1、一、 For personal use only in study and research; not for commercial use二、三、四、 蒅名詞解釋膂1、基因克?。菏侵赴涯康幕蜻B接到載體上，構(gòu)建成重組體，再轉(zhuǎn)化入宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)。蒀或：是指在體外通過酶的作用將異源DNA連接到載體上，形成重組DNA并將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，從而擴(kuò)增異源DNA的技術(shù)。袈2、基因文庫：是指整個(gè)基因組或某一細(xì)胞所表達(dá)的基因所有克隆片段的集合體，包括基因裊組文庫和cDNA文庫。常用的從基因文庫中篩選目標(biāo)基因的方法：斑點(diǎn)雜交、扣除雜交、蝕免疫化學(xué)篩選法、染色體步移和差異表達(dá)基因篩選。羋3、cDNA文庫

2、：是指以所有mRNA為模板，不經(jīng)選擇地在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)合成互補(bǔ)的雙鏈，即cDNA，然后把cDNA與載體連接構(gòu)成重組DNA，再轉(zhuǎn)化入宿主細(xì)胞擴(kuò)增，建立cDNA文庫。羈4、管家基因：是指某些基因表達(dá)產(chǎn)物是細(xì)胞或者整個(gè)生命過程中都持續(xù)需要而必不可少的，這類基因稱之為管家基因。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因與核糖體蛋白基因等羂5、散彈測序法：又稱鳥槍測序法，是指大分子DNA被隨機(jī)地“敲碎”成許多小片段，收集這些隨機(jī)小片段并將它們?nèi)窟B接到合適的測序載體，小片段測序完成后，計(jì)算機(jī)根據(jù)重疊區(qū)將小片段整合出大分子DNA序列。莂6、功能基因組學(xué)：利用結(jié)構(gòu)基因組學(xué)提供的信息，以高通量，大規(guī)模實(shí)驗(yàn)方法及統(tǒng)計(jì)

3、與計(jì)算機(jī)分析為特征，全面系統(tǒng)地分析全部基因及其編碼蛋白的功能，包括生物學(xué)功能，細(xì)胞學(xué)功能，發(fā)育學(xué)功能。肇7、限制性內(nèi)切酶：是指能在特異位點(diǎn)（酶切位點(diǎn)）上催化雙鏈DNA分子的斷裂，產(chǎn)生相應(yīng)的限制性DNA片段，被稱為分子生物學(xué)家的手術(shù)刀。肈8、Ks：即細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶，是一類Ser/Thr蛋白激酶，與周期蛋白結(jié)合時(shí)，才具有蛋白激酶的活性，通過使靶蛋白磷酸化而產(chǎn)生相應(yīng)的生理效應(yīng)。莃9、RT-PCR：是指首先以mRNA為模板合成cDNA，然后再進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增的PCR。袀10、逐個(gè)克隆法：對連續(xù)克隆系中排定的BAC克隆逐個(gè)進(jìn)行亞克隆測序并進(jìn)行組裝（公共領(lǐng)域測序計(jì)劃）肀11、熒光定量PCR：是指

4、在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。膈12、基因組：又稱染色體組，是指一個(gè)物種單倍體的染色體數(shù)目，是生物體全部遺傳物質(zhì)的總和，主要指真核生物的核基因組和原核生物的類核基因組。螄13、基因組學(xué)：是指對生物體內(nèi)所有基因進(jìn)行基因組作圖（遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜）、核苷酸序列分析、基因定位、基因功能分析的一門學(xué)科。薂或：指從基因組水平（分子整體水平）研究遺傳的學(xué)科，主要是發(fā)展和應(yīng)用DNA制圖、測序新技術(shù)和計(jì)算機(jī)程序，分析生命體全部基因組的結(jié)構(gòu)與功能。衿14、啟動子：是指能被RNA聚合酶識別、結(jié)合并啟動基因轉(zhuǎn)錄的一段D

