1、菊花的組織培養菊花的組織培養課題背景課題背景植物細胞或組織，發育成完植物細胞或組織，發育成完整植株，需要什么條件？整植株，需要什么條件？什么叫植物細胞的全能性什么叫植物細胞的全能性？（1 1）概念）概念：具有某種生物全部遺傳信息具有某種生物全部遺傳信息的的任何一個細胞任何一個細胞，具有發育成完整個體的潛能。具有發育成完整個體的潛能。 . .植物細胞全能性表現的條件：植物細胞全能性表現的條件：離體、適宜營養、一定比例的激素、離體、適宜營養、一定比例的激素、無菌條件、適宜溫度、光照無菌條件、適宜溫度、光照當植物細胞，脫離了原來所在的植物體的器官或組織，而處當植物細胞，脫離了原來所在的植物體的器官或

2、組織，而處于于離體狀態離體狀態時，在一定的時，在一定的營養物質營養物質、激素激素和和其它外界條件其它外界條件的作的作用下，就可能表現出全能性，發育成用下，就可能表現出全能性，發育成完整植株完整植株。. .植物細胞具有全能性植物細胞具有全能性（3 3）（2 2）原因）原因：細胞內，含有：細胞內，含有某種生物全部遺傳信息某種生物全部遺傳信息植物細胞全能性的表現為什植物細胞全能性的表現為什么一定需要離體條件？么一定需要離體條件？（一）植物組織培養的過程：（一）植物組織培養的過程：生物的全部遺傳信息，仍具有發生物的全部遺傳信息，仍具有發育成完整新個體的育成完整新個體的。離體的植物離體的植物組織或細胞組

3、織或細胞外植體外植體有絲分裂有絲分裂脫分化脫分化愈傷愈傷組織組織長出叢芽長出叢芽生根生根移栽成活移栽成活長成植株長成植株再分化再分化（二）影響植物組織培養的因素：（二）影響植物組織培養的因素：菊花組織培養的實驗操作程序1.1.配制各種母液配制各種母液大量元素：濃縮大量元素：濃縮1010倍；倍；微量元素：濃縮微量元素：濃縮100100倍；倍；二者均常溫保存二者均常溫保存激素、維生素類激素、維生素類用量少的有機物用量少的有機物按按1mg/mL1mg/mL配成母液配成母液（1 1）一般要求）一般要求（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量； 減少微量試劑稱量所減少微量試劑

4、稱量所造成的誤差造成的誤差 （3 3）配制母液流程：）配制母液流程：稱量稱量溶解溶解混合混合定容定容標記標記保存（保存（4 4O OC C）（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量； 減少微量試劑稱量所造成的誤差減少微量試劑稱量所造成的誤差 微量元素微量元素 大量元素大量元素有機物有機物鐵鹽鐵鹽2.2.配制培養基，高壓蒸汽滅菌配制培養基，高壓蒸汽滅菌 依次加入大量元素、微量元素、有機物、激素依次加入大量元素、微量元素、有機物、激素母液母液根據各種母液的濃縮倍數，根據各種母液的濃縮倍數，計算計算用量用量將稱好的將稱好的瓊脂瓊脂加入加入800mL800mL蒸餾水，加熱，

5、蒸餾水，加熱，熔化熔化瓊脂瓊脂加入加入30g30g蔗糖蔗糖，攪拌均勻，攪拌均勻加蒸餾水加蒸餾水定容定容到到1000mL1000mL調節調節pHpH 分裝分裝到錐形瓶中到錐形瓶中（每瓶（每瓶50mL50mL100mL100mL）高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌滅菌立式高壓滅菌鍋立式高壓滅菌鍋要兼顧要兼顧藥劑的消毒效果和外植體的耐受力藥劑的消毒效果和外植體的耐受力幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長旺盛的幼幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長旺盛的幼嫩組織嫩組織 花藥（花粉）花藥（花粉）進行消毒進行消毒外植體外植體消毒液要完全消毒液要完全浸沒外植體浸沒外植體 消毒液：消毒液：70%70%酒精、酒精、0.1%HgC

