1、第一章第一章實驗室建設及設備儀器實驗室建設及設備儀器 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.4 1.4 常用器皿常用器皿1.5 1.5 型微生物廠主要儀器及設備型微生物廠主要儀器及設備 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設1.1.1 1.1.1 微生物實驗室設計微生物實驗室設計 微生物實驗室由準備室、洗滌室、滅菌室、無菌室、恒溫培養室和普通實驗室六部分組成。這些房間的共同特點是地板和墻壁的質地光滑堅硬，儀器和設備的陳設簡潔，便于打掃衛生。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設1.1.2 1.1

2、.2 微生物實驗室基本要求微生物實驗室基本要求（一）準備室 準備室用于配制培養基和樣品處理等。室內設有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實驗臺、電爐、冰箱和上下水道、電源等。（二）洗滌室 洗滌室用于洗刷器皿等。由于使用過的器皿已被微生物污染，有時還會存在病原微生物。因此，在條件允許的情況下，最好設置洗滌室。室內應備有加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，還應有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設（三）滅菌室 滅菌室主要用于培養基的滅菌和各種器具的滅菌，室內應備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設備及設施。（四）無菌室 無菌室也稱接種室，是系統接種、純化菌種等無菌操作的專

3、用實驗室。在微生物工作中，菌種的接種移植是一項主要操作，這項操作的特點就是要保證菌種純種，防止雜菌的污染。在一般環境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，很易造成污染，對接種工作干擾很大。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設1. 無菌室的設置 無菌室應根據既經濟又科學的原則來設置。其基本要求有以下幾點：（1）無菌室應有內、外兩間，內間是無菌室，外間是緩沖室。房間容積不宜過大，以便于空氣滅菌。內間面積22.55m2，外間面積122m2，高以2.5m以下為宜，都應有天花板。（2）內間應當設拉門，以減少空氣的波動，門應設在離工作臺最遠的位置上；外間的門最好也用拉門，要設在距內間最遠的位置上。 1.1

4、1.1 實驗室建設實驗室建設（3）在分隔內間與外間的墻壁或“隔扇”上，應開一個小窗，作接種過程中必要的內外傳遞物品的通道，以減少人員進出內間的次數，降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm，內外都掛對拉的窗扇。（4）無菌室容積小而嚴密，使用一段時間后，室內溫度很高，故應設置通氣窗。通氣窗應設在內室進門處的頂棚上（即離工作臺最遠的位置），最好為雙層結構，外層為百葉窗，內層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內室使用后、滅菌前開啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設2. 無菌室內設備和用具（1）無菌室內的工作臺，不論是什么材質、用途的，都要求表面光滑和臺面

5、水平。（2）在內室和外室各安裝一個紫外燈（多為30W）。內室的紫外線燈應安裝在經常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室中央。（3）外室應有專用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。（4）內室應有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標簽紙、膠水、廢物筐等。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設3. 無菌室的滅菌消毒（1）薰蒸：這是無菌室徹底滅菌的措施。無菌室使用了較長時間，污染比較嚴重時，應進行薰蒸滅菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。（2）噴霧：在每次使用無菌室前進行

6、。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微塵飛場，并有殺菌作用。可用5%石炭酸噴霧。（3）紫外線照射：在每次使用無菌室前進行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應開啟紫外線燈照射3060min。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設4. 無菌室工作規程（1）無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內外室用5%石炭酸噴霧。（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。（3）將各種需用物品搬進內室清點、就位，用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，510m

7、in后再進內室工作。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設（4）接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進行無菌操作時，動作要輕緩，盡量減少空氣波動和地面揚塵。（5）工作中應注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴大燃燒；如遇有菌培養物灑落或打碎有菌容器時，應用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續操作。（6）工作結束，立即將臺面收拾干凈，將不應在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設（五）恒溫培養室1. 培養室的設置（1）培