5、NA序列。芇15、腫瘤轉(zhuǎn)移：是指惡性腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)部位，通過各種途徑到達(dá)其他器官組織，并繼續(xù)生長、增殖形成性質(zhì)與原發(fā)腫瘤相同的轉(zhuǎn)移瘤的過程。膅16、顯性負(fù)突變：是指一對等位基因中因其中一個(gè)突變或丟失所致的另外一個(gè)正常等位基因的功能活性喪失，都稱為顯性負(fù)突變，在某些腫瘤中抑癌基因p53的一個(gè)等位基因的失活導(dǎo)致另一個(gè)正常等位基因也失去活性。羀17、Delta32突變：CCR5基因發(fā)生32個(gè)堿基缺失，在細(xì)胞膜表面所產(chǎn)生縮短的、無功能的穿膜蛋白質(zhì)，使HIV不能進(jìn)入T細(xì)胞。薈18、質(zhì)粒：是指存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀DNA分子，具有自我復(fù)制功能，帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標(biāo)記物，經(jīng)改造后具有多克

6、隆位點(diǎn)。莇19、細(xì)胞周期：是指細(xì)胞周而復(fù)始的生長分裂過程，并且呈現(xiàn)一定的周期，即指親代細(xì)胞分裂結(jié)束至子代細(xì)胞分裂結(jié)束的過程，又稱細(xì)胞增殖周期。薆20、腫瘤標(biāo)志：是指能反映細(xì)胞惡性演變的各個(gè)階段中表型及基因型的特性或特征，通稱為腫瘤標(biāo)志，包括生物學(xué)標(biāo)志、遺傳性標(biāo)志及生物化學(xué)標(biāo)志。螞21、血管增生：是指從已存在的毛細(xì)血管網(wǎng)上大量生成新生血管的過程，是由于細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)及細(xì)胞與細(xì)胞因子相互作用的結(jié)果。蟻22、載體：是指能攜帶和運(yùn)載目的DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞的一些DNA分子，它可以使目的DNA隨著宿主細(xì)胞的增生而無性繁殖或在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的DNA。蕆23、PCR：即以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以

7、一對分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為上、下游引物，在DNA聚合酶的作用下，以dNTPs為原料，按照半保留復(fù)制的機(jī)制，使目的DNA片段得到擴(kuò)增的技術(shù)。螃24、病毒癌基因（V-onc）：是指一類存在于腫瘤病毒中的，能使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。如v-src等。蒄25、SNP：即單核苷酸多態(tài)性，是指出現(xiàn)在基因組DNA分子的特定位置的單核苷酸的置換，或指在基因組上單個(gè)核苷酸的變異,包括置換、顛換、缺失和插入。SNP位點(diǎn)必須滿足該位點(diǎn)的變異在人群中出現(xiàn)的頻率大于1%。在基因組中，不同個(gè)體的DNA序列上的單個(gè)堿基的差異被稱為SNP。在人類基因組中大概每1000 個(gè)堿基就有一個(gè)SNP ,人類基因組上的SNP

8、總量可能超過十萬個(gè) 。莀27、Cyclin：是一類在細(xì)胞周期中，周期性的積累和降解的蛋白。即會隨細(xì)胞周期中的不同時(shí)期而進(jìn)行合成與降解。不同生物的細(xì)胞周期素具有共同的特點(diǎn)：蕆1）結(jié)構(gòu)中含有同源序列，被稱為細(xì)胞周期素盒，這是一個(gè)100-150個(gè)氨基酸的保守區(qū)域，負(fù)責(zé)或介導(dǎo)與CDK結(jié)合。膄2）在細(xì)胞周期的特定時(shí)相與CDK結(jié)合，作為CDK的調(diào)節(jié)亞基發(fā)揮作用。袁28、酶聯(lián)受體：細(xì)胞表面上的主要類型受體，其細(xì)胞質(zhì)區(qū)具有酶活性，或者和細(xì)胞質(zhì)中的酶結(jié)合，配體與其結(jié)合后，激活酶活性。腿29、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)：研究基因組的結(jié)構(gòu)并構(gòu)建高分辨率的遺傳圖、物理圖、序列圖和轉(zhuǎn)錄圖以及蛋白質(zhì)組成與結(jié)構(gòu)的學(xué)科。薇30、限制性片段