6、l0.1%HgCl、 10%10%次氯酸鈉次氯酸鈉消毒時間依消毒時間依據材料而定據材料而定外植體外植體啟動超凈工作啟動超凈工作臺臺，如打開吹風和照明燈，如打開吹風和照明燈開關等等。開關等等。做好接種準備工作做好接種準備工作在等待外植體消毒的同時，做好接種準備工作：在等待外植體消毒的同時，做好接種準備工作：用酒精進行用酒精進行桌面消毒。桌面消毒。用酒精棉球對用酒精棉球對培養基和培養培養基和培養基瓶口進行消基瓶口進行消毒。毒。準備無菌紙準備無菌紙點燃酒精燈點燃酒精燈灼燒接種工具時，要注意安全灼燒接種工具時，要注意安全瓶外壁貼上標簽：植物名稱、接種日期、姓名等瓶外壁貼上標簽：植物名稱、接種日期、姓名

7、等接種后，在酒精燈火焰上轉動灼燒瓶口，加蓋接種后，在酒精燈火焰上轉動灼燒瓶口，加蓋貼標簽：貼標簽：植物名稱植物名稱接種日期接種日期姓名等姓名等愈傷組織開始分化愈傷組織開始分化愈傷組織愈傷組織培養室里培養箱中的培養培養室里培養箱中的培養切割、分瓶擴大繁殖切割、分瓶擴大繁殖珍珠巖珍珠巖：是一種火山噴發的酸性熔巖，是一種火山噴發的酸性熔巖，經急劇冷卻經急劇冷卻而成的玻璃質巖石，有弧形或圓形裂隙，而成的玻璃質巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結構，所以被命名為珍珠巖。如珍珠的結構，所以被命名為珍珠巖。是一種天然、無毒，在高溫作用下會膨是一種天然、無毒，在高溫作用下會膨脹比較少見的礦物質。屬于硅酸鹽。脹比

8、較少見的礦物質。屬于硅酸鹽。 蛭蛭 石：石：六、煉苗、移栽六、煉苗、移栽1、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈、接種的無菌操作（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養；、無菌箱中的培養；5、移栽到消過毒的環境中生存一段時間。、移栽到消過毒的環境中生存一段時間。在整個操作過程中，在整個操作過程中， 是如何來實現是如何來實現無菌無菌環境的？環境的？2.外植體的生理狀態外植體的生理狀態是成功進行組織培養的重要條是成功進行組織培養的重要條件之一。件之一。 生長旺盛的嫩枝生理狀況好生

9、長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導，容易誘導脫分化和再分化。脫分化和再分化。1. 1. 植物組織培養所利用的植物材料，植物組織培養所利用的植物材料，體積小、抗體積小、抗性差，對培養條件的要求性差，對培養條件的要求較高較高。用于植物組織培養。用于植物組織培養的培養基，同樣的培養基，同樣適合于某些微生物的生長適合于某些微生物的生長，如一些，如一些細菌、真菌等的生長。而培養物一旦受到微生物的細菌、真菌等的生長。而培養物一旦受到微生物的污染，就會導致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的污染，就會導致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的無菌操作。無菌操作。因為，花卉組織培養是在實驗室中進行，因為，花卉組織培養是在實驗

10、室中進行，條件是可控的。條件是可控的。此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環境此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環境為液體有機物營養環境，而不是能體現其整個植物為液體有機物營養環境，而不是能體現其整個植物體的光能自養體的光能自養在培養過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽在培養過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養的能力，是由細胞到一和根的形成，就具有了自養的能力，是由細胞到一個個體的演變過程個個體的演變過程1、高等植物是光能自養型生物，為什么在植物組、高等植物是光能自養型生物，為什么在植物組織培養過程中還需要提供有機物培養基？織培養過程中還需要提供有機物培養

11、基？2、培養過程中為什么需要進行光照、培養過程中為什么需要進行光照思思 考考1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養基及接種、培養基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入、接種操作時帶入4、環境不清潔、環境不清潔結合錄像結合錄像外植體滅菌與接種操作外植體滅菌與接種操作，談談組織培養污染的主，談談組織培養污染的主要途徑及怎樣預防污染？要途徑及怎樣預防污染？菊花的組織培養JLSSYJLSSYBYHBYH 菊花是菊科菊屬的多年生宿根草本植物,是我國的傳統名花和世界四大切花之一 長期以來菊花采用分株、扦插等無性繁殖方法進行繁殖 但是傳統的繁殖方法易受環境影響,繁殖周期長,隨著市場需 求的急劇增

