ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.7—2011飼料中恩諾沙星、環丙沙星、諾氟沙星的測定Determinationofenrofloxacin/ciprofloxacin/norfloxacininfeed河北省質量技術監督局發布DB13/T1384.7—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規則起草。本標準由河北省質量技術監督局提出。本標準起草單位：河北省食品質量監督檢驗研究院、河北省醫科大學、北京出入境檢驗檢疫局技術中心、石家莊市疾病預防控制中心、河北省飼料產品質量監督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、李揮、呂品、叢斌、盧小宇、張宏、范斌、賈茜、馬春玲、米振杰、楊立學、李志平、沈磊、高振同、武英利。IDB13/T1384.7—2011飼料中恩諾沙星、環丙沙星、諾氟沙星的測定1范圍本標準規定了飼料中恩諾沙星，環丙沙星，諾氟沙星的液相色譜-串聯質譜測定方法。本標準適用于飼料中恩諾沙星，環丙沙星，諾氟沙星的測定。本標準的方法檢出限為10.0μg/kg。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規則和試驗方法（GB/T6682－2008，ISO3696:1987,MOD）。3方法提要試樣加入內標后，氫氧化鈉溶液提取，離子化的喹諾酮類藥物經過陰離子交換固相萃取柱富集凈化，用液相色譜-質譜/質譜法測定，梯度洗脫，內標法定量。4.7恩諾沙星、環丙沙星和諾氟沙星標準儲備溶液：1mg/mL。準確稱取適量的恩諾沙星、環丙沙星和諾氟沙星標準品，甲醇配成1.0mg/mL的標準儲備液。儲備液儲備在4℃冰箱中，可保存6個月。4.8恩諾沙星、環丙沙星和諾氟沙星標準工作溶液：用甲醇－水（2＋8，體積比）分別配成濃度范圍為1ng/mL～60ng/mL標準工作溶液，其中內標溶液濃度為50ng/mL，現配。4.9氘代諾氟沙星（NOR－D5）內標儲備溶液：100μg/mL。稱取適量的NOR－D5內標物（4.5），用甲醇（4.1）配成100μg/mL儲備液，儲備液儲存在4℃冰箱中。4.10氘代諾氟沙星（NOR－D5）內標儲備溶液：1μg/mL。取適量的內標儲備液（4.8），用甲醇（4.1）稀釋成100μg/mL儲備液，內標工作溶液在4℃下保存。4.11氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）：取4g氫氧化鈉，溶解于1L水中。4.12甲酸-甲醇溶液（5＋95，體積比）：取5mL甲酸（4.3）于80mL水中，混合均勻。1DB13/T1384.7—20115儀器和設備5.1液相色譜-串聯質譜儀：配電噴霧粒子源。5.2分析天平：感量0.001g，0.1mg，各一臺。5.3旋轉蒸發儀。5.4固相萃取裝置。5.5渦旋均混器。5.6真空泵：真空度不低于80kPa。5.7濾膜：有機系，0.45μm。5.8離心管：100mL，具塞。6試樣的制備6.1提取準確稱取5g樣品（精確至0.01g），置于100mL離心管中，加經灼燒的無水硫酸鈉，用干凈玻璃棒將樣品與無水硫酸鈉攪拌分散均勻，準確加入1μg/mL內標溶液50μL，加入20mL氫氧化鈉溶液，于渦旋均勻器上快速混勻。以5000r/min的速度離心5min，上清液移入125mL分液漏斗中，加20mL正己烷混合，渦漩振蕩，靜置分層，取下層水相待凈化。6.2凈化依次用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱，將樣品溶液轉移到小柱上，依次用水、甲醇淋洗，棄去上述濾液。用甲酸-甲醇溶液3mL洗脫。40℃水浴旋轉蒸發至干，用甲醇-水定容1.0mL,過0.45μm的濾膜到進樣瓶中，供液相色譜-質譜儀測定。7.1測定梯度洗脫程序：參見表1。2DB13/T1384.7—2011表1梯度洗脫程序時間（min）0A（％）10B（％）9090101090902.00104.00908.00909.001015.00107.1.2參考質譜條件離子源：電噴霧離子源。掃描方式：正離子掃描。檢測方式：多反應監測。電噴霧電壓、碰撞電壓等自動優化至最佳值。定性離子對、定量離子對見表2。表2定性離子對、定量離子對恩諾沙星360//316360/245360/316環丙沙星332/231332/288332/231諾氟沙星320/276320/302320/276氘代諾氟沙星325/281進行樣品測定時，如果檢出的質量色譜峰保留時間和標準樣品一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，各定性離子的相對豐度與濃度接近的同樣條件下得到的標準溶液質譜圖相比，最大允許相對偏差不超過表3中規定的范圍，則可判斷樣品中存在對應的被測物。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許相對偏差標準工作溶液在液相色譜-串聯質譜設定條件下分別進樣，以標準與內標物峰面積比值為縱坐標，工作溶液濃度（ng/mL）為橫坐標，繪制標準工作曲線（1ng/mL～60ng/mL），用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液響應值均在儀器測定的線性范圍內。在上述色譜條件下，其相應的標準物質和內標離子流色譜圖參見附錄A。3DB13/T1384.7—20118結果計算結果按式（1）計算：×mS…………..(1)AXX=AS×MC式中:CX一一樣品中喹諾酮的濃度，單位為微克每千克（μg/kg）。AX一一樣品中喹諾酮的封面積與相應內標峰面積比值。As——標準品中喹諾酮的峰面積與相應內標峰面積比值。