1、實驗三 細胞膜的通透性和細胞的吞噬活動觀察【 目的要求 】1、通過實驗觀察，加深對巨噬細胞吞噬能力、生物膜的選擇通透性等生理現象的理解。2、進一步掌握臨時裝片技術和顯微鏡的使用方法。【 實驗原理 】將紅細胞置于低滲液中，因為細胞內的溶質濃度高于細胞外，所以液體很快進入細胞內，使紅細胞脹破，血紅蛋白散出，即溶血。將紅細胞置于各種等滲溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質分子的通透性，有的分子能通過，有的不能通過。溶質分子種類不同，透過的速度也有差異。當溶質分子進入紅細胞內時，胞內溶質增加，導致水分攝入，紅細胞膨脹到一定程度時，細胞膜破裂而出現溶血，溶血現象發生時濃密的紅細胞懸液（不透明）會變成紅色透明的

2、血紅蛋白溶液。高等動物體內存在著具有防御功能的吞噬細胞系統，它由粒細胞和單核細胞等白細胞構成，是機體免疫系統的重要組成部分。在白細胞中，以單核細胞和粒細胞的吞噬活動較強，故它們常被稱為吞噬細胞，單核細胞在骨髓中形成后會進入血液，通過毛細血管進入肝、脾、淋巴結及結締組織中進一步發育，分化為巨噬細胞（macrophage）。巨噬細胞是機體內的一種重要的免疫細胞，具有非特異性的吞噬功能，當機體受到細菌等病原體和其它異物侵入時，巨噬細胞將向病原體或異物游走（趨化性），當接觸到病原體或異物時，伸出偽足將其包圍并進行內吞作用，將病原體或異物吞入細胞，形成吞噬泡，進而初級溶酶體與吞噬泡發生融合，將異物消化分

3、解掉。本實驗將觀察到小鼠的巨噬細胞對進入其體內的雞紅細胞進行吞噬的情況。【 器材與試劑 】1、器材：光學顯微鏡、2ml注射器、載玻片、刻度吸管、橡皮吸球、試管及試管架、手術剪、小鑷子、記號筆等。2、材料：小白鼠、1%雞紅細胞懸液、10%兔或人紅細胞懸液。3、試劑：6%淀粉肉湯（含臺盼藍）、生理鹽水、0.17mol/L氯化銨、0.17mol/L氯化鈉、0.17mol/L硫酸鈉、0.17mol/L硝酸鈉、0.17mol/L草酸銨、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、500u/ml肝素。4、試劑的配制：（1） 6%的淀粉肉湯：稱取牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、

4、氯化鈉0.5g和臺盼藍（trypan blue）0.3g，分別加入到100ml蒸餾水中溶解，再加上可溶性淀粉6g，混勻后煮沸滅菌，置于4ºC保存，使用時溫浴溶解。（2） 0.17mol/L氯化鈉溶液：稱取4.967g氯化鈉溶于500ml蒸餾水中。（3） 0.32mol/L葡萄糖溶液：稱取28.83g葡萄糖溶于500ml蒸餾水中。（4） 0.32mol/L甘油溶液：量取11.7ml甘油(C3H5(OH)3 1.26g/ml) 加蒸餾水500ml混勻（5）。0.32mol/L乙醇溶液：量取9.33ml無水乙醇加蒸餾水至500ml混勻。（6） 500u/ml肝素：取安瓿裝肝素注射液一支（1

5、2500u），用注射器抽出2ml肝素加入到23ml生理鹽水中混勻，4ºC保存。（7） 1%雞紅細胞懸液：取雞血1ml（加肝素抗凝）加入到99ml生理鹽水中。（8） 10%兔紅細胞懸液：取10ml兔血（加肝素抗凝）加入到90 ml生理鹽水中混合均勻【 內容與方法 】一、紅細胞膜通透性的觀察每組一套實驗器材，注意各種試劑的標簽。試管要根據實驗所要裝的溶液種類來編號，移液管也要對應編號，切勿混淆弄錯，交叉使用，以保證實驗結果的準確性。1、輕輕搖勻裝有10%的人紅細胞懸液的小瓶，隔著瓶看不見后面紙上的字，說明該紅細胞懸液是不透明的。2、觀察人（或兔）紅細胞在低滲溶液中的溶血現象：將0號試管加

6、入0.3 ml人紅細胞懸液，在加入3 ml蒸餾水，輕輕搖勻，注意溶液顏色的變化，隔著試管看后面紙上的字，能否看清楚？說明什么問題？記好時間。3、觀察人（或兔）紅細胞對各種物質的選擇通透性： 在1號試管中加入0.3ml人（或兔）紅細胞懸液，再加入3ml 0.17mol/L的氯化鈉，輕輕搖勻。觀察是否溶血。 分別將下列三種等滲液按上述方法進行實驗，并記下溶血時間。0.3ml人（或兔）紅細胞懸液+3ml 0.32mol/L乙醇（2號試管）。0.3ml人（或兔）紅細胞懸液+3ml 0.32mol/L葡萄糖（3號試管）。0.3ml人（或兔）紅細胞懸液+3ml 0.32mol/L甘油（4號試管）。將實驗結

7、果填入下表：編號溶血種類是否溶血溶血時間結果分析0蒸餾水1NaCl溶液2乙醇3葡萄糖4甘油二、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動觀察在實驗前兩天，每天每只小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯1ml（含臺酚藍），實驗前先給每只小鼠腹腔注射1%雞紅細胞懸液1ml。25分鐘后再向腹腔注射0.5ml生理鹽水。3分鐘后用頸椎脫臼法處死小鼠。剪開腹腔，用注射器或吸管吸取腹腔液，滴一滴在載玻片中央，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察。在低倍鏡下找到許多圓形或不規則形狀的巨噬細胞，移至視野中央，換高倍鏡觀察，發現細胞質中有數量不等的藍色圓形小顆粒（吞入含臺酚藍淀粉肉湯所形成）；還可以見到少量黃色橢圓形有細胞核的雞紅細胞。在視野中可見到巨噬細胞吞噬雞紅細胞的不同階段。有的紅細胞緊貼在巨噬細胞表面；有的紅細胞已部分被吞入；有的巨噬細胞已吞入1個或多個紅細胞，形成了吞噬泡。圖3-1 細胞的吞噬活動1. 紅細胞與巨噬細胞接觸 2. 3. 正在被吞噬的紅細胞4已經被吞噬的紅細胞，并形成吞噬體