1、血清總膽紅素TBIL測定作業指導書1. 實驗原理血清中的膽紅素分為直接（結合）膽紅素和間接（未結合）膽紅素。大 多數方法是在1883年Ehrlich 提出的重氮法膽紅素測量法1，一些改良的方法已被用 來增進反應。這些改良的方法是使直接膽紅素直接和 重氮化合物進行反應，生成一種有顏色的化合物，而 間接膽紅素需要一種溶劑，如表面活性劑后才能進行 反應。膽紅素+DCA奧林巴斯總膽紅素試劑是改良的重氮法。使用一 種穩定的重氮鹽，2,4-二氯苯胺重氮鹽（DCA），與膽 紅素反應，形成紅色偶氮化合物，它在540nm吸光度 最大。在540/600nm時的吸光度與標本中總膽紅素的 濃度成正比。紅色偶氮化合表面

2、活性劑2. 標 本 ：2.1 病 人 準 備 ： 無 特 殊 要 求 。 最 好 用 禁 食 的 標 本 以 減 少乳糜血的干擾。2.2 類型：血清、肝素或EDTA血漿，應避光保存。3. 標本存放：1525C保存可穩定2天；28C保存可穩 定7天；-20 C保存可穩定3個月，如冰凍保存，不可反復 凍融！。4. 標 本 運 輸 ： 常 溫 條 件 下 避 光 保 存 運 輸 。5. 標 本 拒 收 標 準 ： 標 本 溶 血 、 細 菌 污 染 、 脂 血 、 非 避光保存運輸的標本。6. 實 驗 材 料6.1 試劑： 奧林巴斯總膽紅素試劑盒（ 試劑試劑 空白對照）6.1.1 試劑準備： 試劑為

3、即用式。6.1.2 試劑穩定性與貯存試劑避光保存于28C,若無污染，可穩定至失 效 期 。試 劑 有 效 期 為 18 個 月 。試 劑 必 需 避 光 保 存 。試 劑不可冰凍。6.1.3 變質指示：當試劑有濁度時，表 明有細菌污染， 不能繼續使用。6.1.4 注 意 事 項 ： 此 試 劑 為 體 外 診 斷 用 ， 不 要 入 口 ， 毒性還末確定；警告！腐蝕劑！不要入口；避免和眼 睛，皮膚或衣服接觸，如果接觸到，立即用大量的水 沖 洗 受 損 害 的 部 位 15 分 鐘 ，接 觸 到 眼 睛 或 吞 服 ，立 即 尋找醫療保護。6.2 校 準 品 ： 使 用 奧 林 巴 斯 校 準

4、品 對 自 動 分 析 儀 進 行 校 準 ， 參 見 生 化 檢 驗 校 準 品 和 質 控 品 .SOP 文 件6.3 質控品：參見生化檢驗校準品和質控品 .SOP 文件7. 儀 器 ： 奧 林 巴 斯 AU2700 生 化 分 析 儀8. 操 作 步 驟8.1 項目基本參 數： 參見生化檢驗奧林巴斯 AU2700 生 化 分 析 儀 項 目 測 定 參 數 .SOP 文 件 。8.2 儀 器 操 作 步 驟 ：參 見 生 化 檢 驗 奧 林 巴 斯 AU2700 生 化分析儀操作規程.SOP文件。9. 檢驗結果的判斷與分析10. 質量控制：在每一批標本中都應把非定值血清水 平I與II質控

5、做為未知標本進行分析，以2S為質控 警告限，3S為失控限，繪制質控圖，判斷是否在控。 質控規則參見生化室室內質控操作規程.SOP文件。11. 計算方法：以TruCal U 復合校準品校準儀器后， 在病人結果可報告范圍內，儀器直接報告可靠的檢測 結果無需手工計算，以卩mol/L 報告。手工測定計算 方法為： Au總膽紅素（卩mol/L）= Asx校準液濃度12.參考值范圍：嬰兒：出生24小時內v 150 卩 mol/L出生第2天22-193 卩mol/L出生第3天12-217卩mol/L出生第46天1.7-216 卩mol/L兒童： 一個月3.4-17卩mol/L成年人：1.7-21卩mol/L

6、參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所 差別。根據好的實驗室經驗，每個實驗室應建立自己 的參考值。13. 臨床意義： 膽紅素是血紅蛋白的降解產物。游 離 膽紅素非極性很強，幾乎不溶解于水。在血液中與白 蛋白形成復合物由脾臟向肝臟運輸。在肝臟中，膽紅 素與葡萄糖醛酸結合,生成可溶性膽紅素葡萄糖醛酸 酯由膽管排入腸道。溶 血（ 肝 前 黃 疸 ）、實 質 的 肝 損 傷（ 肝 性 黃 疸 ）和 膽管堵塞（肝后黃疸）都會導致血液膽紅素增高，形 成高膽紅素血癥。人群中常見先天性慢性高膽紅素血 癥，稱為Gilbert 綜合癥。由于膽紅素降解酶的功能 滯后以及出生后紅細胞破碎增多，使6070%的嬰兒 血液出現總膽紅素增高。常用的膽紅素檢測方法能檢 測總膽紅素和直接膽紅素。直接膽紅素的測定主要檢 測水溶性的結合膽紅素，因此可以根據總膽紅素和直 接膽紅素的差來估計游離膽紅素的含量。14.操作性能14.1 線性范圍：1.2513卩mol/L14.2精密度：精密度的評估是根據NCCLS推薦的標準 方法5, AU270