廣東省東莞市重點(diǎn)中學(xué)2022-2023學(xué)年高二下冊(cè)生物期中試卷姓名：__________班級(jí)：__________考號(hào)：__________題號(hào)一二總分評(píng)分一、選擇題：本題共16小題，共40分。第1~12小題，每小題2分；第13~16小題，每小題4分。在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合題目要求的。1．傳統(tǒng)美食制作過(guò)程體現(xiàn)了發(fā)酵技術(shù)。下列說(shuō)法正確的是（）A．黑曲霉主要通過(guò)產(chǎn)生蛋白酶參與腐乳發(fā)酵B．果酒、果醋制作所利用的菌種均能夠進(jìn)行有氧呼吸C．制作泡菜時(shí)，泡菜壇中加料不要加滿(mǎn)，每天及時(shí)排氣D．通過(guò)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)可以從微生物細(xì)胞中提取單細(xì)胞蛋白2．在做微生物實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了防止雜菌污染，需做好消毒和滅菌工作。下表有關(guān)消毒和滅菌方法的使用，錯(cuò)誤的是（）選項(xiàng)材料或器具方法A水源氯氣消毒B培養(yǎng)皿干熱滅菌C牛奶高壓蒸汽滅菌D涂布器灼燒滅菌A．A B．B C．C D．D3．已知固體培養(yǎng)基會(huì)因碳酸鈣的存在而呈乳白色，且乳酸菌能分解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為材料進(jìn)行了分離純化乳酸菌的實(shí)驗(yàn)，下列敘述不正確的是（）A．分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是鑒別乳酸菌B．分離純化所用的培養(yǎng)基需要進(jìn)行滅菌處理C．分離純化乳酸菌時(shí)，需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋D．分離純化乳酸菌時(shí)，應(yīng)挑選出不具有透明圈的菌落作為候選菌4．某研究人員設(shè)計(jì)了下列技術(shù)路線，以期獲得甘藍(lán)和蘿卜體細(xì)胞雜交植株。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．細(xì)胞融合過(guò)程涉及膜的流動(dòng)性，常用聚乙二醇融合法、電融合法等誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合B．原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志是細(xì)胞核相融合C．為誘導(dǎo)融合原生質(zhì)體產(chǎn)生不定芽，通常會(huì)在培養(yǎng)基中加入兩類(lèi)植物激素D．植物體細(xì)胞雜交可以實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種5．在克隆哺乳動(dòng)物過(guò)程中，通常作為核移植受體細(xì)胞的是去核的（）A．卵原細(xì)胞 B．初級(jí)卵母細(xì)胞C．次級(jí)卵母細(xì)胞 D．卵細(xì)胞6．下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．在植物體細(xì)胞雜交技術(shù)中，纖維素酶和果膠酶可去除細(xì)胞壁，而不損傷細(xì)胞的其他結(jié)構(gòu)B．細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，可提高單個(gè)細(xì)胞中次生代謝物的含量C．利用細(xì)胞膜的流動(dòng)性，可誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合D．通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得克隆動(dòng)物，體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性7．精子載體法是以精子作為載體攜帶外源基因進(jìn)入卵細(xì)胞的方法，利用該方法制備轉(zhuǎn)基因鼠的基本流程如圖。下列敘述正確的是（）A．導(dǎo)入外源基因的精子需放入ATP溶液中進(jìn)行獲能處理才具備受精能力B．導(dǎo)入外源基因的精子和卵細(xì)胞經(jīng)過(guò)②過(guò)程后即轉(zhuǎn)化完成C．②③過(guò)程所用培養(yǎng)液的成分相同且都加入動(dòng)物血清D．④過(guò)程需要對(duì)代孕母鼠用相關(guān)激素進(jìn)行同期發(fā)情處理8．