8、養室應有內、外兩間，內室是培養室，外室是緩沖室。房間容積不宜大，以利于空氣滅菌，內室面積在3.24.414m2左右，外室面積在3.21.86m2左右，高以2.5m左右為宜，都應有天花板。（2）分隔內室與外室的墻壁上部應設帶空氣過濾裝置的通風口。（3）為滿足微生物對溫度的需要，需安裝恒溫恒濕機。（4）內外室都應在室中央安裝紫外線燈，以供滅菌用。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設2. 培養室內設備及用具（1）內室通常配備培養架和搖瓶機（搖床）。常用的搖瓶機有旋轉式、往復式兩種。（2）外室應有專用的工作服、鞋、帽、口罩、手持噴霧器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。3. 培養室的滅菌、消毒 同無

9、菌室的滅菌、消毒措施。 小規模的培養可不啟用恒溫培養室，而在恒溫培養箱中進行。 1.1 1.1 實驗室建設實驗室建設（六）普通實驗室 進行微生物的觀察、計數和生理生化測定工作的場所。室內的陳設因工作側重點不同而有很大的差異。一般均配備實驗臺、顯微鏡、柜子及凳子。實驗臺要求平整、光滑，實驗柜要足以容納日常使用的用具及藥品等。（七）實驗室其他要求 水、電、氣等的容量、布設、性能均應滿足實驗室工作的需要。返回 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制 1.2.1 1.2.1 檢驗的方法檢驗的方法（一）平板檢驗法 用培養微生物主要類群的常規培養基，如牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、高氏1號培養基、馬丁氏培養基

10、、馬鈴薯葡萄糖培養基，分別倒成平板，每種兩個，都放入無菌室內。檢驗時，按無菌操作各將其中一個平板的蓋子打開，經過預定時間后再行蓋好；另外一個不開蓋子的作為對照，一起放入30環境培養，48小時后檢驗有無菌落生長。 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制 （二）斜面檢驗法 將常用的牛肉膏蛋白胨培養基斜面(與上相同)各取2管，放入無菌室。按無菌操作各將其中的一管打開棉塞，將棉塞放入滅菌的培養皿內。經過預定時間后，再將棉塞通過火焰塞好試管。連同對照一起培養，48小時后檢驗有無雜菌生長。 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制 1.2.2 1.2.2 檢驗時間檢驗時間（一）空氣滅菌后的檢驗 無菌室用

11、甲醛或其它藥劑熏蒸后，在開始使用前30min或1小時打開培養皿蓋子，至使用無菌室時蓋好，其目的是為了檢驗無菌室內空氣滅菌的效果。（二）紫外線滅菌效果的檢驗 無菌室用紫外線燈照射后，可在不同高度和不同位置用瓊脂平板檢驗空氣中的雜菌，以判斷紫外線的滅菌效果。必要時應調整照射時間或紫外線燈的高度。 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制 （三）操作過程中空氣污染情況的檢驗 為了檢驗在使用無菌室的過程中，由于人員的進出、器材的搬放、接種操作的動作等原因造成的空氣污染的情況，可在準備工作結束后接種操作開始時打開蓋子，經5min、30min或直到工作結束時再蓋好，以檢驗在不同的使用時間內空氣污染的程度。

12、 1.2 1.2 實驗環境控制實驗環境控制 1.2.3 1.2.3 檢驗結果分析檢驗結果分析 檢驗用的平板或斜面，在30培養48小時后，檢驗是否長有菌落、菌落的數量，并由菌落形態判斷雜菌的種類。一般要求平板開蓋5min者應不超過3個菌落；斜面開塞30min者應不長菌落為合格。從空氣中雜菌的種類可以考慮采取有效措施，增進滅菌效果。如霉菌較多，可先用5%石炭酸滅菌后，再用甲醛熏蒸；如細菌較多時，可采用乳酸與甲醛交替熏蒸的辦法。 返回 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.1 1.3.1 顯微鏡顯微鏡（一）顯微鏡的基本結構 普通光學顯微鏡由機械和光學兩大部分組成。機械部分