9、長度多態(tài)性/遺傳學(xué)標(biāo)記（RFLP）：是指用同一限制性核酸內(nèi)切酶消化不同個(gè)體的同一段DNA時(shí)，會得到長度不同的限制性片段，稱為RFLP(遺傳學(xué)標(biāo)記)?；驹恚禾囟ㄉ镱愋偷幕蚪MDNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶切后，產(chǎn)生分子量不同的同源等位片段，再通過電泳的方法分離和檢測這些片段。薄31、蛋白質(zhì)組學(xué)：在整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的組成及其活動規(guī)律的新興學(xué)科。它以蛋白質(zhì)組為研究對象（即一個(gè)細(xì)胞或一個(gè)組織中基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)），從整體活動的角度，來揭示和闡明生命活動的基本規(guī)律。薃主要包括：（1）細(xì)胞器蛋白組學(xué)；（2）表達(dá)蛋白組學(xué)羇32、K5：是由纖溶酶原中與血管抑素相連的聯(lián)環(huán)結(jié)構(gòu)域，由80個(gè)氨基酸殘基組

10、成，包括3個(gè)二硫鍵，分子量為16KD。蚇33、細(xì)胞通訊：是指體內(nèi)一部分細(xì)胞發(fā)出信號，另一部分細(xì)胞接收信號并將其轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞功能變化的過程。羅34、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：是指細(xì)胞針對外源信息所發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)生物化學(xué)變化及效應(yīng)的全過程。肁35、藍(lán)-白斑篩選：細(xì)菌如含編碼半乳糖苷酶的LacZ基因，能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)-白斑篩選。羀二、簡答題1.2. 螇人類基因組計(jì)劃的主要內(nèi)容（簡述）肂1)、HGP的目的：解碼生命；了解生命的起源，了解生命體生長發(fā)育的規(guī)律，認(rèn)識種屬

11、之間和個(gè)體之間存在差異的起因；認(rèn)識疾病產(chǎn)生的機(jī)制以及長壽與衰老等生民現(xiàn)象；為疾病的治療提供科學(xué)依據(jù)。螃2）、主要目的：闡明人類基因組的全部核苷酸序列，從整體水平上破譯人類遺傳信息，在分子水平全面認(rèn)識自我。蝿3）、核心內(nèi)容：是繪制人類的遺傳圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜、物理圖譜和序列圖譜。袇2、大規(guī)模測序的基本策略。蒃1）逐個(gè)克隆法：對連續(xù)克隆系中排定的BAC克隆逐個(gè)進(jìn)行亞克隆測序并進(jìn)行組裝（公共領(lǐng)域測序計(jì)劃）芁2）全基因組鳥槍法：在一定作圖信息基礎(chǔ)上，繞過大片段連續(xù)克隆系的構(gòu)建而直接講基因組分解成小片段隨機(jī)測序，利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行組裝。蒈3、引物設(shè)計(jì)的原則：（1）（2） 羆引物長度一般為18-30bp；（3）（

12、4） 襖堿基隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堆積現(xiàn)象，G+C含量應(yīng)在40%-60%；（5）（6） 羃避免發(fā)卡結(jié)構(gòu)形成，引物自身存在的連續(xù)互補(bǔ)序列一般不超過3bp；（7）（8） 薁兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免3端的互補(bǔ)重疊；（9）（10） 羆引物的堿基序列不應(yīng)與非編碼區(qū)域有同源性，應(yīng)位于高度保守區(qū)；（11）（12） 芅引物的3端無修飾，并盡量避免第一位堿基為第一二位堿基一定要與DNA模板配對，引物5端可以修飾。（13）（14） 莁上下游引物具有相似的Tm值、TapDNA聚合酶。芀4、藍(lán)白斑試驗(yàn)的原理肆是基因工程常用的篩選方法，可以確定目的基因是否已插入載體中，工作原理是目的基因插入后，干