人血清白蛋白在臨床上的需求量很大，通常從人血中提取。但血液制品存在生產(chǎn)成本高以及病毒感染風(fēng)險(xiǎn)大等問(wèn)題。應(yīng)用基因工程和克隆技術(shù)，將人的血清白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中，利用牛的乳汁生產(chǎn)血清白蛋白，既提高了產(chǎn)量，又有了安全保障。如圖是利用奶牛乳汁生產(chǎn)人血清白蛋白的圖解，相關(guān)敘述正確的是（）A．應(yīng)選擇良種雄性奶牛作為供體奶牛B．供體奶牛組織經(jīng)胃蛋白酶處理可以得到分散的細(xì)胞C．可使用促性腺激素處理母牛獲得更多卵母細(xì)胞D．胚胎移植前需要對(duì)受體母牛使用免疫抑制劑降低其免疫排斥反應(yīng)9．蛋白質(zhì)工程是在深入了解蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，它最終要達(dá)到的目的是（）A．分析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)B．研究蛋白質(zhì)的氨基酸組成C．獲取編碼蛋白質(zhì)的基因序列信息D．改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，滿(mǎn)足人類(lèi)的需求10．生物技術(shù)的安全性和倫理問(wèn)題是社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)。下列敘述屬于理性看待生物技術(shù)的是（）A．某些轉(zhuǎn)基因食品會(huì)引起過(guò)敏反應(yīng)，要禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用B．克隆技術(shù)與社會(huì)倫理有沖突，要禁止治療性克隆技術(shù)的應(yīng)用C．嚴(yán)格選擇轉(zhuǎn)基因植物的目的基因，避免產(chǎn)生對(duì)人類(lèi)有害的物質(zhì)D．利用基因編輯技術(shù)來(lái)制造新型的致病菌，可用來(lái)生產(chǎn)生物武器11．下列哪項(xiàng)不屬于生殖性克隆人面臨的倫理問(wèn)題（）A．孕育的健康個(gè)體可能極少B．會(huì)產(chǎn)生“無(wú)父母”的孩子C．可以幫助不孕者擁有自己的后代D．沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭、兩性關(guān)系的倫理道德觀念12．關(guān)于DNA粗提取及鑒定的操作實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是（）A．將豬的成熟紅細(xì)胞置于清水中，紅細(xì)胞漲破后DNA會(huì)釋放出來(lái)B．離心后取上清液加入等體積的冷酒精進(jìn)行DNA的粗提取C．提取DNA時(shí)加入酒精，目的是使不溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)析出D．將提取到的絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后，溶液即變?yōu)樗{(lán)色13．泡菜中亞硝酸鹽在特定條件下會(huì)轉(zhuǎn)變成致癌物，泡菜制作過(guò)程中亞硝酸鹽峰值一般出現(xiàn)在第5天。現(xiàn)用不同體積分?jǐn)?shù)的食醋對(duì)泡菜進(jìn)行處理，測(cè)定其亞硝酸鹽的含量變化，結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．本實(shí)驗(yàn)亞硝酸鹽峰值出現(xiàn)在第3天，推測(cè)原因可能為本實(shí)驗(yàn)的溫度更為適宜B．不同體積分?jǐn)?shù)的食醋會(huì)影響亞硝酸鹽的峰值，但對(duì)峰值出現(xiàn)的時(shí)間無(wú)影響C．食醋體積分?jǐn)?shù)越大，對(duì)泡菜中亞硝酸鹽產(chǎn)生的抑制效果越明顯D．健康飲食應(yīng)選擇食用在此條件下釀制10天左右的泡菜14．菌株甲為大腸桿菌的甲硫氨酸（Met）營(yíng)養(yǎng)缺陷型，菌株乙為蘇氨酸（Thr）營(yíng)養(yǎng)缺陷型，分別受a、b基因控制，在基本培養(yǎng)基（M）上不能生長(zhǎng)，但可在添加相應(yīng)氨基酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。將上述兩菌株的菌液混合一段時(shí)間后，從中篩選出4種菌株，4種菌株在不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)表。