C 5 0中 華 人 民 共 和 國 衛 生 行 業 標 準WS / T 2 2 7 一 2 0 0 20 4 床檢驗操作規程編寫要求R e q u i r e m e n t f o r t h e t e c h n i c a l p r o c e d u r e ma n u a l i n c l i n i c a l l a b o r a t o r y2 0 0 2 一 0 4 一 2 0發 布2 0 0 2 一 0 7 一 0 1實施中華人民共和國衛生部發 布wS / T 2 2 7 -2 0 0 2前言 為了使臨床檢驗操作規程編寫規范化， 確保檢驗人員嚴格按規程進行常規操作， 保證檢驗質量， 特制定本標準。 本標準從2 0 0 2 年 7 月 1日起實施。 本標準由衛生部醫政司提出。 本標準的附錄A是標準的附錄。 本標準起草單位: 上海市臨床檢驗中心。 本標準主要起草人: 馮仁豐、 胡曉波。 本標準由衛生部委托衛生部臨床檢驗中心負責解釋中華人民共和國衛生行業標準ir1h 床檢驗操作規程編寫要求Re q u i r e me n t f o r t h e t e c h n ic a l p r o c e d u r e ma n u a l i n c l i n i c a l la b o r a t o r yws / T 2 2 7 一 2 0 0 2范圍 本標準規定了設計、 制定和使用臨床檢驗操作規程的基本要求。 本標準適用于各級各類醫療衛生單位編寫臨床檢驗操作規程， 也適用于臨床檢驗產品廠商編寫產品使用方法說明。2總則2 . 1 操作規程是檢測系統的組成部分， 是臨床檢驗的技術檔案 是保證檢驗結果準確可靠的必須內容。2 - 2 操作規程應是指導檢驗人員正確操作的依據。但操作規程不能用來彌補檢驗方法設計上的缺陷。2 . 3 操作規程必須含有質量管理內容， 包括進行檢驗的說明， 明確質量控制和糾正作用系統等。 這些書面文件是臨床檢驗操作規程的必須組成部分。2 . 4 操作規程由主任或主管技術人員負責編寫， 編寫內容含義必須明確( 無疑義) 、 完整。 要確保每個檢驗人 員能理解 ， 并嚴格按操作規程 的精確說 明進行操作 。3操作規程的 內容要求 每個檢驗項 目都必須具有明確而完整的操作規程資料以及精確的敘述。應具備下列內容:3 門實驗原理和/ 或檢驗目的( 概述) ; 可包括臨床應用和/ 或實用性。3 . 2 使用的標本種類和收集方法、 病人準備要求、 標本容器的要求、 拒收標本的規定、 標本處理方法、 標本儲存規定、 標本外送規定等。13 使用的試劑、 校準品、 控制品、 培養基以及其他所需物品。所有材料都須寫明廠商名、 產品號、 包裝量、 配制要求、 使用和儲存要求等3 . 4 使用的儀器廠商名、 型號， 本項目儀器使用具體要求和校準程序I5 每步操作步驟， 直至報告結果。3 . 6 控制品使用水平和頻率， 允許限的糾正措施。3 . 7 計算方法。3 . 8 參考值范圍。I9 操作性能的概要。如: 精密度、 病人結果可報告范圍、 方法學比較等。3 . 1 0 對超出可報告范圍的結果的處理3 門1 對檢驗結果為病危報警值的處理3 . 1 2 方法局限性( 如干擾物和/ 或注意事項) 。3 門3 參考文獻3 . 1 4 其他必須內容。中華人民共和國衛生部2 0 0 2 - 0 4 一 2 0 批準2 0 0 2 - 0 7 - 0 1 實施 IWS / T 2 2 7 一 2 0 0 24規程式樣和 內容 根據實驗室的大小和功能， 操作規程的格式也應有不同。