ICS65.150DB13B50河北省地方標準DB13/T1358—2011養殖用水中孔雀石綠快速測定方法激光拉曼光譜法Thequalitativedeterminationofmalachitegreeninaquiculturewaterbysurface-enhancedlaserramanspectrometry河北省質量技術監督局發布DB13/T1358—2011前言本標準由GB/T1.1—2009給出的規則起草。本標準由河北省質量技術監督局提出并歸口。本標準起草單位：河北省食品質量監督檢驗研究院、歐普圖斯光學納米科技有限公司、國家果類及農副加工產品質量監督檢驗中心本標準主要起草人：李揮、張敬軒、張會軍、張巖、劉春偉、賈茜、范斌、李強、龐坤IDB13/T1358—2011養殖用水中孔雀石綠快速測定方法激光拉曼光譜法1范圍本標準規定了利用激光拉曼光譜法快速檢測水產品養殖、銷售用水或其他水體中微痕量孔雀石綠的定性定量檢測方法。本標準適用于水產品養殖、銷售用水或其他水體中孔雀石綠的激光拉曼光譜法的現場快速篩查檢測。本方法在水中孔雀石綠的定量限為5.0μg/L。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和實驗方法（GB/T6682—2008，ISO3696:1987，MOD）。3原理試樣經高速離心后直接測定。樣品中的孔雀石綠分子與表面增強試劑混合后，分子吸附在表面增強納米顆粒上，其拉曼散射信號可增強106倍以上，使用便攜式激光拉曼檢測儀通過自動判別其特征峰即可定性檢測出孔雀石綠。通過對測定的拉曼譜圖進行基線調整和歸一化處理，應用外標法可進行定量分析。4.4無機鹽離子促進劑：2％溴化鉀水溶液。孔雀石綠標準溶液（1000μg/mL）：準確稱取0.1000g孔雀石綠標準品，用乙腈溶解后，定容到100mL，4℃避光保存。1DB13/T1358—20116.1樣品采集、保存取具代表性樣品，裝于棕色瓶中，于2℃～5℃冷藏保存，并在24小時內完成檢測。6.2樣品制備取1.0mL待測水樣，14000r/min離心5min，上清液即為待測液。6.3儀器參考條件a)激光功率：200mWb)積分時間：10secc)平均次數：2d)平滑參數：36.3.1定性測定依次加入0.25mL表面增強試劑（4.2）、0.10mL無機鹽凝聚劑（4.3）、0.25mL待測液和0.10mL無機鹽離子促進劑（4.4），混勻后開始檢測。根據譜圖435cm-1（±3cm-1）、1171cm-1（±3cm-1）和1615cm-1（±3cm-1）處特征拉曼光譜，對水樣中的孔雀石綠進行評估：如同時存在上述特征峰，則可判定樣品中含有孔雀石綠；否則，不能證明樣品中含有孔雀石綠，需要進一步實驗驗證。水中孔雀石綠表面增強拉曼光譜圖參見附錄A。6.5定量測定對測定的拉曼譜圖進行基線調整和歸一化處理，基本操作如下：(1)首先將測定的拉曼光譜數據進行基線調整；(2)以1171cm-1（±3cm-1）處的特征拉曼峰作為定量基準峰，對孔雀石綠特征拉曼峰進行歸一化6.4計算…..…….X—樣品中孔雀石綠的含量，單位為毫克每千克（mg/L）；c—從標準曲線得到的孔雀石綠含量，單位為毫克每升（mg/L）；V—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；m—樣品量取體積，單位為毫升（mL）。2DB13/T1358—20116.6驗證試驗對陽性樣品需經相關國家標準方法進行確證。3DB13/T1358—2011AA附錄A（資料性附錄）水中孔雀石綠表面增強拉曼光譜圖40000040050060070080090010001100120013001400