1、例1生物技術在生活中應用非常廣泛，與我們的日常生活息息相關。回答下列問題：（1）干白葡萄酒制作前一般將發酵瓶清洗干凈，并且要使用_消毒。發酵過程中發現葡萄酒變酸，表面觀察到菌膜，造成此現象的微生物是_，該生物新陳代謝類型為_。葡萄汁的發酵是否成功，可用_來檢驗。（2）腐乳的制作過程中主要利用微生物產生的_，通過發酵，豆腐中營養物質的種類增多，且更容易消化和吸收。影響腐乳的風味和質量的因素是_（至少列舉兩項）。各地腐乳風味迥異，在原料和菌種相同時，可通過_制作出不同風味的腐乳。（3）泡菜制作中可能會產生亞硝酸鹽，在發酵過程中影響亞硝酸鹽含量的因素有_。（至少2點）【答案】（1）70%的酒精 醋酸

2、菌 異養需氧型 酸性重鉻酸鉀溶液 （2）蛋白酶，脂肪酶 鹽的用量，酒的用量，發酵溫度，發酵時間等 控制發酵的條件 （3）溫度、食鹽用量、腌制時間等【解析】（1）發酵瓶要使用70%酒精消毒；醋酸菌能將果酒變成醋酸，因此若發酵發程中發現葡萄酒變酸，表面觀察到菌膜，造成此現象的微生物是醋酸菌；該生物新陳代謝類型為異養需養型；酒精可用酸性重鉻酸鉀溶液來檢驗，溶液的顏色由橙色變成灰綠色；（2）腐乳過程中主要利用微生物產生的蛋白酶，將蛋白質分解成小分子肽和氨基酸通過發酵，豆腐中營養物質的種類增多，且更容易消化和吸收；影響腐乳的風味和質量的因素是鹽的用量，酒的用量，發酵溫度，發酵時間等；各地腐乳風味迥異，在

3、原料和菌種相同時，可通過控制發酵的條件制作出不同風味的腐乳；（3）泡菜腌制過程中影響亞硝酸鹽含量的因素主要有溫度、食鹽用量、腌制時間等。例2圖甲是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的mrna部分序列。（1）圖中選擇培養基應以_為唯一氮源；鑒別培養基還需添加_作指示劑，產脲酶細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。（2）在5個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品溶液0.1ml，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細菌數量為_×108個；與血細胞計數板

4、計數法相比，此計數方法測得的細菌數較_。（3）現有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉錄的mrna在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現終止密碼（終止密碼有uag、uga和uaa）。突變基因轉錄的mrna中，終止密碼為_，突變基因表達的蛋白含_個氨基酸。【答案】（1）尿素 酚紅 紅 （2） 稀釋涂布平板法 1.75 少 （3） uga 115【解析】（1）脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養基應以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氮，氨會使培養基的堿性增強，ph升高，使酚紅指示劑變紅色。（2）用于計數細菌菌落數接種方法是稀釋涂布平板法，統計的菌落數應介于30300

5、之間，故選擇細菌菌落數為156、178和191的平板計數，每克土壤樣品中的細菌數量為（156+178+191）/3÷0.1×105=1.75×108。由于兩個或多個細菌連接在一起時，往往統計的是一個菌落，故用此方法測得的細菌數偏低。（3）密碼子由三個相鄰的堿基組成，271個堿基和后面2個堿基一起共構成91個密碼子，插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構成24個密碼子，后面是uga，是終止密碼，翻譯結束，表達的蛋白質含115個氨基酸。1藍莓富含花青素等營養成分，具有保護視力、軟化血管、增強人體免疫力等功能。某同學嘗試用藍莓來制作藍莓果酒和藍莓果醋。（1）制酒中利用