下列分析不合理的是（）菌株培養(yǎng)基MM+MetM+ThrM+Met+Thr菌株Ⅰ－＋－＋菌株Ⅱ－－－＋菌株Ⅲ－－＋＋菌株Ⅳ＋＋＋＋注：“＋”表示能生長(zhǎng)，“-”表示不能生長(zhǎng)A．菌株甲可能缺少合成甲硫氨酸的酶B．菌株Ⅰ和菌株Ⅲ分別為菌株甲和菌株乙C．菌株Ⅱ和菌株Ⅳ的基因型可能分別為ab、ABD．菌株Ⅳ一定來(lái)自菌株甲或菌株乙的基因突變15．我國(guó)科學(xué)家成功地用iPS細(xì)胞克隆出了活體小鼠，部分流程如下圖所示，其中Kdm4d為組蛋白去甲基化酶，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑。下列說(shuō)法正確的是（）A．組蛋白乙酰化和去甲基化有利于重構(gòu)胚后續(xù)的胚胎發(fā)育過(guò)程B．①過(guò)程的小分子化合物誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞突變?yōu)閕PS細(xì)胞C．③過(guò)程中使用有活性的病毒處理的目的是誘導(dǎo)細(xì)胞融合D．圖示流程運(yùn)用了重組DNA，體細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)16．B基因存在于水稻基因組中，僅在體細(xì)胞和精細(xì)胞中正常表達(dá)，在卵細(xì)胞中不能轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響，設(shè)計(jì)了如圖實(shí)驗(yàn)來(lái)獲取能夠在卵細(xì)胞中表達(dá)B基因的轉(zhuǎn)基因植株。下列關(guān)于該實(shí)驗(yàn)的敘述，不正確的是（）

注：Luc基因表達(dá)的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光。A．B基因在水稻卵細(xì)胞中不能轉(zhuǎn)錄，可能是B基因的啟動(dòng)子在卵細(xì)胞中無(wú)法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄B．可從水稻體細(xì)胞和精細(xì)胞中提取RNA后構(gòu)建的cDNA文庫(kù)中獲得B基因中編碼蛋白的序列C．過(guò)程②在培養(yǎng)基中加入卡那霉素以檢測(cè)T-DNA是否整合到水稻細(xì)胞染色體DNA上D．鑒定和篩選轉(zhuǎn)基因植株時(shí)，可以檢測(cè)加入熒光素的該植株卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光二、非選擇題(共60分)17．利用固氮微生物改善植物根際環(huán)境，提高作物產(chǎn)量，是鹽堿地改良的重要方法。科研人員從極端鹽堿地土壤中分離鑒定了自生固氮菌(能將N2轉(zhuǎn)變?yōu)镹H3)，為極端鹽堿地改良提供了候選菌株。部分實(shí)驗(yàn)流程如圖所示，固氮菌培養(yǎng)基配方如表所示。回答下列問(wèn)題：固氮菌培養(yǎng)基配方KH2PO4MgSO4·7H2ONaClCaCO3甘露醇（C6H14O6）CaSO4·2H2O瓊脂蒸餾水0.2g0.2g0.2g5g10g0.1g15g1000mL（1）該培養(yǎng)基中作為碳源的物質(zhì)是，利用該培養(yǎng)基能分離出自生固氮菌的原因是。（2）接種后的平板需要(填“倒置”或“正置”)培養(yǎng)，目的是，使用后的培養(yǎng)基丟棄前需要進(jìn)行煮沸處理，其目的是。（3）若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落的平均數(shù)量為156個(gè)，則每克土壤中含有的自生固氮菌為個(gè)。18．電影《我不是藥神》中的格列寧是一種治療癌癥的靶向藥物，此類(lèi)靶向藥物可稱(chēng)為“生物導(dǎo)彈”。利用單克隆抗體來(lái)診斷和治療癌癥可能會(huì)成為攻克癌癥的重要手段，如圖為單克隆抗體制備流程圖：（1）若用該圖中的單克隆抗體與藥物結(jié)合制成“生物導(dǎo)彈”治療腸癌，則圖中特定抗原通常是。靶向藥物比普通的化療藥物療效高、毒副作用小，原因是：。（2）圖中誘導(dǎo)細(xì)胞融合時(shí)需要采用誘導(dǎo)法、聚乙二醇融合法或電融合法等方法誘導(dǎo)，雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是。（3）用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出融合的雜交瘤細(xì)胞后進(jìn)行，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞。（4）在體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是(填“單層”或“多層”)。