北京協和醫學院八年制臨床醫學生藥理學實驗藥理學系郭磊腺苷酸環化酶活性測定相關背景實驗原理實驗步驟問題討論BackgroundReview

cAMP是多種激素、神經遞質等作用于細胞時的第二信使物質。由腺苷酸環化酶AC催化ATP分解而成。ATP

cAMP＋ppiACBackgroundReviewcAMP生成以后又在環磷酸腺苷酸二酯酶（PDE）的作用下分解失活。這樣AC和PDE共同維持體內的cAMP的動態平衡。cAMP的濃度與細胞效應密切相關，因而調節AC以及PDE的活性即可以影響細胞的功能，其中AC活性的調節乃多種受體激活產生細胞效應的中心環節之一。BackgroundReview中樞神經系統中存在多個多巴胺效應系統，其中尾狀核是多巴胺受體分布較為豐富的區域，其作用與調節錐體外系的功能有關。多巴胺與細胞表面的受體結合，通過影響AC活性而發揮作用，很多抗精神病的藥物是多巴胺受點的拮抗劑，這些藥物不僅能抑制多巴胺與受體的結合，而且也抑制AC的活性。腺苷酸環化酶活性測定相關背景實驗原理實驗步驟問題討論Principle本實驗采用非標記底物法測定AC活性。即用非標記的ATP作底物，其被AC催化所形成的cAMP可以不經過分離通過蛋白競爭結合法直接進行含量測定，方法簡便靈敏度高。非標記底物測定cAMP濃度，間接推測AC活性的大小，同時觀察多巴胺和氟哌啶酶對AC活性的影響。AlfredG.Gilman腺苷酸環化酶活性測定相關背景實驗原理實驗步驟問題討論Procedure配制標準cAMP濃度梯度：母液100ulT.E32pmol/100ul16pmol/100ul8pmol/100ul4pmol/100ul100ulT.E100ulT.E100ul100ul100ul100ul母液100ulT.EProcedure取小試管10支，依次編號，置試管架中。按下表加入各種試劑123456分組編號Tris蘋果酸緩沖液200μM多巴胺μl250μM氟哌啶醇μl10mMATPμlA1－2350————50B3－4350————50C5－630050——50D7－8300——5050E9－10250505050Procedure開動計時器，同時向第一管中加入大鼠尾狀核勻漿液，100μl，搖勻。每間隔10s，向下一管中加入大鼠尾狀核勻漿液，100μl，搖勻。1－2管：立即置沸水浴中，煮沸5min。取出，置冰浴中，10min。Procedure分類分組編號TEμl標準品cAMPμl待測樣品μl3H－cAMPμl結合蛋白μl搖勻，4攝氏度放置2小時活性炭μl10000rpm離心5min，取上清200μl，測定放射性。比較管CT1－2250——50——B3－4150——50—100C05－6100——5050100標準管S17－8—100—5050100……………………S719－20—100—5050100樣品管A23－24——1005050100B25－26——1005050100C27－28——1005050100D29－30——1005050100E31－32——10050501004000rpm離心5min，各管取上清100μl按下表加樣Procedure然后加活性炭混懸液，立即12000rpm離心5min。小心吸取上清200μl，轉入液閃瓶中，加5ml閃爍液，加3ml無水乙醇。（本實驗中為已經配好的混合液，吸取兩次，每次4ml即可）加蓋搖勻，過夜。測閃爍計數

現在我們應用更先進的液體閃爍計數儀，由計算機控制，更靈敏、更準確。腺苷酸環化酶活性測定相關背景實驗原理實驗步驟問題討論Discussion本實驗為微量實驗，所以加樣等操作精確度對結果影響很大各管加樣準確各組時間平行Discussion加入活性碳后應立即離心因活性炭對游離3H-CAMP的吸附存在動態平衡，吸附時間過長可能造成反應產物的解離，影響試驗結果。DiscussionBSA的作用？加入ATP的作用？加入無水乙醇的作用？加入沸水浴的作用？倍比稀釋的優點與缺點？分析可能影響試驗結果的因素，并討論如何控制這些因素優化試驗Discussion根據藥理學的理論知識預測試驗的結果；用合適的方法分析并解釋你自己得到的數據和結論。謝謝大家就講這么多9、春去春又回，新桃換舊符。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，日子像桃子一樣甜蜜。4月-254月-25Friday,April25,202510、人的志向通常和他們的能力成正比例。10:04:5010:04:5010:044/25/202510:04:50AM11、夫學須志也，才須學也，非學無以廣才，非志無以成學。4月-2510:04:5010:04Apr-2525-Apr-2512、越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。10:04:5010:04:5010:04Friday,April25,202513、志不立，天下無可成之事。4月-254月-2510:04:5010:04:50April25,202514、ThankyouverymuchfortakingmewithyouonthatsplendidoutingtoLondon.ItwasthefirsttimethatIhadseentheToweroranyoftheotherfamoussights.IfI'dgonealone,Icouldn'thaveseennearlyasmuch,becauseIwouldn'thaveknownmywayabout.。25四月202510:04:50上午10:04:504月-2515、會當凌絕頂，一覽眾山小。四月2510:04上午4月-2510:04April25,202516、如果一個人不知道他