6、的微生物是_，取樣后可用_觀察該微生物。發酵時一般要先通氣，通氣的目的是_。制酒過程中可在酸性條件下用橙色的重鉻酸鉀檢驗酒精的存在，檢驗后顏色變成_。（2）釀制成功的藍莓果酒如果暴露在空氣中酒味會逐漸消失而出現醋酸味，尤其是氣溫高的夏天更易如此，分析其原因是_。醋酸菌將乙醇變為醋酸的環境條件是糖源_(填“充足”或“缺少”)。（3）釀制藍莓果酒時，并不需要對藍莓進行嚴格的消毒處理，這是因為在_的發酵液中，絕大多數微生物無法適應這一環境而受抑制。（4）為鑒定藍莓果醋是否釀制成功，除可以通過觀察菌膜、嘗、嗅之外，還可以通過檢測和比較_作進一步的鑒定。2泡菜是一種獨特且具有悠久歷史的發酵蔬菜制品，回答

7、下列問題：（1）泡菜發酵原理是_。（2）泡菜制作中，需注意控制食鹽用量以及_，否則容易造成_而導致亞硝酸鹽增加，影響泡菜品質，所以泡菜制作過程中需要定期測定亞硝酸鹽的含量，一般采用_（方法）。（3）在制過程中，從外觀上可以看到泡菜瓶中有間性的氣泡沖出，壇蓋有響聲，其原因可能是_。（4）下圖為兩種發酵方式下的亞硝酸鹽含量的對比。由圖可知乳酸菌發酵較自然發酵的優點是_，兩種發酵方式下的亞硝酸鹽含量都是先增加后下降，出現這種變化可能的原因是_。3回答下列與微生物培養相關的問題：（1）對培養基進行滅菌的方法是_。要想檢測所倒的平板是否合格，具體操作是_。（2）微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法

8、和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法的操作過程分兩個步驟，即_和涂布平板操作，能在培養基表面形成單個菌落，菌落是指_。（3）在微生物的培養與觀察過程中，我們每隔一段時間統計一次菌落數目，選取_時的記錄作為結果，這樣操作的目的是_。4瓊脂是一種多糖類物質，由于很少有微生物能將其降解而成為配制固體培養基常用的凝固劑之一。某實驗室在處理一批已進行過微生物培養的廢棄固體培養基時發現，培養基上的微生物幾乎全部死亡，但在其中一個培養基上存在一個正常生長的細菌菌落，該實驗室研究人員對此提出“該種細菌能利用瓊脂”的假說。據此回答問題：（1）若要證明該假說的正確性，應該在配制培養基時，選擇以_為唯一碳源的固體培

9、養基進行培養，配制好的培養基需通過_法進行滅菌。（2）通過實驗證明該假說是正確，并且發現該瓊脂分解菌能分泌脫色酶，分解糖蜜發酵廢液的黑褐色色素。欲從獲得的菌種中分離出分解黑褐色色素能力強的細菌，可在培養基中加入從糖蜜發酵廢液中提取到的黑褐色色素，采用的接種方法是_。適宜條件下培養一段時間，發現菌落周圍形成圓形凹穴和透明圈，形成的原因是_；應選擇凹穴大且周圍透明圈大的菌落進行擴大培養。由于該菌種在自然界中極為稀少，欲長期保存該菌種，可以采用_法，具體操作是在3ml的甘油瓶中，裝入1ml甘油后滅菌，然后將1ml培養的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在-20的冷凍箱中保存。（3）實驗中需要及

10、時滅菌或消毒，才能保證實驗結果的準確性，下列各項可以使用干熱滅菌的是_（填標號）a實驗者的皮膚 b培養基 c吸管 d金屬用具 e玻璃棒 f培養皿5尿素是一種重要的農業氮肥。尿素并不能直接被農作物吸收，只有當土壤中的細菌將尿素分解之后，才能被植物利用。如圖是從土壤中篩選分離尿素的細菌的過程，請回答下列問題。（1）土壤中的細菌之所以能將尿素分解，是因為細菌能合成_。因此，圖中選擇培養基應以_為唯一氮源，尿素會被分解成_，使培養基的堿性增強。鑒別培養基還需添加_作指示劑，分解尿素的細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。（2）制備實驗所需的培養基時，在各成分都溶化后、分裝前，要

