1、第三節(jié) 藥質(zhì)量量規(guī)范分析方法驗證 一、目的 證明所采用的分析方法適宜于相應(yīng)的檢測要求。 二、用途一藥質(zhì)量量規(guī)范起草時，分析方法需閱歷證。二藥物消費方法變卦、制劑的組分變卦、原分析方法進展修訂時，分析方法需閱歷證。三、需驗證的分析工程 1. 鑒別實驗； 2. 雜質(zhì)定量或限制檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測定； 4. 制劑中其它成分降解產(chǎn)物、防腐劑等的測定； 5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。 四、驗證內(nèi)容 驗證內(nèi)容有：準確度、精細度反復性、中間精細度和重現(xiàn)性、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性 一 準確度accuracy 準確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或

2、參考值接近的程度，用百分回收率表示。 測定回收率Rrecovery的詳細方法可采用“回收實驗法和“加樣回收實驗法。 回收實驗 空白+知量A的對照品或規(guī)范品測定，測定值為M%100AMR空白回收率 加樣回收實驗 已準確測定藥物含量P的真實樣品+知量A的對照品或規(guī)范品測定，測定值為M%100APMR 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。1. 1. 含量測定方法的準確度含量測定方法的準確度 原料藥可用知純度的對照品或樣原料藥可用知純度的對照品或樣品進展測定，或用本法所得結(jié)果與已品進展測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準確度的另一方法測定的結(jié)果進建立準

3、確度的另一方法測定的結(jié)果進展比較。展比較。 制劑可用含己知量被測物的各組制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進展測定，即采用在空白輔分混合物進展測定，即采用在空白輔料中參與原料藥對照品的方法。料中參與原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可向如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中參與知量的被測物進展測定，制劑中參與知量的被測物進展測定，或與另一個已建立準確度的方法比較或與另一個已建立準確度的方法比較結(jié)果。結(jié)果。 中藥分析的準確度普通用加樣回中藥分析的準確度普通用加樣回收實驗衡量。中藥回收率普通要求在收實驗衡量。中藥回收率普通要求在95105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟范圍內(nèi)，有些方法操作

4、步驟繁多時，可要求在繁多時，可要求在90110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。RSD普通在普通在2%以內(nèi)。以內(nèi)。 2 2雜質(zhì)定量測定的準確度雜質(zhì)定量測定的準確度 可向原料藥或制劑中參與知量雜可向原料藥或制劑中參與知量雜質(zhì)進展測定。假設(shè)不能得到雜質(zhì)或降質(zhì)進展測定。假設(shè)不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進展比較。熟的方法進展比較。 二精細度precision 精細度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏向d、規(guī)范偏向(SD)、相對規(guī)范偏向(RSD)變異系數(shù)，CV表示。 偏向d：丈量值與平均值之差xxdi相對偏向允許差：容

5、量分析中和法、非水滴定法、銀量法、絡(luò)合滴定法、重氮化法、氧化復原法0.3%；分量法 0.5%；氧瓶熄滅法 0.5%；儀器分析 3%、凱氏定氮法 1%00BAB-A00100100平均值平均值A(chǔ)規(guī)范偏差SD或S12nxxSi相對規(guī)范偏差RSD，也稱變異系數(shù)CV%100 xSRSD 1. 反復性(repeatability):在一樣條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精細度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作100%，至少測6次進展評價。 2. 中間精細度 同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精細度。 3. 重現(xiàn)性(repr

6、oducibility)不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精細度。 數(shù)據(jù)要求：需報告RD，RSD和可信限。 三檢測限limit of detection， LOD 檢測限系指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。 是限制檢驗效能目的，無需定量測定，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。 1 1非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用知濃度的被測物，實驗出能被用知濃度的被測物，實驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。可靠地檢測出的最低濃度或量。 2信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法儀器分析方法，是把知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進展比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或

7、量。普通以信噪比S/N3 1或2 1時的相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。 1空白值0時；測定背景10次以上，求出規(guī)范差b。將b乘以三倍；在任務(wù)曲線上求出3b相對應(yīng)的濃度Xb；即為方法的檢出值；2空白值不等于0；測定背景10次以上，求出規(guī)范差b ；將b 乘以三倍；在任務(wù)曲線上求出3 b 相對應(yīng)的濃度Xb ；將求得的對應(yīng)濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。四定量限1imit of quantitation，LOQ 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精細度要求。 常用信噪比法確定定量限，普通以信噪比S/N為10 1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進展確定，也可按1984年國際純粹