在小型( 單一) 實驗室中， 有一本包括所有內容的操作規程即可。 在大型綜合的、 多部門的實驗室， 應有不同專業和內容的操作規程， 分放于各個專業室組。整套匯集的操作規程存放于科室負責人或相應場所。4 - ， 操作規程手冊的式樣應按實驗室要求和結構來確定。但都須包括質量管理內容， 以及匯集有關檢驗項 目操作規程。 每個規程須包括第 3章中敘述的內容。 規程手冊可設計成活頁本形式， 便于補充和修改。4 . 1 門每個項 目規程均應從第I頁起 ， 自成一冊， 便于更換。4 . 1 . 2 盡可能使用圖表或表格形式， 便于查閱。4 . 1 . 3 使用編號系統， 便于查閱。4 - 1 - 4 可做一些查閱卡、 流程圖、 廠商產品索引等為規程附錄， 反映最新動態4 門. 5 鼓勵使用電腦編寫規程， 簡化編輯和修訂程序。4 . 2 規程的使用對象4 . 2 . 1 行政和業務主管人員依據規程具體要求， 進行質量管理。 規程也反映實驗室開展檢驗技術水平。4 . 2 _ 2 熟練檢驗人員應隨時對照操作規程， 檢查實際操作狀況， 保證檢驗質量。對出現的問題及時糾正。在進行不熟悉的項目檢驗時， 按規程進行。 實現無人指導完成不熟悉的檢驗。4 . 2 . 3 新的檢驗人員和進修人員可從規程中學到詳細內容， 并嚴格按規程進行實際操作。5 以產品說明書直接作為規程的要求5 . 1 廠商一般都提供了詳細的產品使用說明。但是實驗室只有確實完全按照廠商要求， 使用指定牌號和型號的儀器、 指定的試劑、 指定校準品( 包括廠商和品種的一致) 以及指定具體每一步操作步驟， 而且定期對儀器做保養和校準， 實驗室才可直接采用廠商產品說明書作為自己的操作規程。5 . 2 實驗室對廠商規程要求有任何變動和修改的， 則產品說明書不能直接作為實驗室的操作規程。5 . 3 直接引用的產品說明書必須是中文的使用說明， 不可用外文說明。 必須包括第3 章中敘述的內容。6操作規 程的格 式要求 在實驗室中各種類型、 各個項目、 各個操作方法的規程應確定統一格式。1 每個項目、 每個方法的操作規程的第 1 頁頁首， 要注明:1 . 1 操作規程項目名稱。1 . 2 操作規程的單位及部門。1 . 3 文件編號。1 . 4 版本15 頁序和總頁數1 . 6 批準實施 日 期。1了 規程有效期， 以及復審計劃。， . 8 規程分發部門和/ 或個人。19 規程編寫者、 審批者， 以及保管者1 . 1 0規程修訂記錄。行U八kU行卜目n卜U幽U尸卜U戶匕戶0G在以后各頁的眉首均有操作規程字樣及文件編號， 并印有橫線。在每頁的右下腳印有頁序。在定期復審或發現問題時， 需要作部分修改的或更新的， 應注明新確認的年月及版本。 并由主任或，L月，口嘆C曰主管簽名認可。 2wS / T 2 2 7 一 2 0 0 27操作規程的修改7 . 1 在使用和復審中， 需要對規程作修改或更新時， 應有充分的實驗資料證明確有修改的必要， 并明確須修改的具體內容。了 . 2 編寫者完成修改后， 由實驗室主任審核， 經審核同意， 修改稿以新版本形式更換原有規程， 并通知各有關部門。7 . 3 實驗室主任應將原版本和新版本規程， 以及實驗資料， 合并為規程修改文件， 另行保管備查。WS / T 2 2 7一 2 0 0 2 附錄A ( 標準 的附錄)檢驗操作規程示例A 1 例 1 : 血清總膽固醇( T C) 測定A 1 . 