1、單克隆抗體藥物篇單克隆抗體藥物篇報告人：周洪學號：150820041專業：生物醫學工程單克隆抗體雜交瘤技術1.概述2.雜交瘤技術的基本原理3.骨髓瘤細胞核免疫細胞的選擇4.細胞融合和雜交瘤細胞的選擇培養5.雜交瘤細胞的篩選和細胞克隆化6.單克隆抗體的制備、純化和鑒定單克隆抗體(McAb)(McAb)1975年英國科學家Milstein和Kohler將產生抗體 的淋巴細胞同腫瘤細胞融合，成功建立了單克隆抗 體技術，而獲得1984年諾貝爾醫學和生理學獎。 每個B淋巴細胞僅專一地產生、分泌一種針對某 種抗原決定簇的特異性抗體，而腫瘤細胞可以無限 增殖，因此雜交瘤細胞可在體外培養或移植到體內 條件下分

2、泌大量結構與特性相同的高純度抗體。 單克隆抗體技術的最主要優點是可以用不純的抗 原分子大量制備純一的單克隆抗體。1975年將產生抗體的淋巴細胞同腫瘤細胞融合年將產生抗體的淋巴細胞同腫瘤細胞融合, 成功成功建立了單克隆抗體技術。建立了單克隆抗體技術。1984年獲得諾貝爾醫學和生理學獎。年獲得諾貝爾醫學和生理學獎。雜交瘤技術原理簡述動物免疫細胞融合雜交瘤細胞的篩選動物免疫動物體內的B 淋巴細胞在特定外來抗原的刺激下, 可以大量增殖變成漿細胞, 以分泌針對該抗原的抗體。這種抗體具有特異性, 動物免疫作用就是用特定的外來抗原對動物進行一次或多次免疫,以刺激其能分泌對于該抗原的B 淋巴細胞大量增殖, 從

3、而得到大量產生專一反應的B 淋巴細胞。細胞融合B 淋巴細胞受外來抗原刺激后可以分泌抗體, 但在體外存活時間很短（最多兩周）后即死亡。而骨髓瘤細胞不分泌任何免疫球蛋白, 卻能在體外長期存活。如果將這兩種細胞的特性結合起來, 就能得到既能分泌抗體又能在體外長期存活的細胞。然而在雜交過程中必然將產生混合物, 因此就需要進一步篩選出其中唯一有用的雜交瘤細胞。雜交瘤細胞的篩選雜交瘤細胞由于繼承了B 淋巴細胞和骨髓瘤細胞的雙重特性。能夠合成HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）和TK（胸腺嘧啶激酶）, 故在HAT (H-次黃嘌呤、A -氨基喋呤、T-胸腺嘧啶)培養基中可長期存活。在歷經2 周左右的時間

4、后即可得到該雜交瘤細胞, 成為制造單克隆抗體的細胞源。單克隆抗體制備的簡易過程單克隆抗體制備的簡易過程過程B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）克隆化培養抗體檢測雜交瘤細胞體外培養小鼠腹腔內增殖單克隆抗體雜交瘤細胞產生 單克隆抗體示意圖單抗純化方法：鹽析凝膠過濾離子交換層析親和層析法辛酸沉淀法單克隆抗體制備過程的注意事項嚴格進行無菌操作，防止污染（細菌、霉菌、支原體、細胞）根據實驗的目標及時進行細胞的檢測與篩選，（ELISA、IFA、凝集、中和，）對篩選得到的陽性細胞克隆進行早期單克隆（有限稀釋法）在單克隆細胞建株過程中不定期驗證檢測防止單

5、克隆細胞過度生長 、老化、死亡單克隆抗體在免疫診斷中的應用1.T細胞及其亞群單克隆抗體診斷試劑2.病原體的單克隆抗體診斷試劑3.腫瘤單克隆抗體診斷試劑4.激素、酶等生物活性物質單克隆抗體診斷試劑5.生物制劑的單克隆抗體偵檢試劑6.環境和食品衛生的單克隆抗體診斷試劑單克隆抗體技術的應用n病毒等微生物的中和抗體中和抗體n抗毒素蛇毒、破傷風毒素，等n被動免疫治療制劑n“生物導彈”診斷技術方法：診斷技術方法：ELISA（間接法、夾心法、競爭法）免疫熒光法膠體金放射免疫法單克隆抗體在靶藥物研制、疾病治療和預防中的應用1.在腫瘤中的應用2.在移植中的應用 a.在異體骨髓移植中的應用 b.在自體骨髓移植中的應用 c.在器官移植中的應用