13、包括鏡座、鏡臂、載物臺、物鏡轉換器、鏡筒和調節器等；光學部分包括目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈及反光鏡。顯微鏡結構的各部分見圖1-1。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-1 顯微鏡構造示意圖 1.物鏡轉換器；2.物鏡；3.游標卡尺；4.載物臺；5.聚光器；6.虹彩光圈7.光源；8.鏡座；9.點源開關；10.光源滑動變阻器；11.粗調螺旋； 12.微調螺旋；13.鏡臂；14.鏡筒；15.目鏡；16.標本移動螺旋 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1. 鏡筒 鏡筒上端裝目鏡，下端接轉換器。鏡筒有單筒和雙筒兩種。單筒有直立式和后傾式兩種。雙筒全是傾

14、斜式的，其中一個筒有屈光度調節裝置，以備兩眼視力不同者調節使用。兩筒之間可調距離，以適應兩眼寬度不同者調節使用。2. 物鏡轉換器 轉換器裝在鏡筒的下方，其上有3個孔，有的有4個或5個孔，用于安裝不同規格的物鏡。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 3. 載物臺 又稱鏡臺，是放置標本的地方，多數為方形和圓形的平臺，中央有一通光孔；載物臺上有移動器，作用是夾住和移動標本，轉動螺旋可使標本前后和左右移動，其上的刻度標尺可指明標本所在位置。4. 鏡臂 鏡臂支撐鏡筒、載物臺、聚光器和調節器。鏡臂有固定式和活動式（可改變傾斜度）兩種。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其

15、使用要領 5. 鏡座 鏡座連接鏡臂，支撐整臺顯微鏡，其上有反光鏡。6. 調焦裝置 調節物鏡和被觀察物體之間距離的機件。有鏡臂調節器和鏡臺調節器兩種，前者通過升降鏡臂來調焦距，后者通過升降載物臺來調焦距。包括大、小螺旋調節器各一個，前者又稱粗調節器，后者也叫微調節器，通過調節器調焦，可清晰地觀察到標本。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 7. 物鏡 是接近被觀察物品（標本）的鏡頭，亦稱接物鏡。根據物鏡的放大倍數和使用方法的不同，分為低倍物鏡、高倍物鏡和油鏡三種，低倍物鏡有4、10、20；高倍物鏡有40和45；油鏡有90、95和100等。數字越大，放大倍數越高。8. 目鏡

16、是接近觀察者的眼睛的鏡頭，亦稱接目鏡。把經物鏡放大的實像再放大一次，并映入觀察者的眼中。通常有5、10、16等規格。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 9. 聚光器 安裝在載物臺下，能將平行的光線聚焦于標本，增強照明度。聚光器可以升降。10. 反光鏡 是普通光學顯微鏡的取光設備，使光線射向聚光鏡，分平、凹兩面。11. 內光源 是較好的光學顯微鏡自身帶有的照明裝置，安裝在鏡座內部，由強光燈泡發出光線，通過安裝在鏡座的集光鏡射入聚光鏡。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 （二） 顯微鏡的使用方法1. 顯微鏡的放置 從顯微鏡箱或柜內取出或放入顯微鏡時，

17、應一手提鏡臂，另一手托鏡座，讓顯微鏡直立，防止目鏡從鏡筒中脫落。顯微鏡應直立放置在桌上。離桌緣3cm，檢查各部件是否完好，鏡身、鏡頭必須清潔。 2 .標本放置 下降載物臺或升高鏡筒，使物鏡遠離載物臺，將標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 3 .低倍鏡觀察 將低倍鏡對正下方，側面注視，用粗調節器調節上升載物臺或下降鏡筒，使物鏡與玻片接近，距離約0.5cm處，開放光圈，下降聚光器。如有內置光源燈可通過調節電壓以獲取適當的照明亮度；如使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應根據光源的強度及所用物鏡的

