1、專題 2 微生物的培養與應用課題 2 分解尿素的細菌的分離與計算課時重難點重點】 對土樣的選取和選擇培養基的配制。難點】 對分解尿素的細菌的計數。典型例題：1下列關于分解尿素的細菌，說法正確的是（A.以尿素作為唯一碳源B.能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C.環境中含有大量的尿素誘導該細菌產生了分解尿素的特性D.以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養基來培養該細菌后不會使酚紅指示劑變紅2原油含有大量致癌的“多環芳烴”，分子結構十分穩定，有些細菌可以利用原油中的多環芳烴為碳源，在培養基中形成分解圈。某小組以如何篩選出能降解原油的菌株并投入除污為課題設計了有關實驗。有關說法正確的是A用于篩選目

2、的菌株的培養基其主要特點是以原油（多環芳烴）為唯一碳源B培養基配制完成之后需進行消毒處理CD在選擇培養基上形成的菌落，即為能分解多環芳烴的目的菌種 篩選出目的菌種后，可用平板劃線法在培養基上進行接種和計數3關于生物技術實踐中的有關檢驗，不正確的是（A. 在果酒制作實驗結束時要檢驗是否有酒精產生，正確的操作步驟是先在試管中加入適量的發酵液,然后再加入硫酸和重鉻酸鉀的混合液B. 在微生物培養中，檢驗培養基是否被污染的方法是用一組不接種或接種無菌水的培養基與接種培養物的培養基一起培養C. 檢驗以尿素為唯一氮源的培養是否分離出了分解尿素的細菌，方法是在培養基中加入酚紅指示劑,若指示劑變紅，則說明分離成

3、功D. 檢驗胡蘿卜素純度的方法是紙層析法，原理是不同的色素分子在層析液中的溶解度不同，故隨層析 液在濾紙上擴散的速度不同，若樣品中有雜質，則會出現不同的色素點（帶）4尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制選擇培養基時（A.葡萄糖在培養基中越多越好B.尿素分解菌有固氮能力，故培養基中只需無機氮5.下列生物學實驗操作，能夠順利達到實驗目的的是A. 將果泥和果膠酶分裝在不同試管中恒溫處理后再混合，以探究果膠酶的最適溫度B. 洗滌紅細胞時，需要加入五倍體積的蒸餾水C. 土壤浸出液接種于牛肉膏蛋白胨培養基上以篩選出能分解尿素的細菌D. 根據SDS-凝膠電泳的結果可判斷蛋白質的分子量大小6.下列有關生物技術實

4、踐的敘述，不正確 的是A.制作果醋時應不斷通入無菌空氣B.在土壤中分解尿素的細菌的分離和計數實驗中，應采用平板劃線法C.通過比色法來檢測亞硝酸鹽含量需要制備標準顯色液(2)腐乳制作主要菌種是它能產生兩種酶將水豆腐中兩種主要大分子有機物分解成D.饑餓時，胰高血糖素分泌量上升，促進肝糖原和肌糖原分解7.下列是以酵母菌為材料進行的實驗，有關敘述錯誤的是(A.探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚藍檢測產生的COB.用酵母菌發酵釀制果酒，選擇酸性重鉻酸鉀檢測產生的酒精C.探究酵母菌種群數量變化，應設空白對照排除無關變量干擾D.用稀釋涂布平板法培養計數，應選擇有30300菌落數的平板&【生物一選修

5、1:生物技術實踐】有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題:(1)在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養基上，從功能上講,該培養基屬于培養基。(2)(4)通常情況下，在微生物培養過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、。無菌技術要求實驗操作應在附近進行，以避免周圍環境中微生物的污染。純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力9 人和哺乳動物的尿中含有尿素，大量尿素的存在會對環境造成污染。土壤中有些細菌含有脲酶，可

6、通過降解尿素作為其生長的氮源。現對土壤中的這類細菌進行分離實驗，請回答下列問題:(1) 分離培養細菌時必須進行無菌操作，包括培養基和各種器皿都必須是無菌的，培養基常用的滅菌方法有(2) 將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養。在稀釋土壤溶液的過程每一步都要在旁進行操作。接種后的培養皿于37C的中培養。培養基。(3 )用含有酚紅指示劑的培養基篩選能分泌脲酶的細菌，從功能上劃分該培養基屬于若培養基中存在有分解尿素的細菌，其菌落周圍會出現紅色環帶，這是由于尿素被分解產生的使pH升高，酚紅指示劑產生的顏色變化，從而證明這一菌株可以尿素為氮源。變色區域越大，表明該菌株利用尿素的能力(4)與全營養培養基

7、中的菌落相比，以尿素為氮源的培養基中菌落數A.多 B .少 C .相等 D .幾乎為零 10.生物選修I生物技術實踐(15分)尿素是一種重要的農業肥料，經微生物分解后能更好的被植物利用。某生物興趣小組試圖探究土壤中微(目的菌)。培養基成分如下表所示。將表中物質溶解后，用蒸餾水定容到lOOmL。實驗過程如右圖所示：KHsF 1. 4g2.1gM必6 - 7壓00.2s葡萄榨lOe尿素Ig瓊脂1宛90 回答下列問題：(1) 該培養基能篩選出目的菌的原因是 圖中將細菌轉到固體培養基上接種時，可采用的方法是。初步篩選出來的菌種還需要進一步的鑒定：在培養基中加入指示劑，接種并培養初步篩選的菌種，若指示劑