1 第 1 頁頁首內容 血清總膽固醇( TC ) 測定( 酶法， C H O D - P A P法) XX醫院檢驗科 操作規程文件號: C G XXXX 第 3版 共 XX頁 1 9 9 9 年 1 月 2 0日 起實施 本規程每 2 年復審一次 復審日期: XXXX年XX月XX日 復審人: XXX( 簽名) 規程編寫者: XXX 審批者: XXX 批準日期: 1 9 9 9 年 1 月1 9日 文件分發部門和/ 或個人: 醫務科; 保管者: XXX( 簽名) 院長辦公室; 保管者: XXX( 簽名) 院檔案室; 保管者: XXX( 簽名) 檢驗科; 主任: XXX( 簽名) 臨床化學檢驗室: XXX( 簽名)A1 . 2 原理 血清中的膽固醇醋( C E ) 被膽固醇醋水解酶( C E H) 水解成游離膽固醇( C h o l ) ， 后者被膽固醇氧化酶( C H O D ) 氧化成 一 膽街烯酮， 并產生過氧化氫， 再經過氧化物酶( P O D) 催化 4 - 氨基安替比林與酚( 三者合稱P A P ) ， 生成紅色醒亞胺色素( T r i n d e r 反應) 。醒亞胺的最大吸收在 5 0 0 n m左右， 吸光度與標本中總膽固醇呈正比。反應式如下 : 膽 固 醇 酷 + H 戶C E H 膽 固 醇 + 游 離 脂 肪 酸 膽 固 醇 斗 。 2 一 H o n 膽 幽 烯 酮 + H 2 0 , 2 H 必+ 4 - 氨 基 安 替 比 林 + 酚 三 里醒 亞 胺 + 4 H 刀A1 . 3 標本采集與處理 對于血脂分析， 特別需要強調“ 分析前” 各個環節的質量管理A1 . 11 受檢者( 體檢對象或病人) 的準備: 除總膽固醇不一定用空腹血外 ， 測定甘油三醋、 脂蛋白與載脂蛋白的病人必須空腹 1 2 h ， 不飲酒 2 4 h后采集血樣。對于體檢對象抽血前應有 2 周時間保持平時的飲食習慣， 近期內體重穩定， 無急性病、 外傷、 手術等意外情況。 妊娠后期各項血脂都會增高， 應在產后或終止哺乳后 3 個月檢驗才能反映其基本血脂水平。 注意有無應用影響血脂的藥物， 如降血脂藥、 避孕藥、唆嗦類利尿劑. R 受體阻滯劑、 免疫抑制劑、 某些降壓劑、 降糖藥、 胰島素及其他激素制劑等， 檢驗以前應根據所用藥物的特性停止用藥數天或數周， 否則應記錄用藥情況。對體檢對象及做前瞻性觀察者， 還應ws / T 2 2 7 一2 0 0 2 注意采血的季節， 因為血脂水平有季節性變動， 為了前后比較應在每年同一季節檢驗。應囑體檢對象在 抽血前 2 4 h內不作劇烈運動。 Al . 12 靜脈采血 除非是臥床的病人， 一般在采血時取坐位體位影響水分在血管內外的分布， 因此 影響血脂水平。例如站立 5 min可使血脂濃度提高 5 0 o , 1 5 mi n提高 1 6 0 o ， 故在采血前至少應靜坐 5 mi n 。一般從肘靜脈取血， 使用止血帶的時間不超過 1 m i n ， 穿刺成功后立即松開止血帶。靜脈阻滯 5 mi n 可使甘油三醋增高1 0 0 o -1 5 0 5 A l . 13 抗凝劑: 我國多用血清作血脂檢驗 如用血漿， 多主張 用E D T A N a z ( 1 m g / m 工 ) 抗凝。 抗凝血漿 中的總膽固醇和甘油三醋水平比血清中約低 3 0 o , E D T A用量越多 血漿水平偏低越明顯。但肝素抗凝 不影響血漿中水平 Al . 3 . 4 標本處理: 血標本應盡快送實驗室 室溫下放置3 0 min -4 5 mi n 后離心分離血清或血漿。 置潔 凈試管加蓋保存。在室溫中放置不超過 3 h , 4 C保存可穩定 4天。