1、1抗生素效價微生物檢定法抗生素效價微生物檢定法趙永成 生工1001 410410013921.概述一、抗生素的概念及一、抗生素的概念及抗生素的生物檢定抗生素的生物檢定 抗生素是由微生物所產生的極微量便抗生素是由微生物所產生的極微量便具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物生長的一類天然有機化合物。生長的一類天然有機化合物。 抗生素的生物檢定是以抗生素的生物檢定是以抗生素對微生抗生素對微生物的抗菌效力物的抗菌效力作為效價的衡量標準。作為效價的衡量標準。3一、抗生素的效價和單位一、抗生素的效價和單位 抗生素的含量抗生素的含量用效價和單位表示。該用效價和單位表示。該詞

2、有時不加區別統稱為效價單位。詞有時不加區別統稱為效價單位。 效價（效價（otency），指檢品的實際），指檢品的實際單位數與其標示量的比值。常表示為效價單位數與其標示量的比值。常表示為效價的百分數。的百分數。 單位（單位（unit,u）單位是衡量抗生素有）單位是衡量抗生素有效成分的具體尺度。效成分的具體尺度。4 、重量單位、重量單位 以抗生素的生物活性部分重量作以抗生素的生物活性部分重量作單位單位 微克（）單位，毫克單微克（）單位，毫克單位。位。、類似重量單位、類似重量單位 以特定的純粹抗生素鹽類的重以特定的純粹抗生素鹽類的重量作為單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環素鹽量作為單位。如純粹金霉素鹽酸

3、鹽及四環素鹽酸鹽（包括無生物活性的鹽酸根在內）微克酸鹽（包括無生物活性的鹽酸根在內）微克（）單位，毫克個單位。（）單位，毫克個單位。這是根據國際使用習慣而來的。這是根據國際使用習慣而來的。、質量折算單位、質量折算單位 以特定的純抗生素鹽的質量為以特定的純抗生素鹽的質量為單位而加以折算。青霉素單位而加以折算。青霉素0.6ug為為1單位單位、特定單位、特定單位 以特定的抗生素標準品的某一質量以特定的抗生素標準品的某一質量定為一單位。定為一單位。5微生物發的分類 稀釋法 濁度法 雙碟法67 2 2、濁度法濁度法系利用抗生素在液體培養基中對系利用抗生素在液體培養基中對試驗菌生長的抑制作用，通過試驗菌生

4、長的抑制作用，通過測定培養后測定培養后細菌濁度值的大小細菌濁度值的大小，比較標準品與供試品，比較標準品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的種方法。效價的種方法。83 3、管碟法：、管碟法：是利用抗生是利用抗生素在含敏感試驗菌的素在含敏感試驗菌的瓊脂培養基中的球面瓊脂培養基中的球面擴散滲透作用，從而擴散滲透作用，從而形成一定的抑菌圈。形成一定的抑菌圈。通過瓊脂培養基，可觀通過瓊脂培養基，可觀察并測量出抑菌圈的察并測量出抑菌圈的大小。大小。9一一 原理原理在一定的抗生素濃在一定的抗生素濃度范圍內，對數劑量度范圍內，對數劑量( (濃濃度度) )與抑菌

5、圈的表面積或與抑菌圈的表面積或直徑成正比，可以得出直徑成正比，可以得出一條曲線。一條曲線。 抗生素濃度換算成對抗生素濃度換算成對數，則抑菌圈直徑與抗數，則抑菌圈直徑與抗生素對數成直線關系生素對數成直線關系10管碟法的材料管碟法的材料一，儀器菌種 培養基 培養皿 牛角杯 陶瓦圓蓋二，試劑無菌生理鹽水 ph6.0的磷酸緩沖液 青霉素標準品儲備液 青霉素標準品使用液11管碟法測定操作管碟法測定操作 1.1. 試驗用菌液試驗用菌液 金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌的營養斜面培養物，接種于營養瓊脂斜面的營養斜面培養物，接種于營養瓊脂斜面上，在上，在35373537

6、培養培養20h20h到到22h22h，；臨用前用，；臨用前用水或者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備水或者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備用用122 供試品及標準品的配制 標準品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供標準品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供試品應放于干燥器內至少試品應放于干燥器內至少30min方可稱取。稱量方可稱取。稱量最好為最好為一次取樣稱量一次取樣稱量，動作迅速，不得反復稱取，動作迅速，不得反復稱取，取樣后立即將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。取樣后立即將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。 標準品的稱量最好用標準品的稱量最好用1/100,000克的分析天平，克的分析天平，樣品稱量不得低于樣品稱

7、量不得低于1/10,000克的分析天平。天平克的分析天平。天平中的干燥加入劑應保持經常注意更換。中的干燥加入劑應保持經常注意更換。 稱量結束后，超聲波處理后的磷酸緩沖液，稱量結束后，超聲波處理后的磷酸緩沖液，定容至刻度，過濾并稀釋。定容至刻度，過濾并稀釋。 13 雙碟的制備：雙碟的制備： 取內徑取內徑90mm、高、高1617mm的平底雙碟；的平底雙碟； 注入加熱融化的培養基注入加熱融化的培養基20ml，使在碟底內均，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層。勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層。 另取培養基適量加熱融化后，放冷至另取培養基適量加熱融化后，放冷至4850（芽孢可至（芽孢可

8、至60），加入規定的試驗菌懸液），加入規定的試驗菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。）適量（能得清晰的抑菌圈為度。） 二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在在 1824 mm。 14（二）抑菌圈的形成（二）抑菌圈的形成 在平板底部四邊，分別在平板底部四邊，分別對角注明對角注明“SH”、“SL” 和和“UH”、“UL”標記標記 將不銹鋼小管將不銹鋼小管(俗稱為牛俗稱為牛津杯津杯)放置在含敏感試驗放置在含敏感試驗菌的瓊脂培養基上。菌的瓊脂培養基上。thsluh15 以無菌滴管分別在每個以無菌滴管分別在每個牛津杯內加入相應的抗牛津杯內加入相應的抗生素溶液

9、至滿但不溢出生素溶液至滿但不溢出管外管外 且四杯內液面高度相同，且四杯內液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置蓋上平皿蓋，靜置30分分鐘。鐘。 16 將培養基置入適宜試將培養基置入適宜試驗菌生長的培養箱中，驗菌生長的培養箱中，瓊脂培養基中的試驗瓊脂培養基中的試驗菌開始生長。菌開始生長。1718 抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關；抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關； 比較抗生素標準品與檢品的抑菌圈大小，比較抗生素標準品與檢品的抑菌圈大小，可計算出抗生素的效價。可計算出抗生素的效價。 19計算檢品的效價 求出求出W和和V W=（SH+TH）-（SL+TL） V=（TH+TL）-（SH+SL） TH供試品高劑量的抑菌圈供試品高劑量的抑菌圈 TL供試品低劑量的抑菌圈供試品低劑量的抑菌圈 SH標準品高劑量的抑菌圈標準品高劑量的抑菌圈 SL標準品低劑量的抑菌圈標準品低劑量的抑菌圈20 求出求出=D log（IV/W） 供試品和標準品的