹突狀細胞則是目前發現的功能最強的抗原提呈細胞。其具有其他抗原提呈細胞所不具有的特性：1）能高水平的表達MHC類分子；2）具有表達、攝取、轉運抗原的特殊膜受體；3）能有效攝取和處理抗原，然后遷移至T細胞區域，具有一個成熟化的過程；4）活化未致敏的T細胞；5）抗原提呈效率高，用少量的抗原和少量的樹突狀細胞可激活T細胞。樹突狀細胞在膠質瘤的治療中也發揮了重要

17、作用。Liau等人利用酸洗脫方法從膠質瘤細胞中提取出腫瘤抗原肽，從小鼠骨髓中分離干細胞再經過體外GM-CSF和IL-4的刺激，擴增得到樹突狀細胞，在體外以腫瘤抗原肽沖擊樹突狀細胞，隨后回輸到小鼠體內，可顯著延長小鼠生存期。免疫組化實驗證明，與對照組相比，CD8+和CD4+T細胞在病灶周圍及病灶中明顯增多。Yu等人應用樹突狀疫苗治療膠質瘤患者，7例患者接受治療。其中，4例接種后顯示CTL活性增強，2例在接種前后均顯示CTL活性增強。Okada等人將自體膠質瘤細胞沖擊的樹突狀細胞回輸于患者體內，結果發現CD8+T細胞在病灶周圍及病灶中明顯增多。國內，研究人員使用多種發放來致敏樹突狀細胞制備疫苗，如

18、花瑋和宮安靜等人使用從膠質瘤干細胞中提取的抗原肽，吳立權等使用加溫處理的U251細胞，苗壯等人使用凋亡膠質瘤細胞與T淋巴細胞、樹突狀細胞共培養，俞建波等人則使用的是G422膠質母細胞瘤RNA致敏樹突狀細胞。將致敏DC注入體內，發現DC疫苗的CTL活性明顯增強，DC細胞對荷瘤鼠有明顯的免疫抑XXX用，能夠延長動物生存期。樹突狀細胞應用于膠質瘤的免疫治療仍然存在著許多問題，如1）樹突狀細胞數量的擴增比較緩慢；2）功能維持不甚持久；3）與腫瘤抗原肽結合難以持久；4）免疫逃避。這些問題都將成為未來研究的重要方向。首先，對于膠質瘤的幾種免疫治療方法，如細胞因子、樹突狀細胞等，仍是單純使用以求達到療效，未

19、來應更加注重多種方法的聯合使用，如細胞因子協同過繼性淋巴細胞治療，爭取創造多種免疫療法的協同作用；其次，目前不論是分子疫苗還是過繼性淋巴細胞，多數是通過靜脈給藥，往往因不易或無法通過血腦屏障療效不甚顯著而毒副作用較為明顯，未來可以探討局部應用免疫療法；再次，目前只是局限于將免疫治療方法用于腫瘤發病或復發患者，未來更應注重篩查膠質瘤高危患者，將細胞因子或分子疫苗等用于預防其發生或延緩其發生，真正起到“疫苗”作用。目前，針對膠質瘤的治療方式仍然以手術治療為首選，但因其高復發率，以及尤其三期、四期高惡性程度，單純手術治療遠遠不能達到理想效果。隨著人們對免疫學、分子生物學研究的深入，以及基因工程、細胞

20、生物工程技術的發展，膠質瘤的免疫治療日趨成為備受關注的課題。參考文獻1、 王忠誠、于春江，等.王忠誠神經外科學，第一版. 湖北科學技術出版社，20052、 鐘南山、陸再英，內科學，第七版. 人民衛生出版社，20073、 金伯泉，醫學免疫學，第七版. 人民衛生出版社，20074、 田道鋒，陳謙學，等.轉染人IFN-基因的骨髓間充質干細胞治療大鼠顱內膠質瘤，中華實驗外科雜志，20105、 郭宗澤，張曉春，等. IFN-轉染對膠質瘤的治療和細胞因子的調節作用，解剖學進展，20076、 李光宗，劉薇，等.陽離子脂質體介導IFN-基因轉染對人膠質瘤細胞的抑XXX用，中國醫科大學學報，20057、 王雪峰

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