置一7 0 C可長期保存， 但不可反復 凍融 A l . 4 試劑 A l . 4 . 1 酶試劑: 本科使用xx公司/x產品號試劑盒， 為干粉試劑。臨用前用水復溶即可使用。每瓶 十粉用水x x ml復溶。復溶后試劑內各主要成分如下: 磷酸鹽緩沖 液p H 7 . 7 0 . 4 m o l / I 假單胞菌膽固醇醋水解酶X8 0 0 U / 1 - 奴卡氏菌膽固醇氧化酶妻4 0 0 U/ L 辣根過氧化物酶-l 0 0 0 U/ I 膽酸鈉3 m m o l / 1 , 4 - 氨基安替比林。 . 5 mm o l / L 酚3 . 5 m m o l / L 聚氧乙烯表面活性劑3 g / L A l . 4 . 2 總膽固醇校準血清: 也由xx公司提供， 產品號為xxo A l . 4 . 3 試劑與校準血清的穩定性: 未開瓶的試劑于4 C保存， 可穩定至有效期。復溶的試劑在 2 C 8 C 可穩定 7天， 1 5 C-2 5 C 可穩定 3 天。如在穩定期內試劑出現明顯的粉紅色， 棄去不用 A1 . 5 儀器 xx型號光電比色計 ， 具 5 0 0 n m-5 2 0 n m濾光 片。 Al . 6 操作 標本為及時分離的空腹血清， 以及肝素或E D T A抗凝血漿。 本法為終點法。 測定時標本管與標準管 分別加人標本與校準血清各 1 0 p L , 酶試劑 1 . 0 0 m 工 J ， 混勻后在 3 7 C 放置 5 m i n ， 或 2 0 C-2 5 C 放置 1 0 m i n 后用比色計比色， 以試劑空白調零， 波長5 0 0 n m或 5 2 0 n m, 顏色至少穩定6 0 mi n ,A 1 . 7 計算x C(A 飛 )式中 C -測定血清總膽固醇濃度， mm o l / I ; A a r ;t 標本管吸光度; A t ,標準管吸光度; C校準血清中總膽固醇濃度， mm o l / I。A 1 . 8 操作性能A 1 . 8 門精密度: 批內 v1 . 5 %， 批間C v1 7 0 p mo l / L時有明顯負干擾。 抗壞血酸與甲基多巴血中濃度高于治療水平時也使結果偏低。 高甘油三醋血癥( 血清混濁) 在本法中( 血清與試劑量 1 1 0 0時) 一般無明顯影響。 注 1 本法為中華醫學會檢驗學會推薦的總膽固醉測定常規方法( 見中華醫學檢驗雜志 1 9 9 51 8 : 1 8 5 ) , 2 試劑中兩種酶膽固醇醋水解酶和膽固醇氧化酶的質量十分重要。必須能有效地水解各種脂肪酸的膽固醉醋( 有 些微生物來源的醋酶不易水解花生四烯酸酷) ， 對膽固醇的氧化必須完全。選擇試劑盒時應側試對血清標本總 膽固醇的反應速度， 好的試劑一般能在5m。內( 有的只要 1 m i n -2 min ) 反應達到終點。 反應不能在1 0 m i n內 完成的試劑不宜采用， 其原因可能是原酶質量不好或酶用量太少， 后者可使高膽固醇結果偏低。本法所用試劑， 要求標本與酶試劑用量的比例為 1哥 1 0 0 ， 使可報告范圍上限達 1 3 mmo l / L ， 過多地提高標本比例， 會使側定上 限降低。如果標木中總膽固醇濃度超過1 3 m mo l / 1 . . 可用生理鹽水稀釋后重新測定?，F在臨床很少要求做游離 膽固醇測定， 如需做游離膽固醇測定， 最簡便的也是酶法， 即在上述總膽固醉試劑中省去酷水解酶。一般游離膽 固醇約占膽固醇的 3 0 環左右 3 總膽固醇測定要求標準化 與國際標準取得一致， 必須有準確可靠的標準參考物質( S RM ) 1 )酶法測定總膽固醇時， 血清中大部分膽固醇是酷化的， 而且血清基體對酶反應有明顯影響 不可使用純膽固 醇溶液為標準。