18、放大倍數，選用凹面或平面反光鏡并調節其角度。 再由目鏡觀察，同時轉動粗調節器下降載物臺或升高鏡筒使物鏡緩緩遠離玻片，標本在視野中顯現后，再使用微調節器調節至圖像清晰。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 4 .高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的目標并將其移至視野中心后，側面注視，輕輕轉動物鏡轉換器將高倍鏡移至正下方。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調節后，用微調節器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結果。 在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉動物鏡轉換器將其他物鏡轉到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準焦狀態，這種現象稱為物鏡的同焦。 1.3

19、1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 5 .油鏡觀察 使用同焦顯微鏡時，在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的區域后，移開鏡頭，在待觀察的區域滴加12鏡油，將油鏡轉至油中，調節光強，使視野的亮度合適，用微調節器調節物像清晰為止。 對于不等焦的顯微鏡，用粗調節器下降載物臺或升高鏡筒使物鏡逐漸遠離玻片，在標本觀察區滴加鏡油，然后將油鏡轉至鏡筒下方，須在側面注視下，用粗調節器調節上升載物臺或下降鏡筒，使物鏡與玻片接近，將油鏡前端浸入鏡油中，并幾乎與標本相接 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 6 .顯微鏡用畢后的處理 用粗調節器使物鏡遠離玻片，取下載玻片。 用擦鏡紙拭去鏡頭

20、上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許鏡頭清洗液擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的鏡頭清洗液。 切忌用手或其它紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產生劃痕，影響觀察。 用擦鏡紙清潔其它物鏡及目鏡；用綢布清潔顯微鏡的金屬部件。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 （三）顯微鏡的維護和保養 顯微鏡是貴重精密的光學儀器，正確的使用、維護與保養，不但觀察物體清晰，而且延長顯微鏡的使用壽命。1 .顯微鏡應放置在通風干燥，灰塵少，不受陽光直接曝曬的地方。不使用時，用有機玻璃或塑料布防塵罩罩起來。也可套上布罩后放入顯微鏡箱內或顯微鏡柜內，并在箱或柜內放置干燥劑。2 .顯微鏡要避免與

21、酸、堿及易揮發具腐蝕性的化學物品放在一起，以免顯微鏡受損。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 3 .顯微鏡應防止震動和暴力。粗、微調節螺旋、聚光器螺旋和標本移動器等機械部分要靈活而不松動，如不靈活可在滑動部位滴加少許潤滑油。4 .透鏡表面有污垢時，可用清潔的脫脂紗布或擦鏡紙，沾上少許鏡頭清洗液（二甲苯或石油精）揩拭，切忌用酒精，否則透鏡上的膠將被溶解，而使透鏡脫落。5 .用油鏡觀察后，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙沾少許鏡頭清洗液擦拭，最后用干凈的擦鏡紙擦干。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 6 .當顯微鏡以燈泡為光源，且需要更換時，可

22、將儀器底部翻轉，抓住燈座反時針轉90取下燈座，拔下燈泡換上新的燈泡，然后把接插件卡腳對準底座上兩槽口，順時針轉90即可。7.換保險絲時，握住保險絲座，反時針旋下保險絲座，換上好的保險絲，順時針旋上保險絲座即可。8.儀器長期使用后應注意在各轉動部分加些潤滑脂，所用油脂宜應黏度適當，避免酸性。9.顯微鏡結構精密，零件不宜隨意拆卸。遇故障可送廠家或有關儀器廠修理。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.2 1.3.2 恒溫培養箱恒溫培養箱 恒溫培養箱可分為兩大類：即直熱式恒溫培養箱和隔水式恒溫培養箱。（一）直熱式恒溫培養箱 為直接加熱空氣方式的培養箱，采用“繼電器控溫電加