8、和運用化學結(jié)合會(IVPAC)規(guī)定：用儀器所測空白背景呼應(yīng)規(guī)范差SD的10倍為估計值，再經(jīng)實驗確定方法的實踐測定下限。 儀器分析：經(jīng)過測定一組空的樣品的背景信號后計算規(guī)范差S。以1OS來估算定量限制。以定量限制制備的樣品來驗證 非儀器分析：經(jīng)過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個樣品中被測物可被準確和精細測定出的最低濃度量。 五專屬性specificity 選擇性： 指有其他成分雜質(zhì)、降解物、輔料等能夠存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準確而專屬的測定才干，是指該法用于復雜樣品分析時能否遭到相互關(guān)擾程度的度量。 通常經(jīng)過分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關(guān)

9、化學物質(zhì)或撫慰劑成分的樣品，將所獲分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測試結(jié)果進展比較，兩組測試結(jié)果之差即專屬性。1鑒別反響 應(yīng)能與能夠共存的物質(zhì)或構(gòu)造類似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及構(gòu)造類似或組分中的有關(guān)化合物，均應(yīng)呈負反響。2含量測定和雜質(zhì)測定 色譜法和其他方法，應(yīng)附代表性圖譜，亦闡明專屬性。圖中應(yīng)標明各組份的位置，色譜法中的分別度應(yīng)符合要求。 六 線性Linearity 在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 線形通常用最小二乘法處置數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率Slope來表示。數(shù)據(jù)要求：至少需求五個濃度調(diào)查線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距是檢定的能夠偏向、回歸斜率及方差

10、等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。 七范圍Range： 指到達一定精細度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。 范圍確實定可因測定工程不同而有不同要求： 含量測定范圍為80%-120%；含量均勻度范圍為70%-130%；雜質(zhì)測定應(yīng)為被測雜質(zhì)限制的50%-120%；溶出度應(yīng)為測定范圍的20%。 八八 耐用性耐用性 指測定條件稍有變動時，指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的接受程度，為常規(guī)檢驗提結(jié)果不受影響的接受程度，為常規(guī)檢驗提供根據(jù)。是衡量實驗室和任務(wù)人員之間在供根據(jù)。是衡量實驗室和任務(wù)人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。 分析方法

11、重現(xiàn)性的測定是經(jīng)分析方法重現(xiàn)性的測定是經(jīng)過在不同的實驗室內(nèi)不同的實驗者對同一過在不同的實驗室內(nèi)不同的實驗者對同一樣品的分別測試而獲得的。獲得的這種樣品的分別測試而獲得的。獲得的這種再與正常檢定下的精細度進展比較，從而再與正常檢定下的精細度進展比較，從而確定該法的耐用性，或稱粗放度確定該法的耐用性，或稱粗放度 九運用 1. 鑒別實驗除專屬性、耐用性外，其它都不要求。 2. 雜質(zhì)的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。 雜質(zhì)的含量測定除檢測限外，其它都要求。 3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。十各種含量測定方法對效能目的的要十各種含量測定方法對效能目的的要求求

12、1. 1. 容量分析法：用原料藥精制品容量分析法：用原料藥精制品( (含量含量99.599.5) )或?qū)φ掌氛{(diào)查方法的精細度，相或?qū)φ掌氛{(diào)查方法的精細度，相對規(guī)范差普通應(yīng)不大于對規(guī)范差普通應(yīng)不大于0.20.2；進展回收；進展回收率實驗。回收率普通在率實驗。回收率普通在99.799.7100.3100.3之之間。間。 2. UV 2. UV法：用適當濃度的精制品進展法：用適當濃度的精制品進展測定，其測定，其RSDRSD普通不大于普通不大于1 1。制劑的。制劑的測定，回收率普通應(yīng)在測定，回收率普通應(yīng)在9898102102之間。之間。 線性：吸光度線性：吸光度A普通在普通在0.20.7，濃度點濃度點

