1、.排阻色譜SEQ分析排阻色譜SEQ分為GPC（凝膠滲透色譜）和GFC（凝膠過(guò)濾色譜）GPC主要用于聚合物領(lǐng)域，GFC主要用于生物科學(xué)領(lǐng)域。以下介紹島津GPC分析系統(tǒng)特點(diǎn)：以分子量大小分離：分子量大的先洗出，小的后洗出。按保留時(shí)間計(jì)算分子量分布。專用色譜柱分類：以分子量大小分類（表明分離線性范圍）。以流動(dòng)相分類使用四氫呋喃作流動(dòng)相。使用DMF作流動(dòng)相。（二甲基甲酰胺）使用氯仿作流動(dòng)相。使用水性溶液作流動(dòng)相。根據(jù)色譜柱線性分布，色譜柱可以串連使用，先連接分子量大的，再接分子量小的。島津GPC Vol.1.02軟件操作首先，在CLASS-VP中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行色譜分析，優(yōu)化積分后，得到理想的色譜圖和數(shù)據(jù)

2、，即去掉雜質(zhì)峰和負(fù)峰（Method Integration Events中Min Area最小峰面積，Intergate off禁止積分，WIDTH半峰寬 等等）。然后進(jìn)入GPC分析軟件：1 點(diǎn)擊開始程序GPCGPC for CLASS-VP出現(xiàn)下面對(duì)話框：在Data filename下為從CLASS-VP中由色譜文件（*。dat）轉(zhuǎn)換成的對(duì)應(yīng)GPC文件起名和排序號(hào) *.D* （如DLSICA。D01）。然后點(diǎn)擊OK 進(jìn)入下面菜單：在窗口中有以下七個(gè)處理功能圖標(biāo)： GPC GPC Mol GPC Super Single File configuration Method Weight Bat

3、ch Impose Chrmatogram Manager GPC配置 GPC方法 分子量 批處理 疊加 單色譜 文件管理上述圖標(biāo)中選擇 GPC GPC方法 即可以滿足日常分析應(yīng)用。 Method2下面再返回到CLASS-VP工作站中操作，先將其它界面最小化，如圖：如圖：選擇FileDataOpen打開標(biāo)準(zhǔn)品色譜數(shù)據(jù)選擇數(shù)據(jù)文件后，打開選擇FileMethodOpen 打開分析該標(biāo)準(zhǔn)品的方法（已優(yōu)化積分完畢）選擇AnalysisAnalyze 分析計(jì)算該標(biāo)準(zhǔn)品一次。3點(diǎn)擊最下方圖標(biāo)欄中的GPC for CLASS-VP圖標(biāo)，如圖：進(jìn)入下面界面：雙擊GPC方法 圖標(biāo)，進(jìn)入下面菜單：該菜單分為三部

4、分：Calibration Curve Table為校準(zhǔn)曲線表，編輯標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間Time，分子量Molecular等參數(shù)Calibration Curve（Linear）標(biāo)定后，顯示校準(zhǔn)曲線。Chromatograph 顯示打開的標(biāo)準(zhǔn)品GPC格式圖譜。4如圖選擇FileLoad LC Data file 選擇（2）中分析標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)轉(zhuǎn)換的GPC數(shù)據(jù)文件，確定 后顯示下面界面：點(diǎn)擊該界面中的 GET 鍵，得到下面界面：提問(wèn)是否Clear Calibration Table ？（清除現(xiàn)在的校準(zhǔn)表？）選擇 是 顯示下面界面：在Calibration Curve Table校準(zhǔn)曲線表中的Molecula