23、熱空氣”技術，結構為：保溫板材箱內裝繼電器控溫電加熱器。這種培養箱造價低，制造工藝簡單，但恒溫效果較差，溫度波動大。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 （二）隔水式恒溫培養箱 為間接加熱空氣方式的培養箱，采用“繼電器控溫電加熱水控制空氣溫度”技術，結構為：簿鋼板外殼內襯玻璃棉，內置紫銅板水箱，水箱內裝繼電器控溫電加熱器，設雙層門。這種培養箱制造工藝復雜，造價高，但由于先用電加熱水層，再由水傳熱至箱內空氣，因而溫度上升和下降緩慢，加之可通過雙層門的玻璃內門觀察，對箱內溫度影響小，故恒溫效果好，調溫為20600.5，很適于微生物培養之用。見圖1-2。 1.3 1.3 常用儀

24、器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-2 培養箱 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 使用注意事項： 1. 箱內不應放入過熱過冷的東西，以免箱內溫度急劇變化，阻礙培養物的生長。2. 箱內應放入水容器一只，以維持培養箱內濕度或減少培養物中水分的大量蒸發。3. 培養箱底部因接近電源，溫度較高，故培養物不宜放在底層。4. 箱內培養物不宜太擠，以免溫空氣不能流通，而使箱內溫度不勻。5. 箱內要保持清潔，并經常用3%來蘇兒液消毒，再用清潔抹布擦凈。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.3 1.3.3 滅菌器滅菌器（一）干熱滅菌箱 滅菌箱正面的側邊，

25、裝有溫度指針，用于定溫；溫度指針下面有指示燈，用于指示是否達到定溫；箱內有感溫探頭，用于探測溫度。指針、指示燈、探頭、電加熱器均連接于“溫度調節器”，通過溫度調節器使箱內保持一定溫度。如溫度未達定溫，電加熱器工作，箱內溫度上升，如溫度超過定溫，“溫度調節器”自動切斷電加熱器的電源，停止加熱，箱內溫度即可下降。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-3 干熱滅菌箱 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 使用方法：1. 適宜用干熱滅菌箱滅菌的物品是玻璃器皿和金屬器皿，而塑料制品、橡皮制品、天然和化學纖維制品、培養基等，均不適用干熱滅菌。2進箱，物品放在

26、干熱滅菌箱中的鐵擱板上，關箱門。3. 定溫，常用滅菌溫度為160或170。4. 滅菌，接通電源，干熱滅菌箱升溫至定溫滅菌，160維持2h，170維持11.5h。5. 出箱，關斷電源，待溫度下降至50左右，開箱門取出被滅菌的物品。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 注意：1、滅菌時，溫度不宜超過170，以免易燃物，如棉塞、包扎紙等被燒焦。2、高溫時，切勿開箱門，以免冷空氣驟然進入使滅菌的玻璃器皿炸裂。3、絕不允許先將溫度上升到100以上再放器皿，以免玻璃器皿驟然在高溫下炸裂。 干熱滅菌箱用于烘干玻璃器皿時，定溫120，持續30min即可。須打開頂部氣孔，以利水蒸氣散出。可

27、啟動箱內鼓風設備，加速干燥。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 （二）高壓蒸汽滅菌器 高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果比干熱滅菌箱好，適用所有物品滅菌，通常用于培養基、生理鹽水、廢棄培養物、耐高熱高壓的藥品、紗布等滅菌。高壓蒸汽滅菌器有手提式、直立式和橫臥式幾種，它們的構造和滅菌原理是一樣的，僅是容量不同而已。手提式高壓蒸汽滅菌器容積最小，業務小的實驗室大多使用它；橫臥式高壓蒸汽滅菌器容積大，只有大型實驗室或生產上使用。一般實驗室常使用直立式高壓蒸汽滅菌器。直立式高壓蒸汽滅菌器見圖1-4。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-4 高壓蒸汽滅菌器 1.