11、進行的是_和滅菌，對培養基進行滅菌的常用方法是_。（3）為檢驗培養基及培養皿滅菌是否合格，可采取的措施是_。（4）現將10ml的尿素分解菌懸液進行梯度稀釋，分別取0.1ml稀釋倍數為105的樣液接種到5個培養基上，培養一段時間后，統計菌落數分別為39、41、42、43、45，則1ml懸液中活菌數量為_個。6某研究小組分離提純葡萄皮上的野生酵母菌時，選取了從自然界中采集到的葡萄，用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中進行培養。回答下列問題：（1）配制酵母菌培養液時，需控制培養液的濃度，濃度過高則會導致另需加入一定劑量的青霉素等抗生素，其目的是_，對培養液進行滅菌時，切斷高壓蒸汽滅菌鍋熱源

12、后，須待觀察到_時，才能打開放氣閥以釋放鍋內余氣，最后開啟鍋蓋取出培養液。（2）該研究小組成功分離出某品種的酵母菌后，用等量菌液分別接種于3個盛有等量液體培養基的錐形瓶中，并分別置于轉速為150r/min、200r/min、250r/min的搖床上培養，檢測結果如圖1所示，搖床轉速為250r/min的酵母菌種群密度最大的原因是_。（3）圖2是采用血細胞計數板直接計數和稀釋涂布平板法計數兩種方法計數培養液中酵母菌數量時得到的結果，其中采用稀釋涂布平板法計數得到的是曲線_，下列判斷依據中正確的有_。稀釋涂布平板法只計數活的酵母細胞，死細胞無法形成菌落采用血細胞計數板直接計數時，可能會將死細胞與活細

13、胞一起計數采用稀釋涂布平板法計數時，兩個或多個細胞連在一起長成一個菌落采用稀釋涂布平板法計數時，因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目（4）通過如圖3所示的方法進行純化培養時，用移液槍取最終的酵母菌稀釋液0.1ml滴在培養基表面，然后將沾有少量酒精的涂布器_后再進行涂布。在恒溫培養箱中培養一段時間后，其中某組的4個平板上菌落數分別為69個、52個、44個、26個，則可以推測原酵母菌液中每毫升含菌數為_個。模擬優練1.【答案】（1）酵母菌 (光學)顯微鏡 酵母菌可在有氧條件下大量繁殖 灰綠色 （2）醋酸菌是好氧細菌，最適生長溫度為3035(夏天溫度較高，導致醋酸桿菌大量生長產生醋酸) 缺少 （3）缺

14、氧、呈酸性 (醋酸) （4）發酵前后的ph【解析】（1）常用酵母菌制酒，可以借助顯微鏡觀察酵母菌。發酵時一般要先通氣，是為了讓酵母菌在有氧條件下大量繁殖。在酸性條件下，橙色重鉻酸鉀遇酒精會由橙色變成灰綠色。（2）醋酸菌是好氧細菌，最適生長溫度為3035，故藍莓果酒如果暴露在空氣中酒味會逐漸消失而出現醋酸味。在氧氣充足，糖源缺少的情況下，醋酸菌可將乙醇變為醋酸。（3）在缺氧、呈酸性的發酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數微生物無法適應這一環境而受抑制，故釀制藍莓果酒時，并不需要對藍莓進行嚴格的消毒處理。（4）果醋發酵過程中，產生的醋酸會引起ph下降，故可以通過可以通過檢測和比較發酵前后的ph進

15、一步鑒定藍莓果醋是否釀制成功。2.【答案】（1）在無氧情況下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸 （2）腌制時間、溫度 細菌大量繁殖 比色法 （3）泡菜中除乳酸菌外，還有酵母菌和大腸桿菌等，酵母菌能將糖分分解為乙醇和二氧化碳等 （4）乳酸菌發酵可降低泡菜中的亞硝酸鹽含量，提前亞硝酸鹽峰值出現的時間，提高了泡菜食用的安全性 與硝酸鹽的還原和ph對亞硝酸鹽的影響有關（與硝酸還原菌等微生物作用和ph對亞硝酸鹽的影響有關）【解析】（1）泡菜發酵的原理是無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。在制作泡菜時所配制的泡菜鹽水，要煮沸，殺滅鹽水中的微生物，防止雜菌污染。（2）泡菜制作過程中，腌制的時間、溫度、鹽的用量等都

