1、畢 業(yè) 論 文題 目： 饑餓處理對江黃顙魚血 液pH值的影響姓 名： 李能勛學(xué) 號： 教 學(xué) 院： 地理與生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)班級： 生物科學(xué)2009級指導(dǎo)教師： 肖玲遠(yuǎn)（副教授）完成時間： 2013年 05月 20日 畢節(jié)學(xué)院教務(wù)處制 目 錄摘要iAbstractii1.引言11.1簡介11.2黃顙魚生理學(xué)研究進(jìn)展11.3黃顙魚研究的目的和意義12.研究的材料和方法22.1材料22.1.1實驗魚22.1.2器材和試劑22.2方法22.2.1購魚22.2.2馴養(yǎng)22.2.3分組處理22.2.4預(yù)實驗32.2.5正式實驗43.結(jié)果與分析53.1第一階段處理10天，實驗組，饑餓處理，對照組，正常投食，

2、血液PH值變化53.2第二階段處理20天，實驗組,饑餓處理，對照組正常投食，血液PH值的變化53.3結(jié)果64.討論7主要參考文獻(xiàn)9致謝10饑餓處理對江黃顙魚血液PH值的影響 作者姓名：李能勛 專業(yè)班級：2009級生物科學(xué)專業(yè)學(xué)號： 指導(dǎo)教師：肖玲遠(yuǎn)（副教授） 摘要：將市場上購買的江黃顙魚數(shù)十條在實驗室養(yǎng)殖1015天，待其體內(nèi)各項生理指標(biāo)穩(wěn)定后，選取形態(tài)大小相似的江黃顙魚40條，隨機分成兩組（各20條）：一組為實驗組，進(jìn)行饑餓處理，第一階段處理10天，第二階段處理20天后分別抽取血液，并用PH計測定其PH值。另一組為對照組，進(jìn)行正常喂食，同樣在10d、20d后分別取血測定其pH值。最終發(fā)現(xiàn)，饑餓

3、對江黃顙魚血液PH有一定的影響，實驗組（饑餓處理）血液PH值要小于對照組（給予正常投食），進(jìn)一步觀察可以發(fā)現(xiàn)，第二階段饑餓20d后血液pH值比第一階段饑餓10d后的血液PH值下降的要多，由此可得出，在一定條件下，饑餓可使江黃顙魚血液PH值降低，并且隨著饑餓時間的延長，其PH值下降的越明顯。 關(guān)鍵字：饑餓；江黃顙魚；血液；PH值Effects of pH of blood with Hunger Treatment on Pseudographs ChellianCandidate: Nengxun Li Major: 09 session of Biological SciencesStude

4、nt No.: Advisor:LingyuanXiao(Associate Professor）Abstract: 40 specimen of Pseudographs Chellian bought from the market, placed in the laboratory and cultured 10 to 15 d,When their blood index was steady, Divided them into two groups, one was experimental group, the other was control group. Experimen

5、tal group was hunger treatment, the control group was given food, Treating them with two stage, the first stage treated 10 d, the second stage treated 20 d and then through extracted blood from the P. Chellian The pH meter was used to determine, The results of experiment finally found that hunger ha

6、s certain influence on P. Chellian blood PH, The experimental group (hunger treatment) blood pH is smaller than that of the control group (given normal feeding), and further observation can be found, the second stage blood pH of experimental group declined much more than the first stage. Based on th

7、ese situation can draw such a conclusion, on some condition, hunger had a decreasing tendency on blood pH of P. Chellian, and the pH value declined much more with the contention of hunger. Key words: Pseudographs Chellian；hunger；pH of blood1.引言1.1簡介黃顙魚，又名黃臘丁，屬鲇形目，鲿科，黃顙魚屬，有四種：岔尾黃顙魚，江黃顙魚，光澤黃顙魚，瓦氏黃顙魚。黃