28、3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 使用方法：1. 加水 立式鍋可直接加水至鍋內底部隔板以下2/3高處；有加水口和水位窗者，由加水口加水至止水線處。2. 裝鍋 把需滅菌的器物放入鍋內（器物不要裝得太滿，以免影響滅菌效果），蓋好鍋蓋，將螺旋柄擰緊（對角式均勻擰緊），打開排氣閥。3. 點火 啟動開關，電加熱器工作。4. 排放冷空氣 鍋內水沸騰后，蒸汽逐漸驅趕鍋內冷空氣，當溫度計指針指向100時，證明鍋內已充滿蒸汽，冷空氣被驅盡，關閉排氣閥。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 5. 升壓、保壓與滅菌 關閉排氣閥以后，鍋內成為密閉系統，蒸汽不斷增多，壓力計和溫

29、度計的指針上升，當壓力達到0.1MPa，溫度為121時，開始滅菌計時；控制熱源，維持0.1Mpa、12130min即完成滅菌。6. 降壓與排氣 完成滅菌后停止加熱，任滅菌鍋自然冷卻降壓。當壓力降至0.025MPa以下后，可打開排氣閥排除余汽。7. 出鍋 待鍋內壓力降至大氣壓時揭開鍋蓋，取出器物，排掉鍋內剩余水。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.4 1.3.4 冰箱冰箱 用于儲存培養基和培養物的設備，儲存病毒必須使用低溫冰箱，儲存一般培養基和培養物用普通冰箱即可。 低溫冰箱整個箱壁內側圍繞冷卻管，可保持2070左右的低溫。 使用冰箱時，必須注意以下事項：1.冰箱

30、適用電壓與所供電壓一致。如所供電壓為220V，而冰箱適用110V電壓時，必須用變壓器調壓。2.供電線路和保險絲滿足冰箱的工作電流要求。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 3.使用時，應將溫度調節至所需要的溫度。一般應使水在冷卻室中結冰，使儲藏箱下部溫度為510左右。 4.當冰箱冷卻室結冰太厚時，會導致溫度調節器的不靈敏，此時，必須停電融冰后，再投入使用。 5.冰箱門打開時間愈短愈好，打開次數越少越好。6. 不宜將溫度過高的物品放入冰箱內，以免消耗電能過大、機件工作時間過長，縮短冰箱使用壽命。7. 冰箱內應保持整潔，如箱內有霉菌生長，應清洗并用福爾馬林熏蒸消毒。8. 保存

31、烈性病菌、病毒的冰箱，要專人保管，并要加鎖。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.5 1.3.5 水浴鍋水浴鍋 水浴箱也叫水溫箱，用于融化培養基和各種保溫操作。該設備是金屬制成的長方形箱，箱內盛水，箱底裝有電熱絲，并有自動調節溫度裝置控制溫度恒定。如圖1-5所示。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-5 水浴箱 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.6 1.3.6 細菌過濾器細菌過濾器 目前常用的濾器有混合材質和全玻材質。如圖1-6所示。（一）蔡氏濾器 蔡氏濾器為金屬制成的杯狀漏斗，在杯的底部夾一層石棉濾板，

32、濾板下有一塊金屬篩板，防止抽氣時石棉濾板下陷。按濾孔的大小，石棉板分為三種：1. K號，濾孔最大，可濾除一般顆粒物。2. KK號，濾孔較小，為濾除大多數細菌。3. EKS號，濾孔更小，可濾除較大病毒。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-6 細菌過濾器 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 （二）玻璃濾器 該器組件全部為玻璃質，其中，濾板由玻璃細紗加熱壓成，分1、2、3、4、5、6共六級。號碼愈大，孔徑愈小，孔徑0.152.0m不等，5和6級可阻止細菌通過。 玻璃濾器用后要立即處理。過濾病原微生物后的濾器，要先用不凝固蛋白質的消毒藥劑浸泡3天，以