16、會影響泡菜的品質，否則容易造成細菌大量繁殖。檢測亞硝酸鹽含量的方法是比色法，在檢測泡菜中亞硝酸鹽含量的實驗中，必須先制備已知濃度的標準顯色液，將顯色反應后的樣品與其進行比對。（3）在發酵初期，泡菜壇內有時會長白膜，與之有關的微生物是產膜酵母菌，且會有氣泡從壇沿水槽內的水中間歇性溢出。這些氣泡的來源是：泡菜中除乳酸菌外，還有酵母菌和大腸桿菌等，酵母菌能將糖分分解為乙醇和二氧化碳等。（4）由圖可知乳酸菌發酵產生的亞硝酸鹽含量低于自然發酵，提前亞硝酸鹽峰值出現的時間，提高了泡菜食用的安全性，因此乳酸菌發酵生產的泡菜品質優于自然發酵生產的泡菜。泡菜腌制過程中，由于壇內環境中硝酸還原菌等微生物的繁殖，促

17、進硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，初期亞硝酸鹽含量增加；但隨腌制時間延長，乳酸菌大量繁殖，產生乳酸，環境ph改變，抑制硝酸還原菌等微生物的繁殖，使亞硝酸鹽含量逐漸下降。3.【答案】（1）高壓蒸汽滅菌法 將未接種（或接種等量無菌水）的平板在適宜條件下培養后，觀察是否有菌落形成 （2）系列稀釋操作 由一個細胞繁殖而來肉眼可見的子細胞群體 （3）菌落數目穩定 防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目【解析】（1）微生物的接種工具，如接種針、接種環或其他金屬用具，常用灼燒滅菌，如玻璃器皿、吸管等常用干熱滅菌，培養基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。要想檢測所倒的平板是否合格，具體操作是將未接種（或接種等量無菌水）的平板

18、在適宜條件下培養后，觀察是否有菌落形成，如果沒有菌落的形成，則配制的培養基合格。（2）稀釋涂布平板法的操作過程分兩個步驟，即系列稀釋操作和涂布平板操作，能將菌液中聚集在一起的微生物稀釋成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。菌落是指由一個細胞繁殖而來肉眼可見的子細胞群體。（3）在微生物的培養與觀察過程中，我們每隔一段時間統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定時的記錄作為結果，這樣操作的目的是防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目。4.【答案】（1）瓊脂 高壓蒸汽滅菌 （2）稀釋涂布平板法（或平板劃線法） 瓊脂分解菌分解瓊脂出現凹穴，分解黑褐色色素形成透明圈 甘油管藏 （3）cdef【解析】（1

19、）欲證明該種細菌可以利用瓊脂，利用篩選微生物的原理，應該選擇以瓊脂為唯一碳源的固體培養基進行培養，如果該種細菌能在此培養基上生長，則結論是正確的，否則就是錯誤的。（2）該瓊脂分解菌能分泌脫色酶，分解黑褐色色素，可在培養基中加入從糖蜜發酵廢液中提取的黑褐色色素，采用稀釋涂布平板法或平板劃線接種菌種，由于瓊脂分解菌分解瓊脂所以在培養基上形成凹穴，能分解黑褐色色素所以周圍形成透明圈。凹穴大，說明利用瓊脂的能力強，透明圈大，說明分解色素的能力強。對于需要長期保存的菌種，應用甘油管藏法長期保存。（3）實驗中可以使用干熱滅菌的有吸管、金屬用具、玻璃棒、培養皿等，實驗者的皮膚采用化學試劑消毒的方法，培養基采

20、用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。5.【答案】（1）脲酶 尿素 氨 酚紅 紅 （2）調ph 高壓蒸汽滅菌 （3）單獨設置一個滅菌后不接種菌液的培養皿（含培養基）進行培養 （4）4.2×107【解析】（1）土壤中存在能分解尿素的細菌，這些細菌之所以能將尿素分解，是因為能合成脲酶。要從土壤中篩選能分解尿素的細菌，應該用以尿素為唯一氮源的選擇培養基。細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養基的堿性增強，因此鑒別培養基還需添加酚紅作指示劑，在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑培養細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠產生脲酶，并分解尿素。（2）制備實驗所需的培養基時，在各成分都溶化后和分裝前，要進行的是調