13、擾lacZ基因，因而沒有半乳糖苷酶的表達(dá)，Xgal不分解，菌落呈白色。如果目的基因插入不成功，組件上的lacZ基因表達(dá)出a片段，宿主菌表達(dá)出w片段，組合成完整有活性的半乳糖苷酶，Xgal分解出游離吲哚，菌落變?yōu)樗{(lán)色。蚆5、舉例說明限制性內(nèi)切酶命名的原則膃限制酶的命名是采用Smith和Athens提議的方案，即第個(gè)1字母取自它來源細(xì)菌屬名的第1個(gè)字母，大寫,第2，3二個(gè)字母取自來源細(xì)菌種名的頭2個(gè)字母，小寫,如果它的來源菌還有株系，則有第4個(gè)字母；最后用大寫羅馬數(shù)字，代表同一菌株中不同限制酶的編號。聿前三個(gè)字母用斜體表示,如Hind代表從流感噬血桿菌(Haemophilus influenzac

14、) d株中分離到的第3個(gè)限制酶。膆6、蛋白質(zhì)組學(xué)在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用螃1）、通過尋找差異表達(dá)蛋白質(zhì),以發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)；薀2）、尋找用于診斷的疾病相關(guān)的標(biāo)記分子；袈3）、尋找疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)藥靶,以用于藥物設(shè)計(jì)；芆4）、研究疾病的致病機(jī)理等。膃7、Sanger雙脫氧鏈終止法測序的原理節(jié)即DNA鏈末端合成終止法 Sanger 法袀1）、單鏈DNA模板與寡核苷酸引物雜交，新的DNA鏈在DNA聚合酶催化下從引物末端進(jìn)行合成。在反應(yīng)混合物中除了有模板DNA、引物、 DNA聚合酶和4種底物dNTPs之外，還加入一定比例的四種2,3-雙脫氧核苷三磷酸ddNTPs(終止核苷)之一。例如，加入ddA

15、TP，則所得到的合成物產(chǎn)生一系列嵌套的DNA片段，通過熒光標(biāo)記替代發(fā)現(xiàn)其中每一個(gè)片段終止于序列的A堿基對。對其他三種堿基，采用同樣的方法，但需要不同的熒光標(biāo)記。莆2）、所有標(biāo)記的DNA片段混合物經(jīng)過電泳分離大小不同的片段，并對這四種標(biāo)記的片段進(jìn)行掃描。然后通過某一程序判斷條碼的順序并預(yù)測序列。 薄8、以干擾素為例，試述其細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的途徑螀干擾素與細(xì)胞因子介導(dǎo)的受體結(jié)合后使受體二聚化，使得結(jié)合在受體亞基上的JAK聚集并相互磷酸化而進(jìn)一步活化，同時(shí)將受體上的酪氨酸殘基磷酸化，STAT借助于SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合與受體激酶復(fù)合物的磷酸化酪氨酸殘基上，得以靠近JAK激酶。JAK使STAT的酪氨酸殘基磷

16、酸化，此時(shí)的STAT與受體的親和力降低并與之分離，磷酸化的STAT形成STAT復(fù)合體并移到細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合于啟動子的特定DNA序列，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。蠆9、理想載體應(yīng)具備哪些基本條件蒆1）復(fù)制子：在宿主細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制；羅2）同一限制性酶在載體上只有單一的酶切位點(diǎn)；蒂3）具有選擇性遺傳標(biāo)記；蒈4）有較多的拷貝數(shù)；薅5）分子量相對較小，有足夠大的接納目的基因的容量莆6）有較高的遺傳穩(wěn)定性。袀10、獲取目的基因的方法：蒁1）從基因組DNA中分離獲得；薅2）從基因文庫中篩選獲得（基因組文庫和cDNA文庫）；薃3）化學(xué)合成法；螞4）PCR擴(kuò)增；芀5）mRNA逆轉(zhuǎn)錄。蚅11、基因工程技術(shù)與基因調(diào)控原理之間的關(guān)系