8、顙魚體呈黃色，背面稍黑，腹面呈白色，頭較大且扁，須四對，大多數(shù)種上頜須比較長。口下位，屬無鱗魚，背鰭和胸鰭的硬刺很發(fā)達(dá)，很尖，并且刺尖部帶有毒性，為淡水刺毒魚類中毒性較強的魚類之一。另外黃顙魚在搬運時容易相互之間劃傷，劃傷后，傷口容易感染，最終導(dǎo)致死亡。黃顙魚多在靜水中或緩慢流動的河水中活動，并沿底棲水底生活，白天底棲在湖泊水底，夜晚并游到水上面覓食。對環(huán)境的適應(yīng)能力較強。但其耐氧能力不是很強，在缺氧的狀況下，其會出現(xiàn)浮頭，如果在極低氧濃度環(huán)境中的話，就會窒息而死亡。因此在實驗室放養(yǎng)時，應(yīng)時刻用充氧泵充氧。或者將其放入循環(huán)水中。黃顙魚為雜食性動物，并且主要以肉食性為主，其取食多數(shù)在夜間進(jìn)行，主

9、要取食對象為：小魚，蝦，各種陸生或者是水生的昆蟲，小型的軟體動物和其他的水生無脊椎動物。而我們在實驗時主要給予投喂黃粉蟲，約兩天給予投喂一次，每次投喂2條（34g/條）。黃顙魚的食性隨著季節(jié)的變化而變化，并且不同種的黃顙魚其食性也有很大的差異。1.2黃顙魚生理學(xué)研究進(jìn)展有關(guān)黃顙魚生理生化方面的研究目前已有報道，如對瓦氏黃顙魚血清的鱗組分的測定1；黃顙魚消化器官蛋白酶和淀粉酶活性測定分析2；淡水白鯧、團頭魴、黃顙魚的主要消化酶活性對比研究3；中華倒刺鲃、黃顙魚和華鯪的消化酶活性的比較分析4；黃顙魚不同組織中同工酶的表達(dá)模式的研究等5；黃顙魚血清免疫球蛋白的純化及分子量的初步測定；紅細(xì)胞脆性和Hb

10、與水體pH值的關(guān)系6等。但對饑餓處理對江黃顙魚血液pH值影響的研究還未見報道。1.3黃顙魚研究的目的和意義黃顙魚，又名黃臘丁，其肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)豐富，深受廣大消費者所喜愛。但因為其生長緩慢，且又容易患其它疾病，容易劃傷，分布較為狹窄，死亡率高等等，因此得不到大規(guī)模的養(yǎng)殖和推廣，致使其價格較為昂貴，使廣大群眾難于購買。為此本實驗研究饑餓對黃顙魚血液PH影響，其目的就是為了豐富黃顙魚在飼養(yǎng)、疾病防治等方面基礎(chǔ)知識，從而為黃顙魚大面積養(yǎng)殖及提高經(jīng)濟效益和食用推廣提供理論依據(jù)。2.研究的材料和方法2.1材料2.1.1實驗魚實驗魚為江黃顙魚，雌雄兼有，形狀大小基本相似（體長約1012厘米），身體健壯，并且

11、在實驗室飼養(yǎng)了一段時間，其體內(nèi)各項生理指標(biāo)已穩(wěn)定。2.1.2器材和試劑 器材：PH計(上海今邁儀器儀表有限公司生產(chǎn))，燒杯，溫度計，濾紙，吸水紙，試管，注射器（帶針頭），解剖器，玻璃棒，容量瓶，酒精燈，石棉網(wǎng)，滴管。 試劑：PH計緩沖液，蒸餾水，肝素鈉溶液,復(fù)合電極的外參比補充液。2.2方法2.2.1購魚 購買體型大小、健康狀況一致的江黃顙魚數(shù)十條，在搬運回實驗室的過程中要在容器里多放點水，盡量減少震動，以防止體表劃傷而引起感染。2.2.2馴養(yǎng) 由于剛夠買回來的魚進(jìn)入了一個新的環(huán)境，其體內(nèi)的很多生理指標(biāo)還不穩(wěn)定，需要一定的適應(yīng)過程，因此必須先進(jìn)行侍養(yǎng)性喂養(yǎng)。在剛買過來的頭幾天，首先必須對魚進(jìn)行

