1、志賀氏菌檢驗革蘭氏革蘭氏陰性短桿菌陰性短桿菌增菌增菌增菌增菌分離分離初步生化試驗初步生化試驗血清凝集試驗血清凝集試驗革蘭氏染色革蘭氏染色增菌稀釋瓶或具稀釋瓶或具塞廣口瓶塞廣口瓶固體樣品：固體樣品：25g（電子天平）（電子天平）液體樣品：液體樣品：25mL（25mL吸量管）吸量管） + 225mLGN增菌液（量筒），混勻。增菌液（量筒），混勻。 培養（于培養（于361培養培養68h）注意：液體樣品先用無菌注意：液體樣品先用無菌NaOH或或HCl調節調節PH至至7.0。從陽性增菌液中用接種環取從陽性增菌液中用接種環取1環環HE瓊脂平板，劃線瓊脂平板，劃線1環環麥康凱瓊脂平板，劃線麥康凱瓊脂平板，劃

2、線361 1824h培養培養麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂平板平板HE瓊脂平瓊脂平板板分離開始處開始處開始處開始處平板劃線示意圖平板劃線示意圖HEHE瓊脂平板上的典型瓊脂平板上的典型菌落特征：呈透明，菌落特征：呈透明，不發酵乳糖菌落不發酵乳糖菌落麥康凱瓊脂平板上的麥康凱瓊脂平板上的典型菌落特征：呈透典型菌落特征：呈透明，不發酵乳糖菌落明，不發酵乳糖菌落初步生化試驗取有明顯典型菌落的取有明顯典型菌落的HE或麥康凱瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板（在放陽性物品處）（在放陽性物品處）或或典型菌落典型菌落（同一菌落）（同一菌落）三糖鐵斜面：先劃線，后穿刺三糖鐵斜面：先劃線，后穿刺葡萄糖半固體：穿刺葡萄糖半固體：穿刺于于

3、361培養培養1824h于于361培養培養1824h斜面劃線方法斜面劃線方法斜面穿刺方法斜面穿刺方法三糖鐵斜面培養結果：三糖鐵斜面培養結果：上層紅色，下層黃色上層紅色，下層黃色（產酸）（產酸）對照試驗對照試驗紅色：產堿紅色：產堿黃色：產酸黃色：產酸黑色：產硫化氫黑色：產硫化氫葡萄糖半固體培養葡萄糖半固體培養結果結果：沿穿刺線：沿穿刺線生長，無動力生長，無動力對照試驗對照試驗葡萄糖半固體葡萄糖半固體革蘭氏染色結果：革蘭氏染色結果： G-（紅色，短桿菌，無莢膜，（紅色，短桿菌，無莢膜，無芽孢）無芽孢）從有典型志賀氏菌的三糖鐵斜面從有典型志賀氏菌的三糖鐵斜面取取1環，染色。環，染色。 在無菌室中固在

4、無菌室中固定，到微生物定，到微生物實訓室染色實訓室染色血清凝集試驗從有典型志賀氏菌的從有典型志賀氏菌的三糖鐵斜面上用接種三糖鐵斜面上用接種環取環取1環環玻片玻片用記號筆在玻片用記號筆在玻片中間畫條線中間畫條線 滴滴12滴滅菌滴滅菌生理鹽水生理鹽水滴滴12滴志賀滴志賀氏菌多價血清氏菌多價血清結果：志賀氏菌多價血清：凝固結果：志賀氏菌多價血清：凝固 滅菌生理鹽水：不凝固滅菌生理鹽水：不凝固革蘭氏染色步驟： 涂片涂片 火焰固定火焰固定結晶紫初結晶紫初染染 水洗水洗 碘液媒染碘液媒染 乙醇乙醇脫色脫色 水洗水洗 吸干吸干 番紅或番紅或沙磺復染沙磺復染 水洗水洗 干燥干燥 鏡鏡檢檢 涂片：在載玻片中央滴

5、一滴生理鹽水，用無菌操作法挑取涂片：在載玻片中央滴一滴生理鹽水，用無菌操作法挑取菌種于生理鹽水中，調勻并涂成薄膜。注意：生理鹽水不菌種于生理鹽水中，調勻并涂成薄膜。注意：生理鹽水不宜過多；涂片必須均勻。宜過多；涂片必須均勻。 火焰固定：載玻片通過火焰火焰固定：載玻片通過火焰1 2 次固定，不可過熱，以載次固定，不可過熱，以載玻片不燙手背為宜。玻片不燙手背為宜。 結晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結晶紫結晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結晶紫1滴，滴，染色染色1min。 水洗：用自來水沖洗至沖下的水無色為止。水洗：用自來水沖洗至沖下的水無色為止。 碘液媒染：加碘液媒染碘液媒染：加

6、碘液媒染1min，然后用水沖洗至沖下的水，然后用水沖洗至沖下的水呈無色為止。呈無色為止。 乙醇脫色：用吸水紙將載玻片上的水吸凈，用乙醇脫色：用吸水紙將載玻片上的水吸凈，用95%的乙醇的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出現紫色為止，大滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出現紫色為止，大約需要約需要20 30s。立即用自來水沖洗乙醇約。立即用自來水沖洗乙醇約30s，用吸水，用吸水紙吸干水分。紙吸干水分。 番紅或沙磺復染：在涂片薄膜上滴加番紅番紅或沙磺復染：在涂片薄膜上滴加番紅1滴，染色滴，染色1 2 min。 水洗：用水水洗：用水沖洗至沖下的水呈無色為止。沖洗至沖下的水呈無色為止。 干燥：于室溫下自然干燥。干燥：于室溫下自然干燥。