17、。羄基因工程的目的是使目的基因能高效表達(dá)?；虮磉_(dá)受 DNA 結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)因子與核酸相互辨認(rèn)、結(jié)合等組成的表達(dá)體系的調(diào)控?；虮磉_(dá)調(diào)控可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后修飾、翻譯、翻譯后修飾等水平進(jìn)行 基因工程載體的構(gòu)建必需應(yīng)用表達(dá)調(diào)控的基本理論知識，應(yīng)用已知的調(diào)控序列進(jìn)行重組、改造。莄12、為什么拮抗VEGF 能拮抗腫瘤血管生成？請舉出拮抗VEGF 的三種生化策略。罿）VEGF通過增強(qiáng)血管的通透性，引起血漿蛋白（主要是纖維蛋白原）的外滲，為腫瘤細(xì)胞的生長和新生毛細(xì)血管網(wǎng)的建立提供了最佳的基質(zhì)。）VEGF與受體結(jié)合，發(fā)揮其特異性的內(nèi)皮細(xì)胞分裂原的活性，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。）VEGF提高血漿活化因子和尿激酶類

18、纖維蛋白原活化因子表達(dá)，促進(jìn)蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子的活化，具有促進(jìn)血管構(gòu)建作用，誘導(dǎo)血管生成。拮抗VEGF能抑制腫瘤血管增生。螅拮抗VEGF主要圍繞對VEGF的阻斷，降低VEGF活性和阻斷VEGF信號傳導(dǎo)通路。12 蒞利用抗體封閉原理阻斷VEGF和其受體結(jié)合，中和VEGF的單克隆抗體已進(jìn)入臨床使用；34 螂螯合VEGF受體2的單克隆抗體進(jìn)入臨床3期實(shí)驗(yàn)；56 螈VEGF抗體、VEGF受體的螯合蛋白及反義寡核苷酸顯著抑制視網(wǎng)膜和虹膜血管增生。78 裊利用基因治療阻斷、拮抗VEGF和受體的結(jié)合，包括以VEGF為靶點(diǎn)的基因治療，以flt-1為靶點(diǎn)的基因治療和以flt-2/KDR為靶點(diǎn)的基因

19、治療。螆14、P53 通過哪些機(jī)制介導(dǎo)細(xì)胞的生長阻滯薃1）P53對細(xì)胞增殖其負(fù)性調(diào)節(jié)作用，它與特定DNA序列結(jié)合后可誘導(dǎo)細(xì)胞停滯在G1期，抑制細(xì)胞的生長。螁2）當(dāng)P53基因活躍表達(dá)時(shí)，其產(chǎn)物P53蛋白作為一種典型的轉(zhuǎn)錄因子可促進(jìn)cipl基因的表達(dá)，產(chǎn)生p21，p21蛋白與CDK2酶結(jié)合，抑制該酶的活性，導(dǎo)致細(xì)胞不能進(jìn)入DNA合成期，細(xì)胞無法進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞分裂停止。羅3）DNA損傷激活p53在細(xì)胞周期的不同階段起不同作用，早期通過誘導(dǎo)p21對CDK-cyclin激酶的抑制，激活限制點(diǎn)，阻止細(xì)胞周期前進(jìn)，直到損傷修復(fù)，晚期引發(fā)細(xì)胞凋亡。袂15、K5作用的分子機(jī)制羈1）K5抗血管增生的研究是建立

20、在血管抑素基礎(chǔ)之上，二者可能有相似的抗血管增生的分子機(jī)制蕿2）K5能特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使細(xì)胞周期停滯，并能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡肅3）K5選擇性抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移是其抗血管增生的重要環(huán)節(jié)芃4）K5能通過抑制HIF-1和p42/p44 MAPK的活性下調(diào)內(nèi)源性血管刺激因子VEGF的表達(dá)蚃5）K5提高內(nèi)源性血管增生抑制因子PEDF的表達(dá)，有利于已打破的血管增生平衡恢復(fù)正常，K5對正負(fù)血管因子的調(diào)節(jié)是其抗血管增生的主要機(jī)制 莈6）K5和血管抑素抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖機(jī)制可能通過細(xì)胞外基質(zhì)中某些多糖分子如整合素來發(fā)揮作用，因?yàn)檎纤厥蔷S持MAPK活性所必需的 荿7）K5抑制炎癥細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，如血管內(nèi)皮