8、變生物對尿素是否有分解作用，設計實驗并成功篩選到能高效分解尿素的細菌色，則可說明該菌種能夠分解尿素。(3)在實驗中，下列材料或用具需要滅菌的是，需要消毒的是(填序號)。培養細菌的培養基與培養皿玻棒、試管、錐形瓶和吸管實驗操作者的雙手(4)在進行分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從培養基上篩選出大約50個菌落，而其他同學只選擇出大約20個菌落。A同學的實驗結果產生的原因可能有(填序號)。所取土樣不同培養基被污染接種操作錯誤沒有設置對照實驗(5)實驗結束后，使用過的培養基應該進行處理后，才能倒掉。11.生物一選修1生物技術實踐(15分)請回答下列生物技術方面的問題:(1)在傳統發酵技術中，果醋的制作

9、往往在果酒制作基礎上進行，請用相關反應式表示:人體能吸收的具鮮味的小分子有機物。分析下面培養基的配方：NaN KHPO、NaHPO、MgSO?7HO KCI、HQ若此培養基用于培養分解尿素的細菌，則應除去上述成分，并加入物質。該培養基能否培養月季花藥。胡蘿幣1果稱.果酷制件漩程（1）圖1中方框內應該填寫的的實驗步驟是，此步驟中起主要作用的微生物是，其發酵（需要/不需要）氧氣，適宜的發酵溫度范圍是（2）根據培養基的成分判斷，該同學能否分離出土壤中分解尿素的細菌?能/不能），原因（3）如果想進一步對初步篩選得到的菌株進行純化并計數，可采用的接種方法是。通常鑒定分解尿素的細菌的方法是在培養基中加入指

10、示劑。為什么? 提取胡蘿卜素的過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是卜素粗品鑒定的方法是 12.生物一一選修1:生物技術實踐專題（15分）F面是某同學制作果酒和果醋的實驗流程圖以及預分離土壤中能分解尿素的細菌的培養基配方，請回答挑選葡萄i沖洗一 採汁KH2PD4NaaHPO4MgSO4-7HiO酒箱發酵114 g;3丄呂0.3 gi1果酒果酵罷as葡萄糖尿素瓊脂l.Og10.Ogl.Og15.0g有關冋題。預分離土壤中能分解屎素御田菌的培養基配方三、授課過程:（一）基礎知識1.尿素是一種重要的氮肥，農作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通過土壤中的細菌將尿素分解為，這是因為細菌能合成

11、，這樣也適2 科學家能從熱泉中把耐熱細菌篩選出來是因為 用于實驗室中微生物的篩選，原理是點評：生物適應一定環境，環境對生物具有選擇作用。所以通過配制選擇培養基、控制培養條件等選 擇目的微生物。1思考1在該培養基配方中，為微生物的生長提供碳源的是，提供氮源的的是，瓊脂的作用是1思考2該培養基對微生物（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機制是3 .在統計菌落數目時，常用來統計樣品中活菌數目的方法是。除此之外,也是測定微生物數量的常用方法。【補充】顯微鏡直接計數是測定微生物的方法。公式：觀察到的紅細胞平均數：觀察到的細菌平均數=紅細胞含量：細菌含量4.采用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，培養基表

12、面生長的一個菌落，來源于。通過統計，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數在的平板進行計數。3從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數的計算方法是4利用稀釋涂布平板法成功統計菌落數目的關鍵是5位同學的結果接近真實值。你認為這兩位同學的實驗需要改進的操作是5.統計的菌落數比活菌的實際數目。這是因為當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到的只是菌落。因此，統計結果一般用來表示。6 .設置對照的主要目的是7 .對照實驗是指除了的條件外，其他條件都的實驗。滿足該條件的稱為組,未滿足該條件的稱為組。（二）實驗設計1.實驗設計的內容包括2 .根據圖示2-7填寫以下實驗流程:配制土

13、壤溶液系列稀釋涂布平板與培養菌落計數4.分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是，其目的是保證獲得的平板。細菌稀釋度為，放線菌稀釋度為,真菌稀釋度C培養12d,放線菌一般5.培養不同微生物往往需要不同培養溫度。細菌一般在C培養57d,霉菌一般在C的溫度下培養 34d。.時的記錄作為結果，以防止因6.在菌落計數時，每隔24h統計一次菌落數目。選取而導致遺漏菌落的數目。點評：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養時間要充足，使得每個菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。.等方面。7 .菌落的特征包括1思考8土壤微生物種類最多、數量最大的原因是什么?實驗過程取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。應在火焰旁稱取土壤 10 g。將稱好的土樣倒入盛有 90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。(3) 在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行。(4) 實驗時要對培養皿作好標記。注明培養基類型、培養時間、稀釋度、培養物等。(5) 為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應當事先規劃時間。(三) 結果分析與評價1對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助