33、免堵塞濾孔；消毒后的濾器，用蒸餾水倒抽；再在濾器內加入三分之二洗滌液，自然流出氧化殘留物；再先后用自來水、蒸餾水抽吸過濾至濾液呈中性為止。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 如果濾器的濾孔被凝固的蛋白質顆粒堵塞，可將濾器浸泡于37的1%胰蛋白酶溶液（pH7.47.6）中消化24h，再按上法抽洗清潔。 濾器為負壓過濾，需要連接一抽濾瓶，將濾瓶嘴用橡皮管連接于抽氣機上抽氣過濾。過濾負壓不宜低于（46.666.6）KPa（350500mmHg），可用水銀真空計指示，也可觀察濾瓶內濾出液情況判斷。如濾液出現大量氣泡，說明負壓過高，宜關閉抽氣機，停止抽氣，待氣泡消逝后再抽。抽濾瓶

34、的嘴應塞入少量棉花，以防放氣時空氣中細菌沖入瓶內。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.7 1.3.7 超凈工作臺超凈工作臺 用于創造局部無菌環境的設備。超凈工作臺是一個由預過濾器、高效過濾器、空氣幕風機有效排除空氣中的懸浮灰塵、微生物，由紫外燈或噴霧滅菌，裝有照明燈、操作臺面板、配電裝置，并有消音、減震設備的箱體，如圖1-7所示。超凈工作臺是沒有建設無菌室的微生物實驗室的必備設備，也可用于有更嚴格無菌要求或其他小環境條件要求的微生物接種、分離和鑒定等操作。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-7 超凈工作臺 1.3 1.3 常用儀器及

35、其使用要領常用儀器及其使用要領 使用超凈工作臺應注意以下幾點：1清除工作臺內的灰塵、雜物。2在使用超凈工作臺進行無菌操作前30min啟動過濾、通風裝置，檢測操作區氣流速度、潔凈度，并滅菌。3穿緊口工作服，戴緊口帽。4. 嚴禁在超凈工作臺前做任何可能增加空氣灰塵量的動作。5. 必須在超凈工作臺內使用的物品要放在下風側。6. 在超凈工作臺內使用的物品必須是不易起纖塵的。 7. 在全部無菌操作結束后，才能停止工作臺運轉。8. 定期進行性能檢測。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.8 1.3.8 電動抽氣機電動抽氣機 電動抽氣機又叫真空泵，由電動機轉輪、輪帶和偏心輪等組

36、成。通電后，電動機帶動偏心輪，即可將與其相關的容器內的空氣抽出。如圖1-8所示。 電動抽氣機主要供細菌過濾器、厭氧培養、培養基過濾和真空干燥時抽氣用。使用抽氣機時，應注意以下事項：1. 抽氣機的適用電壓要與所供電壓一致，否則，要經變壓器變壓后才能使用。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 2. 要保持機油箱內的油量，防止機器損壞。3. 必須使用硬質的連接管，保證氣路暢通以確保器皿內抽真空效果。4被抽氣的器皿，必須有良好的抗壓性能，以防內部真空后被外部空氣破碎。5如果在抽濾過程中濾液出現大量氣泡，可以暫時停機，待氣泡消失后，再開機繼續抽氣。6如果要作冷凍干燥，則需用精密度高

37、、功率大的抽氣機。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-8 電動抽氣機 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1.3.9 1.3.9 電動離心機電動離心機 離心機為進行病菌病毒檢驗鑒定中不可缺少的工具。離心機的種類很多，實驗室常用小型傾斜電動離心機。小型傾斜電動離心機機頂正中有孔蓋，以便放入和取出離心試管，內有離心管座四或六個，均勻地繞離心軸排列，底座上裝有開關和調速器。如圖1-9所示。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 圖1-9 小型傾斜電動離心器A-離心機斷面1.轉速調節器 2.電動機 3.金屬套管 4.護蓋 5.玻管