21、細(xì)胞生長因子、腫瘤壞死因子及白細(xì)胞介素-2等蚄8）K5降低血管通透性膁16、血管增生與腫瘤轉(zhuǎn)移 莁1）、血管生成不僅是腫瘤生長所必需，而且還是腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移所需要；葿2）、新生毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞能分泌膠原酶和組織纖溶酶原激活物，促進(jìn)基質(zhì)降解，便于腫瘤細(xì)胞脫落進(jìn)入血管和向鄰近基質(zhì)擴(kuò)散；肅3）、血管前期，循環(huán)中極少有腫瘤細(xì)胞，但在腫瘤血管化后，腫瘤細(xì)胞才持續(xù)出現(xiàn)在循環(huán)中。袃17、mRNA是怎樣成為cDNA文庫膀（1）提取mRNA；薈（2）用反轉(zhuǎn)錄酶oligo(dT)引導(dǎo)合成cDNA第一鏈；蒆（3）cDNA鏈第二鏈合成（用RNA酶H和大腸桿菌DNA聚合酶）；芁（4）加入合成接頭，將雙鏈DNA克隆到

22、載體中去，分析cDNA插入片段；衿（5）擴(kuò)增cDNA文庫，對建立的cDNA文庫進(jìn)行鑒定。蚈18、Viral Virulence: The capacity of a virus to cause disease in an infected host蚃Virulence can be quantitated: 肅1）、mean time to death；蚈2）、mean time to appearance of symptoms；螈3）、measurement of fever, weight loss；肄4）、measurement of pathological lesions (po

23、liovirus), reduction in blood CD4+ lymphocytes (HIV-1)蒁19、Viral genes affecting virulence:蟻（1）Affecting the ability of the virus to replicate袈（2）Modifying the hosts defense mechanisms蒅（3）Enabling the virus to spread in the host膂（4）Having intrinsic cell killing effects蒀20.Host defense systems against

24、 viral infections are multistep, sequential, and intercommunicating.袈1）、Physical and chemical defense：skin, acid pH, and surface-cleansing mechanism裊2）、 Cell-autonomus, intrinsic defense systems defense：蝕Production of cytokines, induction of apoptosis, interference with early steps of viral replicat

25、ion 羋3）、Innate and adaptive immune defense：羈、Direct, amplified response by coordinated action of cytokines and lymphocytes；羂、Infection cleared by pathogen-specific antibodies, helper T cells, and cytotoxic T cells；莂、Production and maintance of B-cell and T-cell memory cells immune host, ready to res

26、pond instantly to the same infection that induced the memory response.肇21、正常角膜沒有血管的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)肈 正常角膜，玻璃體等眼內(nèi)組織中PEDF具有較高的濃度，而PEDF具有很強(qiáng)的抑制血管的作用。在體外實(shí)驗(yàn)中，PEDF在半數(shù)有效量0.4nmol/L基礎(chǔ)上以劑量依賴方式特異性抑制內(nèi)皮細(xì)胞移行，并且半數(shù)有銷量量比血管抑素，血小板反應(yīng)蛋白-1，內(nèi)皮抑素活性更高。如果抽掉玻璃體體液中的PEDF，其抗血管生成的活性消失，而表現(xiàn)出刺激血管生成的活性。莃22、試從PCR的原理和應(yīng)用角度，談?wù)勂溆泻螌?shí)用價(jià)值袀PCR技術(shù)即無細(xì)胞分子

27、克隆法：以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)理沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。通過不斷重復(fù)這一過程，可以使目的基因（DNA片段）得到擴(kuò)增；另一方面，新合成的DNA片段也可以做為模板，因而PCR技術(shù)可使DNA的合成量呈指數(shù)型增長。肀應(yīng)用價(jià)值：） 膈生物學(xué)基礎(chǔ)研究：目的基因擴(kuò)增和鑒定；DNA序列測定；定點(diǎn)突變；基因表達(dá)分析。） 螄醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用：遺傳病基因診斷；致病病原體檢測；癌基因檢測；器官移植組織配型。） 薂法醫(yī)學(xué)物證鑒定：個(gè)體識別；親子鑒定。） 衿其他：動、植物檢疫（轉(zhuǎn)基因動植物檢測）；生物物種鑒定；系統(tǒng)進(jìn)化研究