12、消毒處理，消毒劑可選用高錳酸鉀、孔雀石綠，高錳酸鉀濃度為10ppm，孔雀石綠濃度為2ppm，消毒時間大約一周，每天一次。消毒處理結(jié)束后，將其放入循環(huán)水中，循環(huán)設(shè)備可以不斷更新水質(zhì)，清理雜質(zhì)，并且還可以清理水里面的一些細(xì)菌等，使魚能夠更好，更平安的生存。當(dāng)養(yǎng)殖到其能夠吃東西時（投喂黃粉蟲、蚯蚓），即已表明其體內(nèi)各項生理指標(biāo)基本穩(wěn)定，可以進(jìn)行分組處理了。2.2.3分組處理將魚在實驗室飼養(yǎng)了一段時間(約半個月左右)，待其能夠吃食物時，表明其體內(nèi)的各項血液生理指標(biāo)已基本穩(wěn)定，即可進(jìn)行分組，分組時一定要注意隨機性，這樣才能保證每一組中的魚體型大小基本一樣。分成兩組，一組為實驗組，進(jìn)行饑餓處理；另一組為對

13、照組，給予正常投食，讓其正常生活，約每兩天投喂一黃粉蟲。處理兩個階段：第一階段處理10天，第二階段處理20天。在處理過程中，應(yīng)隨時注意觀察其吃食等生活狀態(tài)。2.2.4預(yù)實驗為了確保實驗?zāi)軌虺晒Γ瑸榱四軌虻玫奖容^精確的數(shù)據(jù)，在實驗之前，必須多次進(jìn)行預(yù)實驗，以盡可能的熟悉實驗操作，并盡可能的減少誤差。在預(yù)實驗過程中，著重掌握PH計的使用，還有抽血、取血等基本操作過程。PH計的使用：本次實驗所選用的PH計為PHS3C型實驗室PH計（上海今邁儀器儀表有限公司生產(chǎn)），該儀器測量精度高（為0.01級），且反應(yīng)非常靈敏，測量非常方便。PH計在測量之前應(yīng)進(jìn)行標(biāo)定（以減少測量結(jié)果精準(zhǔn)性）。標(biāo)定用緩沖液為混合物磷

14、酸鹽、鄰笨二甲酸氫鉀、四硼酸納。標(biāo)定之前事先配好這三種標(biāo)準(zhǔn)的緩沖溶液。 標(biāo)定的緩沖溶液一般第一次用PH6.86的溶液，即0.025molkg混合物磷酸鹽溶液，第二次選用接近待測溶液pH值的緩沖液。如果待測溶液為酸性，就應(yīng)選pH4.00鄰笨二甲酸氫鉀緩沖液，如果待測溶液為堿性，就應(yīng)選pH9.18四硼酸納緩沖液。一般情況下，儀器在24h內(nèi)不需要標(biāo)定。標(biāo)定完成后，用清水清洗電極后即可對待測溶液進(jìn)行pH值測量。 PH值測量：標(biāo)定后的儀器，即可測量待測溶液的pH值。但這里要注意如果待測溶液溫度與標(biāo)定溶液溫度相同時或者是不同時，它們所進(jìn)行的測量步驟也不盡相同。其具體操作步驟如下：待測溶液溫度與標(biāo)定溶液溫度

15、相同時，測量方法如下：用蒸餾水清洗電極的頭部，再用待測溶液清洗一次。用玻璃棒攪動待測溶液，并搖動，使溶液混合均勻，再將電極插入待測溶液中，這時就能在顯示屏上讀出待測溶液的pH值。待測溶液溫度與標(biāo)定溶液溫度不相同時，其操作方法如下：用蒸餾水清洗電極的頭部，再用待測溶液清洗一次。用溫度計測出待測溶液的溫度值。按pH計上的“溫度”鍵，使儀器顯示為待測溶液的pH值，然后再按確認(rèn)鍵。用玻璃棒攪動待測溶液，并搖動，使溶液混合均勻，再將電極浸入待測溶液中，這時在顯示屏上就可以讀出待測溶液的pH值。數(shù)據(jù)測量結(jié)束后，應(yīng)將電極保護(hù)套套上，并且電極保護(hù)套內(nèi)應(yīng)加少量的外參比補充液。以保持電極的玻璃球濕潤，切記浸泡到蒸