國際上由美國國家標準與技術研究院( N 1 S T ) 提供代號為S R M 9 0 9的人參考血清， 作為總膽 固醉測定的一級標準; 我國也已建立了國家一級標準G B W 0 9 1 3 8 人血清膽固醇標準物質” 。常規使用的試 劑盒必須具有可追溯于以上參考血清的校準血清， 方能保證檢驗結果準確可靠 2 )不可使用總膽固醇的定值控制品作標準. 3 )本法使用的校準血清為液態， 用前必須充分混勻。A 1 . 9 參考值 人群血脂水平主要決定于生活因素， 特別是飲食營養， 所以各地區調查所得參考值高低不一， 應根據冠心病流行病學研究及臨床經驗統一制定高膽固醇劃分標準。歐美國家制定的標準大致相同， 4 0歲以上人群總膽固醇水平高低的劃分大致可定為: 合適水平5 . 1 7 m m o l / L ( 2 0 0 m g / d l ) ; 邊緣水平5 . 1 7 mmo l / I 一6 . 4 6 m mo l / 1 , ( 2 0 1 mg / d l - - 2 1 9 mg / d l ) ; 高膽固醇血癥妻6 . 4 7 m mo l / L( )2 2 0 m g / d i),Al . 1 0 臨床意義 影響總膽固醇水平的因素有:A1 . 1 0 . 1 年齡與性別?？偰懝檀妓酵S年齡上升， 但到7 0 歲或 8 0 歲后有所下降， 中青年期女性低干男性， 5 0 歲以后女性高于男性;Al . 1 0 . 2 長期高膽固醇、 高飽合脂肪酸和高熱量飲食可使總膽固醇增高;Al . 1 0 . 3 遺傳因素;Al . 1 0 - 4 其他。如缺少運動、 腦力勞動、 精神緊張等可使總膽固醇升高。 高膽固醇血癥是冠心病的主要危險因素之一。病理狀態下高膽固醇有原發與繼發的兩類。原發的如家屬性高膽固醇血癥( 低密度脂蛋白受體缺陷) 、 家屬性 a p o - B缺陷癥、 多源性( p o l y g e n i c ) 高總膽固醇、 混合性高脂蛋白血癥。繼發的見于腎病綜合征、 甲狀腺機能減退、 糖尿病、 妊娠等。 低總膽固醇血癥也有原發的 與繼發的， 前者如家屬性的無R 或低脂蛋白血癥; 后者如甲 亢、 營養不良、 慢性消耗性疾病等。低總膽固醇者容易發生腦出血， 也可能易患癌癥( 未證實) 。肝臟是膽固醇及卵磷脂膽固醇酞基轉移酶( I , C A T) 合成的器官， 嚴重肝病病人血清總膽固醇不一定很低， 但由于血清卵磷脂膽固醇酞基轉移酶活力低下， 血清膽固醇醋占總膽固醇的比例可低達 5 0 %以下。wS / T 2 2 7 一 2 0 0 21 1參考文獻中華人民共和國衛生部醫政司編 . 全國臨床檢驗操作規程( 第二版) . 南京: 東南大學出版社， 1 9 9 7 .A1268A 2 例 2 : C反應蛋白測定 A2 . 1 第 1頁頁首內容 C反應蛋白測定( 散射比濁法) xx 醫院檢驗科 操作規程文件號: C Gxxxx 第 1版 共 xx頁 2 0 0 0 年 9 月 1 6日起實施 本規程每 2 年復審一次 復審日期: XXXX年XX月XX日 復審人: XXX( 簽名) 規程編寫者: XXX, xxx 審批者: XXX 批準日期 2 0 0 0年9月 1 0日 文件分發部門和/ 或個人: 醫務科: 保管者: XXX( 簽名) 院長辦公室; 保管者: XXX( 簽名) 院檔案室; 保管者: XXX( 簽名) 檢驗科; 主任 XXX( 簽名) 免疫檢驗室: XXX( 簽名) A2 . 