28、；分子考古學(xué)等。芇補(bǔ)充： PCR是一種類似DNA天然復(fù)制過程的選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA片段的方法，其特異性依賴于一對人工合成的寡核苷酸引物，該引物與靶序列兩端互補(bǔ)。膅PCR由變性、退火、延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：羀）、模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱變性后，模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離成單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下一步做準(zhǔn)備。薈）、模板與引物的退火（復(fù)性）：模板經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度下降至適宜溫度（一般較低），使引物與模板單鏈按堿基互補(bǔ)原則退火結(jié)合。莇）、引物的延伸：將溫度升至，模板引物結(jié)合物在聚合酶的作用下，以為底物，以靶序列為模板，按堿基配對與半保留的復(fù)制原理，

29、合成一條新的與模板鏈互補(bǔ)的子鏈。薆上述三個(gè)步驟成為一個(gè)循環(huán)，新和成的分子繼續(xù)作為下次循環(huán)的模板，每完成一個(gè)循環(huán)需分鐘，經(jīng)多次循環(huán)（次）后就能將待擴(kuò)增目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。螞以技術(shù)為基礎(chǔ)，與其他相關(guān)的分析技術(shù)方法相結(jié)合，衍生了許多新型的分析技術(shù)，如不對稱、反向、實(shí)時(shí)熒光定量等。蟻23、病毒的分子生物學(xué)特點(diǎn)蕆包括基本結(jié)構(gòu)和輔助結(jié)構(gòu)，基本結(jié)構(gòu)為核衣殼，由衣殼和病毒核心組成，輔助結(jié)構(gòu)為包膜。其中病毒核心分為核酸，病毒基因組，病毒衣殼為包繞在核酸外面的蛋白質(zhì)衣殼，衣殼由殼粒組成，而殼粒由多肽分子組成。螃24、闡述影響腫瘤轉(zhuǎn)移的因素有哪些蒄腫瘤轉(zhuǎn)移是指惡性腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)部位，通過各種途徑到達(dá)其他器官

30、組織，并繼續(xù)生長、增值形成性質(zhì)與原發(fā)腫瘤相同的轉(zhuǎn)移瘤的過程。莀其機(jī)制極為復(fù)雜，主要與腫瘤細(xì)胞自身的特性、宿主細(xì)胞免疫狀態(tài)及轉(zhuǎn)移局部組織的特性有密切的關(guān)系，主要涉及以下四個(gè)步驟：蕆、惡性腫瘤細(xì)胞從其瘤組織中分離、釋放；膄、分離出來的瘤細(xì)胞游走并穿越細(xì)胞基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)而侵入血管、淋巴管等脈管系統(tǒng)。袁、瘤細(xì)胞侵入并附著在多種組織間隙；腿、瘤細(xì)胞在新的部位分裂、增值形成轉(zhuǎn)移性瘤組織。薇25、根據(jù)腫瘤轉(zhuǎn)移的過程和分子機(jī)制分析阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的策略和手段有哪些。薄1）、基因調(diào)控下的腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤轉(zhuǎn)移與促進(jìn)基因和抑制基因之間表達(dá)失衡相關(guān)。 薃2）、粘附分子與腫瘤轉(zhuǎn)移：粘附因子是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞

31、外基質(zhì)間粘附作用的膜表面糖蛋白。 在腫瘤轉(zhuǎn)移的每個(gè)環(huán)節(jié)均包含粘附與分離（粘附解聚）兩個(gè)方面。 羇3）、血管生成與腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移與血管形成密切相關(guān)、腫瘤新生毛細(xì)血管是在周邊組織原有的血管基礎(chǔ)上延伸擴(kuò)展形成、腫瘤本身能誘導(dǎo)血管的形成。蚇4）纖溶酶及其調(diào)節(jié)因子與腫瘤轉(zhuǎn)移：纖維蛋白溶解酶能水解大多數(shù)細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)，在血管形成、腫瘤細(xì)胞脫落、基質(zhì)浸潤、侵入和逸出循環(huán)系統(tǒng)、繼發(fā)臟器移行和微環(huán)境改造等發(fā)揮重要作用。羅5）基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與腫瘤轉(zhuǎn)移：細(xì)胞外基質(zhì)的溶解酶系統(tǒng)由一個(gè)龐大的蛋白溶解酶家族組成，稱為MMPs， MMPs及其抑制劑（TIMP）在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中擔(dān)任重要角色肁抗腫瘤