16、餾水中，復(fù)合電極的外參比補充液為濃度3molL的氯化鉀溶液。抽血和取血：取血部位一般為尾靜脈和靠近心臟的主大動脈。首先將魚固定住，然后解剖，解剖時應(yīng)十分小心，不要剪破心臟主大動脈，用玻璃分針找到心臟的主大動脈，找到后將已用肝素浸潤過的注射器插入靠近心臟的大動脈中，緩慢的抽取血液，抽完后又繼續(xù)找到尾靜脈，又再抽取。抽血時應(yīng)格外的小心，不要將血液往外流，以保證血量。另外抽血時務(wù)必不要抽取流到外面的血液，因為外面的血液已經(jīng)和組織液相混，血液已被稀釋，這樣測出來的pH值已經(jīng)不在是血液本身的pH值。另外在抽取血液的整個過程中，動作要快，以保證血液的新鮮，防止血液的凝固。因此在預(yù)實驗中應(yīng)多次反復(fù)的練習(xí)。2

17、.2.5正式實驗預(yù)實驗之后，并已對抽血、取血，以及實驗儀器等各項操作非常熟悉的情況下，開始正式實驗。分組處理10天以后，即第一階段實驗正式開始。第一天做實驗組，第二天做對照組。實驗時，用干凈一次性注射器從黃顙魚心臟大動脈和尾靜脈處抽血，抽血時，動作要迅速，以防凝固，抽出的血量應(yīng)足以浸沒PH計復(fù)合電極玻璃泡，這樣才能真實地測出其血液的PH值。將抽取出的血液依次放在PHS3C型PH計下測量其血液PH值。在測完一個數(shù)據(jù)以后，在進(jìn)行下一個數(shù)據(jù)測量之前。PH計電極需洗干凈，并且應(yīng)用蒸餾水清洗，清洗后，應(yīng)待其晾干，或用吸水紙吸干外面的水珠，方可進(jìn)行測定。否則血液將會被稀釋了。導(dǎo)致測得的數(shù)據(jù)不精準(zhǔn)，將會增大

18、誤差。在將血液放入PH計電極下測量時，讀數(shù)時，應(yīng)待其示數(shù)穩(wěn)定后，即（PH計顯示屏上的數(shù)字停止跳動時），即為該條魚血液的PH值，至少應(yīng)停留2到3分鐘。最后將以上測得的實驗組、對照組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。3.結(jié)果與分析3.1第一階段處理10天，實驗組，饑餓處理，對照組，正常投食，血液PH值變化表一：饑餓處理對黃顙魚血液PH值影響序 號PH值分 組 第一階段（處理10天后血液PH值）第二階段（處理20天后血液PH值）實驗組對照組實驗組對照組17.027.356.897.1226.917.056.846.8537.497.527.566.7846.886.936.737.4456.837.196.267.

19、5667.027.757.077.4076.847.426.227.2187.096.896.476.9496.936.776.517.09106.977.246.737.33均數(shù)6.9987.2116.728*7.172注：* 表示差異顯著 * 表示差異極顯著實驗數(shù)據(jù)經(jīng)excel統(tǒng)計軟件處理并用雙樣本異方差t檢驗可知，第一階段處理10天（實驗組饑餓10天，對照組給予正常投食）后，P(T=t) 雙尾 =0.,大于0.05，由此可知兩組魚血液pH指標(biāo)有一定的差異，但不是很顯著，實驗組血液pH指標(biāo)要略小于對照組。結(jié)果表明饑餓處理后的江黃顙魚血液pH值有降低趨勢。 3.2第二階段處理20天，實驗組,

20、饑餓處理，對照組正常投食，血液PH值的變化第二階段，處理20天后，將實驗數(shù)據(jù)經(jīng)excel統(tǒng)計軟件處理并用雙樣本異方差t檢驗可知，P(T=t) 雙尾 = 0.，小于0.01，由此可知兩組魚血液pH指標(biāo)值存在明顯的差異，實驗表明隨饑餓時間延長江黃顙魚血液pH值降低越為顯著。3.3結(jié)果實驗結(jié)果經(jīng)excel統(tǒng)計軟件處理并用雙樣本異方差t檢驗可知，第一階段處理10天，實驗組和對照之間不存在顯著差異；而在第二階段處理20天當(dāng)中，實驗組和對照之間存在極顯著差異。由圖1、2觀測值還可看出，第二階段所得的數(shù)據(jù)波動比第一階段所得的數(shù)據(jù)要大一些，出現(xiàn)波動的原因可能是魚與魚之間個體的差異導(dǎo)致。 0第n條魚124567