2原理 用抗人C反應蛋白 抗體和 樣品中C 反應蛋白 作用， 形成抗原 一 抗體復 合物使光散射增加。 檢測散射 光變化速率峰值反映樣品中C反應蛋白量。 本檢驗科使用xx公司的xx型號特定蛋白測定儀及其公 司提供的配套試劑、 校準品等進行C反應蛋白測定。 A 2 . 3 標本要求 A 2 . 11 使用新鮮血清， 不使用血漿。 A 2 . 3 . 2 在采集血液后的2h內分離血清。并置于具塞試管中。 A 2 . 3 . 3 8h內不及時測定的血清可存放于 2 C : -S C 冰箱保存。3天后測定的血清置-1 5 C 一2 0 C，冰凍保存但冰凍血清只能做一次復融。反復凍融會使測定結果下降。 A 2 . 3 - 4 嚴重溶血或脂血的標本不能作測定。 A 2 . 4 試劑 A 2 . 4 . 1 每個試劑均購自XX公司。 1 ) C反應蛋白抗體( 公司試劑盒代號P / N X X) 每個抗體試劑瓶內含已處理過的山羊抗血清 5 . 0 mL, 疊氮鈉為。 . 1 %( W/ W) 2 ) X X系統專用稀釋液( 公司試劑盒代號P / N XX) o 3 ) C反應蛋白校準品( 公司試劑盒代號 P / N X X ) , 4 ) 緩沖液( 代號P / N XXX) e 5 ) 至少用 2 個水平的控制品。 A2 . 4 . 2 試劑準備WS / T 2 2 7 一2 0 0 2 從冰箱中取出試劑， 立即可用。在上機前， 須將緩沖液及稀釋液顛倒徹底混勻。A 2 . 4 . 3 試劑性能可接受性 按測定項目資料手冊中質量控制章節所規定內容進行質量控制。結果必須在實驗室規定的可接受范圍內。A 2 . 4 . 4 超過失效期的試劑不可使用。A 2 . 5 儀器和校準A 2 . 5 . 1 使用xx公司的xx型號特定蛋白分析儀。A 2 . 5 . 2 將校準品在室溫中平衡后， 按儀器要求上機校準A2 . 6 操作步驟A 2 . 6 . 1 校準步驟 1 ) 在儀器的主顯示菜單上按 F 5 鍵做系統設置。按 F l 鍵做項目設置， 在顯示信息中確定抗體盤上本項目位置。按仁 F 1 鍵修正盤設置， 回到主顯示菜單。 2 ) 按仁 F 2 鍵進人校準狀態， 選擇相應項 目。按 F 1 鍵要儀器閱讀抗體卡資料， 并插人C反應蛋白抗體卡。 按 F 2 口 鍵進人校準品盤設定， 確認校準品所在位置。按 F 2 鍵要儀器閱讀校準品卡， 并插人相應校準品卡。閱讀后， 按 F 1 鍵。 3 ) 將 C反應蛋白校準品2 0 0 K L加于樣品盤的指定位置， 另外將校準品 5 約 4 0 0 p L也加于相應位置， 按開始鍵， 啟動校準。完成校準后， 按 F 4 鍵確認A 2 . 6 - 2 樣品操作步驟 1 ) 在主顯示菜單上按匡1 鍵進人樣品側定程序 2 ) 在各種樣品杯確認后， 若只做C反應蛋白測定。放置測定樣品或控制品2 0 0川 置于樣品盤內。若同時做類風濕因子， 抗“ O ， 則需樣品4 0 0 IA L 。這些樣品足夠做雙份測定。 3 ) 若做樣品 預稀釋， 用緩沖液對樣品做1 ， 6 稀釋后， 將稀釋樣品2 5 0 k L 置于 樣品 盤內。 注: 請參見xx型儀器操作手冊， 了解使用原始管和微量管)A 2 . 了 質量控制 每批測定都使用xx公司控制品做質量控制。 請參見xx型系統項目手冊附錄本規程要求， 每月天間C V不超過 4 %.A 2 . 8 計算 系統會自動地計算出結果。A2 . 9 參考值 xx公司C R P測定以I F C C推薦的歐洲共同體參考局的 C R M 4 7 0 特定蛋白