32、轉(zhuǎn)移的策略和手段：羀1）腫瘤轉(zhuǎn)移的基因治療pp 螇腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23基因治療靶點(diǎn)pp 肂基因轉(zhuǎn)染改變腫瘤細(xì)胞t PA/u PA的活性以阻斷腫瘤轉(zhuǎn)移pp 螃 ras基因表達(dá)阻斷 蝿2）血管生成抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移uu 袇 抗生素、維生素D3衍生物、維甲酸類、多磺基化合物、肝素類似物及細(xì)胞外基質(zhì)成分等 uu 蒃 血小板因子4（PF4）：能使FGF喪失生物活性，uu 芁 TNP-470 ：是煙曲霉素類似物。uu 芄 血小板反應(yīng)素-1（TSP-1）：能抑制血管生長因子。uu 螞 姜黃素：能抑制新生血管的形成和促進(jìn)微血管崩解。薀3）細(xì)胞粘附因子抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移蠆4）MMPs抑制劑與抗腫瘤轉(zhuǎn)移芇26

33、、為了實(shí)際工作需要產(chǎn)生了許多種PCR ，請簡述其名稱和作用。螂1）不對稱PCR：制備核酸序列測定的模板、制備雜交探針、基因組DNA結(jié)構(gòu)功能的研究羈2） 反向PCR：可對未知序列擴(kuò)增后進(jìn)行分析,如探索鄰接已知DNA片段的序列；用于僅知部分序列的全長cDNA的克隆,擴(kuò)增基因文庫的插入DNA；建立基因組步移文庫。膇3）多重PCR：用于檢測特定基因序列的存在或缺失。肆4）LP-PCR：大量臨床標(biāo)本的基因診斷、可同時(shí)檢測多種基因成分。袂5）錨定PCR：用于僅有一個(gè)引物的擴(kuò)增莂6）逆轉(zhuǎn)錄PCR：建立cDNA文庫，該技術(shù)主要用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，獲取目的基因，合成cDNA探針，構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。衿7

34、）原位PCR：可檢測細(xì)胞內(nèi)病毒感染、細(xì)胞內(nèi)基因重排、以及分析細(xì)胞內(nèi)RNA表達(dá)產(chǎn)物等方面發(fā)揮一定作用，在檢測細(xì)胞的潛在感染方面也具有重要意義。螅8) 熒光定量 PCR：通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對結(jié)果進(jìn)行分析,計(jì)算待測樣品的初始模板量。 羂試述細(xì)胞周期各時(shí)相中cyclins的表達(dá)規(guī)律。蕿根據(jù)細(xì)胞周期素在不同時(shí)相發(fā)揮作用可把細(xì)胞周期素分為G1細(xì)胞周期素和M期細(xì)芆胞周期素。薃1）、G1細(xì)胞周期素，在G1期或者G1/S交界處發(fā)揮作用，包括cyclinC、cyclinD、cyclinE等多種。羂、cyclinC在G1期中點(diǎn)、cyclinA出現(xiàn)之前，其在細(xì)胞內(nèi)的水平達(dá)到頂峰，提示其在G1期發(fā)揮作用。罿、細(xì)胞內(nèi)至少存在三種cyclinD：D1、D2、D3，它們在不同細(xì)胞內(nèi)表達(dá)模式是不同的，在人類hela細(xì)胞，cyclinD1在S期后上升，在M期達(dá)到頂峰，在G1中期逐漸消失；cyclinD3在G1期開始出現(xiàn)，逐漸升高，在S期達(dá)到頂峰。肈、有兩種cyclinE：E1和E2。cyclinE在G1中期出現(xiàn)，cyclinE-CDK復(fù)合物的活性最高峰在G1