38、； B-離心器全形 6.蓋 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 使用離心機時應注意：1. 應放在平穩的地方，并保持水平。2將裝有標本的離心試管放入離心管座的金屬套管內，兩兩成對，每個重量基本平衡。3放好試管后，蓋上孔蓋。4開啟電源開關，先用最低轉速，逐漸調節到最高轉速。5. 達到離心時間后，逐步降低轉速，待降到最低轉速后，關閉電源開關。6待離心機自然停止轉動，打開孔蓋，取出離心試管。7. 離心試管須加棉塞時，離心前應將棉塞上端用橡皮圈扎緊在試管外或用大頭針別住，以免離心時棉塞沉入管內。8. 應經常保持轉軸潤滑。 1.3 1.3 常用儀器及其使用要領常用儀器及其使用要領 1

39、.3.10 1.3.10 天平天平(一)粗天平 粗天平又稱工業天平或藥物天平，是用于粗略稱量的儀器。常用的有100g、200g、500g、1000g四種，感量為千分之一，供配制普通試劑和粗略稱量之用。(二)電子天平 這類天平只有一個盤，構造比一般天平復雜，但使用起來卻十分方便。 返回 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 1.4.1 1.4.1 常用的玻璃器皿常用的玻璃器皿 微生物實驗室常用的玻璃器皿見表1-1所示。 表1-1 常用的玻璃器皿 名稱規 格試 管18180mm，15150mm，10100mm，還有反應管(杜氏小管)，以厚管壁為宜培養皿常用的培養皿直徑為900mm，高為15mm吸 管0

40、.1mL，0.2mL，0.5mL，1.0mL，5.0mL，10.0mL的刻度吸管量 筒10.0mL，50.0mL，100mL，500mL，1000mL漏 斗直徑3.0cm，6.0cm，10.0cm燒 杯50 mL，100mL，250 mL，500 mL，800 mL，1000 mL容量瓶各種容量試劑瓶各種容量(白色和棕色)滴 瓶一般用125mL(白色和棕色)載玻片2.5cm7.5cm，厚0.010.13cm蓋玻片1.8cm1.8cm，厚0.17cm干燥器不同直徑的普通干燥器 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 1.4.2 1.4.2 常用的玻璃器皿的洗滌與消毒常用的玻璃器皿的洗滌與消毒 微生物學

41、實驗中常用的培養皿、試管和三角瓶等的洗滌、消毒質量，直接影響實驗結果，因此，這項工作不容忽視。（一）新玻璃器皿的洗滌法新購置的玻璃器皿含有游離堿，應用2%的鹽酸溶液浸泡數小時，再用水充分沖洗干凈。 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （二）含有瓊脂培養基的玻璃器皿的洗滌法 先用小刀或鐵絲將器皿中的瓊脂培養基刮下。如果瓊脂培養基已經干燥，可將器皿放在水中蒸煮，使瓊脂熔化后趁熱倒出，用水洗滌，并用刷子沾肥皂擦洗內壁，然后用自來水洗去肥皂。是否已將油垢完全除去，可以這樣檢查：即將瓶子或試管的外壁擦干，如果水在內壁是均勻地分布一薄層，可以認為是將油垢除去了。如果經過這樣洗滌的器皿，油垢還未洗凈，就需用洗滌液來清洗。 1.4 1.4 常用器皿常用器皿 （三）載玻片及蓋玻片的洗滌法 新載玻片和蓋玻片先在2%的鹽酸溶液中浸1h，以后用自來水沖洗23次，最后用蒸餾水換洗23次。也可用1%的洗衣粉洗滌，新載玻片用洗衣粉洗滌時，先將洗衣粉液煮沸，然后將要洗的新載玻片散入煮沸液中，持續煮沸1520min(注意