5、r 項(xiàng)中，分別鍵入各個(gè)組分峰的分子量然后點(diǎn)擊該表左下角的 Draw 顯示得到擬合曲線的界面： 在該界面（Calibration Curve（Linear）中，顯示標(biāo)定后的校準(zhǔn)曲線。如果校準(zhǔn)曲線擬合的不理想，可以點(diǎn)擊該曲線左下角的 Type 鍵，顯示下面界面，選中合理的擬合類型： 點(diǎn)擊 OK 得到下面重新擬合后的曲線：修正：*如果樣品與標(biāo)準(zhǔn)品一致（例如皆為聚苯乙烯）則不需修正。在上面界面中選擇ParameterGPC Parameter 如圖：出現(xiàn)下面界面：Name Q factor V- V-k 樣品名 粘度系數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)品值 標(biāo)準(zhǔn)品k值 如無(wú)則粘度系數(shù)Q和， k 皆輸入1 ，點(diǎn)擊 OK 校準(zhǔn)曲線

6、立即得到修正。*如果樣品與標(biāo)準(zhǔn)不一致（標(biāo)準(zhǔn)與樣品不一致）則需修正。在上面界面中選擇ParameterMH Conversion如圖：出現(xiàn)下面界面： V 粘度系數(shù)（據(jù)MH公式手冊(cè)查出鍵入），Vk 粘度系數(shù)（據(jù)MH公式手冊(cè)查出鍵入）PolymerA 標(biāo)準(zhǔn)品的，k 值。PolymerB 樣 品的，k 值。點(diǎn)擊 OK 校準(zhǔn)曲線立即得到修正。如果查不到樣品的粘度系數(shù)， k 值，則不做該相修正。粘度修正 ParameterMH Conversion在說(shuō)明書后有介紹，請(qǐng)仔細(xì)閱讀。 有時(shí)樣品，k值化學(xué)手冊(cè)查不到，可以不修正，則最后樣品的分析報(bào)告，為相對(duì)于標(biāo)樣(如聚苯乙烯)的分子量分布。（Mn ，M/W等）保存

7、校準(zhǔn)曲線：點(diǎn)擊FileSave File As出現(xiàn)下面界面：在File name 中鍵入*在Path name中確定保存路徑: : :點(diǎn)擊Save 鍵，該校準(zhǔn)曲線已保存完畢，將來(lái)使用者再做相同樣品，相同條件的GPC分析時(shí)可以隨時(shí)打開調(diào)用，不用每次分析都做標(biāo)準(zhǔn)品分析標(biāo)定。需要注意的是，如果分析條件發(fā)生變化（如流動(dòng)相，流速等），出峰的保留時(shí)間產(chǎn)生偏移較大時(shí)，應(yīng)該重新分析標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定校準(zhǔn)曲線，以保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確。5樣品的GPC 分析：現(xiàn)在可以返回到CLASS-VP中對(duì)樣品進(jìn)行色譜分析，分析結(jié)束后，執(zhí)行分析計(jì)算一次即可。也可以調(diào)入已做完的樣品色譜數(shù)據(jù)，執(zhí)行分析計(jì)算一次，都會(huì)得到相應(yīng)轉(zhuǎn)換的GPC 文件。然后進(jìn)入GPC 方法界面，點(diǎn)擊如圖Calculation GPC Calculation：出現(xiàn)下面界面：在LC Calc。Data ：中點(diǎn)擊圖標(biāo)打開需要的樣品GPC文件名在GPG Method ：中確認(rèn)所用的校準(zhǔn)曲線文件名，如下圖：點(diǎn)擊 確定再點(diǎn)擊上面界面中的Calculation 鍵，顯示下面界面：樣品的GPC計(jì)算即告完成。6分析報(bào)告檢查：點(diǎn)擊View菜單中各項(xiàng)點(diǎn)擊ViewSlice 檢查切片數(shù)據(jù)點(diǎn)擊ViewPeak 檢查個(gè)峰數(shù)據(jù)點(diǎn)擊ViewAverage Molecular Weight檢查分子量數(shù)據(jù)點(diǎn)擊ReportFormat 編輯報(bào)告輸出格式在下面界面各項(xiàng)中選擇打印內(nèi)容和