13、n5。用濃度。用濃度c對對A作線性回歸作線性回歸處置，得不斷線方程，處置，得不斷線方程，r應(yīng)到達應(yīng)到達0.9999(n5)，方程的截距應(yīng)近于零。，方程的截距應(yīng)近于零。 3. HPLC法：要求法：要求RSD2，回收，回收率率98102之間。之間。 線性范圍：用精制品配制一系列線性范圍：用精制品配制一系列規(guī)范溶液，濃度點規(guī)范溶液，濃度點n應(yīng)為應(yīng)為57，用濃，用濃度度c對峰高對峰高h或被測物的呼應(yīng)值之比進或被測物的呼應(yīng)值之比進展回歸處置，建立回歸方程，展回歸處置，建立回歸方程，r應(yīng)大應(yīng)大于于0.999，截距應(yīng)趨于零。，截距應(yīng)趨于零。99：73. 精細度是指B A. 測得的丈量值與真值接近的程度 B.

14、 測得的一組丈量值彼此符合的程度 C. 表示該法丈量的正確性 D. 在各種正常實驗條件下，對同一樣品分析所得結(jié)果的準確程度 E. 對供試物準確而專屬的測定才干99x：76精細度是指該法D A. 測得的丈量值與真值接近的程度 B. 測得的丈量值與回收率接近的程度 C. 丈量的正確性 D. 測得的一組丈量值彼此符合的程度 E. 對供試物準確而專屬的測定才干 96：在藥物分析中，精細度是表示該法的BD A. 丈量值與真值接近程度 B. 一組丈量值彼此符合程度 C. 正確性 D. 重現(xiàn)性 E. 專屬性 95：106110應(yīng)要求的效能目的： A. 檢測限 B. 定量限 C. 兩者均要求 D. 兩者均不要

15、求95：106. 含量測定方法評價D95：107. 雜質(zhì)限量檢查A95：108. 雜質(zhì)定量測定B95：109. 溶出度測定D95：110. 中間體含量測定D97：126藥物雜質(zhì)檢查所要求的效能目的為CDE A. 準確度 B. 精細度 C選擇性 D. 檢測限 E. 耐用性 98：評價藥物分析所用的測定方法的效能目的有BCD A. 含量均勻度 B. 精細度 C. 準確度 D. 粗放度 E. 溶出度例例1155A A精細度精細度 B B定量限定量限C C兩者皆是兩者皆是 D D兩者皆不是兩者皆不是1. 1. 某法測得一組丈量值間彼此符合程度某法測得一組丈量值間彼此符合程度A A2. 2. 丈量值和真

16、值接近的程度丈量值和真值接近的程度D D3. 3. 測定結(jié)果的重現(xiàn)性測定結(jié)果的重現(xiàn)性A A4. 4. 可定量測得被測藥物的最低程度參數(shù)可定量測得被測藥物的最低程度參數(shù)B B5. 5. 藥物分析方法的效能目的藥物分析方法的效能目的C C 例例6. 6. 相對規(guī)范差表示相對規(guī)范差表示C CA. A. 準確度準確度B. B. 回收率回收率C. C. 精細度精細度D. D. 純真度純真度E. E. 限制限制例例7. 7. 精細度的普通表示方法有精細度的普通表示方法有(AE)(AE)A. A. 相對規(guī)范差相對規(guī)范差B. B. 相對平均偏向相對平均偏向C. C. 相對誤差相對誤差D. D. 絕對誤差絕對誤

17、差E. E. 規(guī)范差規(guī)范差 例例8. 8. 檢測限的表示方法有檢測限的表示方法有ABCABCA. A. 百分數(shù)百分數(shù) B. ppm B. ppm C. ppbC. ppbD. D. g g E. ngE. ng例例9. 9. 用信噪比法表示檢測限時，信噪用信噪比法表示檢測限時，信噪比普通應(yīng)為比普通應(yīng)為BCBCA. 11 A. 11 B. 21 B. 21 C. 31C. 31D. 41 D. 41 E. 51E. 51例例10. 10. 用碘量法測定維生素用碘量法測定維生素C C原料藥原料藥時，要求碘量法應(yīng)具備時，要求碘量法應(yīng)具備ACDACDA. A. 選擇性選擇性 B. B. 定量限定量限C. C.