21、891036.206.406.606.807.407.007.207.607.70血液pH值實驗組對照組圖1 第一階段處理，實驗組和對照組血液pH數(shù)值變化波動情況 0第n條魚124567891036.206.406.606.807.407.007.207.607.70血液pH值實驗組對照組圖2 第二階段處理，實驗組和對照組血液pH數(shù)值變化波動情況4.討論魚類的各項血液生理指標(biāo)正常穩(wěn)定對于魚的正常生長發(fā)育均起著極其重要的作用，因此魚類血液的各項指標(biāo)可以作為衡量魚類機體健康狀況的重要參數(shù)之一，然而魚類的血液指標(biāo)容易受各方面因素的影響，從而影響到其正常的生長發(fā)育和生存。這些因素如：饑餓、溫度（高溫或

22、低溫）、溶氧量、鹽濃度、重金屬離子、還有不同的生態(tài)環(huán)境等，這些因素的改變，終將導(dǎo)致魚體正常生理及生化等相關(guān)指標(biāo)改變【7】。魚類一般能經(jīng)受住長時間的饑餓，如有些黃顙魚能饑餓到長達(dá)65天左右的時間，在饑餓的過程中，其體內(nèi)將發(fā)生一系列生理生化的變化，以滿足其生命活動狀態(tài)，尤其是一些血液方面的指標(biāo)，如血液pH值、血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、紅細(xì)胞脆性、全血比重等，較容易受其影響。如饑餓對月鱧幾項血液指標(biāo)的影響【8】，饑餓對養(yǎng)殖鱸魚血液生理生化指標(biāo)的影響【9】。血液pH值即血液內(nèi)氫離子濃度的負(fù)對數(shù)，凡是細(xì)胞內(nèi)生化的改變均與血液pH有密切的關(guān)系，只有當(dāng)血液的pH值維持在相對恒定范圍時，機體才能維持正常的代謝

23、及生理功能活動，如果超出這個范圍，就會導(dǎo)致魚體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失調(diào)，終將導(dǎo)致其體內(nèi)正常代謝及生理功能發(fā)生紊亂，進(jìn)而對其生長和生活造成影響，嚴(yán)重者甚至?xí)?dǎo)致機體死亡。導(dǎo)致機體血液PH值降低的原因常見有代謝及呼吸性酸中毒【10】，另外還有食物方面，進(jìn)食酸性食物過多，可造成血液偏酸性。試驗結(jié)果表明，在饑餓初期，機體由于通過自身適應(yīng)性機能調(diào)整，血中PH幾乎無明顯改變，但隨著饑餓時間延長，血液PH值發(fā)生明顯改變。研究資料表明，饑餓狀態(tài)下瓦氏黃顙魚對身體儲能物質(zhì)的動用在饑餓后期主要為脂肪【11】， 而脂的有氧氧化化結(jié)果將導(dǎo)致體內(nèi)脂肪酸含量升高，脂肪酸氧化釋能同時，也會致體內(nèi)CO2升高。在饑餓狀態(tài)下, 對瓦氏黃顙

24、魚的氨氮排泄率測定結(jié)果表明, 瓦氏黃顙魚的氨氮排泄率在饑餓前期先升高后下降; 在饑餓 1020 d氨氮排泄率無顯著變化，20 d后氨氮排泄率呈下降趨勢【11】。氨氮排泄下降，致使體內(nèi)血中氨氮含量升高，而氨氮升高使魚體鰓組織破壞，且降低血液載氧能力，使呼吸機能下降【7】，呼吸機能下降將導(dǎo)致體內(nèi)CO2積聚，血PH下降。綜上所述，餓使江黃顙魚血液PH降低原因，可能是饑餓使體內(nèi)營養(yǎng)及能源物質(zhì)缺乏，導(dǎo)致魚體呼吸機能減弱，酸性物質(zhì)在體內(nèi)積聚過多而致，但具體發(fā)生機制還有待進(jìn)一步探討和研究。 參考文獻(xiàn)1 葉勤，李云，廖戎等. 瓦氏黃顙魚血清磷組分的測定及應(yīng)用. 化學(xué)研究與應(yīng)用，2002， 14（2）：239231.2 余濤，史立才，曲東風(fēng)等. 黃顙魚消化酶活性的初步研究. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué) 報，2002，24（5）：9294.3 陳章寶，