12、加,已經不能滿足市場日益發展的需要。 植物組織培養具有增殖效率高、繁殖速度快的特點,可以用較短的時間和較少的空間生產出大量的試管苗扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 同常規的無性繁殖方法相比，組織培養快速繁殖法主要具有以下優點：（1 1）快速。）快速。采用常規的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生產幾株或幾十株，但用組織培養的方法則每年可以繁殖出幾萬甚至數百萬的小植株。（2 2）周年生產。）周年生產?；ɑ芙M織培養快速繁殖是在實驗室中進行，因條件可控，所以不受季節限制，可以全年進行連續生產。而常規的無性繁殖則受季節限制，只能在花卉生長季節進行繁殖。（3 3）經濟效益高。）經濟效益高。花卉組織培養快速繁殖所

13、需要的空間小，在一個200平方米的培養室內一年可生產試管苗上百萬株。如按每株1元計算，每年產值上百萬元。（4 4）以組織培養繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。）以組織培養繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。所以使用這項技術可讓優良的品種不斷地延續。組織培養與常規繁殖相比優點眾多組織培養與常規繁殖相比優點眾多植物組織培養過程示意圖植物組織培養過程示意圖 2、上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？、上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？沒有進行滅菌處理，試管也沒有做密封等。沒有進行滅菌處理，試管也沒有做密封等。專題專題3 課題課題1 菊花的組織培養菊花的組織培養試評價下列操作正確與否試評價下列操

14、作正確與否本課題內容小結本課題內容小結菊花組織培養基礎知識基礎知識實驗操作實驗操作植物體的植物體的組織培養組織培養影響組織培影響組織培養的因素養的因素細胞分化細胞分化細胞全能性細胞全能性組織培養過程組織培養過程營養營養激素激素環境條件環境條件MS固體培養基制備固體培養基制備外植體消毒外植體消毒接種接種培養培養移栽移栽栽培栽培作業：作業：P361、在植物組織培養過程中，為什么要進行一系、在植物組織培養過程中，為什么要進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。2、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長旺盛、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長旺盛的嫩枝？的嫩枝？三、接種

15、外植體三、接種外植體1.前期準備前期準備啟動超凈工啟動超凈工作臺（打開作臺（打開吹風和照明吹風和照明燈開關）燈開關）在等待外植體在等待外植體消毒的同時，消毒的同時，做后面的準備做后面的準備工作工作如點燃如點燃酒精燈、用酒酒精燈、用酒精棉進行培養精棉進行培養基和培養基瓶基和培養基瓶口的消毒、桌口的消毒、桌面的酒精消毒、面的酒精消毒、準備無菌紙等。準備無菌紙等。倒掉消毒液倒掉消毒液用無菌水反復沖洗多次用無菌水反復沖洗多次灼燒接種工具，注意安全灼燒接種工具，注意安全2.2.在酒精燈旁操作進行外植體切割和接種在酒精燈旁操作進行外植體切割和接種在無菌紙上切割外植體在無菌紙上切割外植體灼燒瓶口和鑷子灼燒瓶

16、口和鑷子用鑷子夾取外植體，迅速接種于培養基中，盡量使切口接觸用鑷子夾取外植體，迅速接種于培養基中，盡量使切口接觸培養基（幼嫩和細胞可充分接觸營養物質，該細胞細胞沒有細培養基（幼嫩和細胞可充分接觸營養物質，該細胞細胞沒有細胞外的保護層）胞外的保護層）1、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精、接種的無菌操作（酒精、酒精燈燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養；、無菌箱中的培養；5、移栽到消過毒的環境中生存一、移栽到消過毒的環境中生存一段時間。段時間。3、在整個操作過程中，是如何來實現無菌環境的？、在整個操作過程中，是如何來實現無菌環境的？【實驗目的】【實驗目的】 1.知道組織培養技術的基本原理知道組織培養技術的基本原理 2.嘗試植物組織培養技術的基本環節（培養基的配制嘗試植物組織培養技術的基本環節（培養基的配制及滅菌、外植體的選擇和消毒、接種的技術性操作）及滅菌、外植體的選擇和消毒、接種的技術性操作） 3.探究植物激素在植物組織