在體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)瓶放在了含5%CO2的培養(yǎng)箱中，CO2的主要作用是。19．生姜既是一種重要的調(diào)味蔬菜，又具有較高的藥用價(jià)值。科研人員對(duì)生姜的繁殖以及藥用價(jià)值開(kāi)展了一系列研究。（1）生姜通常采用無(wú)性繁殖的方式進(jìn)行生產(chǎn)，但感染的病毒很容易在植株體內(nèi)累積。生姜的莖尖分生區(qū)附近無(wú)病毒，可作為組織培養(yǎng)的，經(jīng)脫分化形成，進(jìn)一步培養(yǎng)可獲得脫毒苗進(jìn)行大量種植。（2）生姜塊莖可以提取生姜精油，為進(jìn)一步研究生姜精油的藥用價(jià)值，科研人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)一：分別取0.1mL的表皮葡萄球菌（A）、金黃色儲(chǔ)萄球菌（B）、枯草芽孢桿菌（C）懸液，與20mL熔化的培養(yǎng)基混勻。在培養(yǎng)基中制備4個(gè)直徑為8mm的小孔，向培養(yǎng)基的4個(gè)小孔中分別加入不同添加物，添加情況及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示。組別（小孔編號(hào)）小孔添加物對(duì)不同菌種的抑菌圈直徑（mm）ABC1150μL純生姜精油13.413.313.92150μL吐溫溶液和純生姜精油（體積比1∶1）15.815.615.63150μL緩沖液（空白對(duì)照）8884150μL吐溫溶液和緩沖液（體積比1∶1）888①制備培養(yǎng)基時(shí)，需要添加的必備營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有，除此之外，還需要滿(mǎn)足微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及的需求。②實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明。實(shí)驗(yàn)二：實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)生姜精油還有抗衰老的作用，向果蠅飼料中添加不同濃度的生姜精油后，測(cè)定衰老相關(guān)基因的表達(dá)量，結(jié)果如下圖。由圖可推測(cè)這三種基因與細(xì)胞衰老的關(guān)系是。20．研究發(fā)現(xiàn)人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科學(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶(從乳汁中提取)，過(guò)程如圖所示。其中編號(hào)①~⑨表示過(guò)程；質(zhì)粒S中的基因Leu通過(guò)控制相關(guān)酶的合成來(lái)影響亮氨酸的合成(亮氨酸是山羊細(xì)胞維持生命活動(dòng)必不可少的一種氨基酸)，基因GFP控制合成綠色熒光蛋白。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見(jiàn)下表。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)BamHI-G↓GATCC-BglII-A↓GATCT-HindⅢ-A↓AGCTT-XbaI-T↓CTAGA-（1）過(guò)程①通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增物質(zhì)A，需要的酶是；過(guò)程②需要的限制酶有；過(guò)程③需要的酶是限制酶和。（2）為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細(xì)胞，質(zhì)粒S中用作標(biāo)記基因的是和。為達(dá)到篩選目的，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分中應(yīng)不含有。將成纖維細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察，篩選出(填“顯示”或“不顯示”)綠色熒光的細(xì)胞用于過(guò)程⑤。（3）過(guò)程④常用法，過(guò)程⑨為。圖中早期胚胎的(填結(jié)構(gòu))將發(fā)育成轉(zhuǎn)基因羊的各種組織。21．加端PCR是使擴(kuò)增產(chǎn)物的末端加上一段DNA序列的PCR。加端PCR的引物被設(shè)計(jì)成除與模板配對(duì)的那一部分以外再加上若干堿基，以便能使擴(kuò)增產(chǎn)物的末端加上額外的一段DNA。hIGF-1cDNA編碼成熟蛋白的序列兩端無(wú)起始密碼子和終止密碼子的對(duì)應(yīng)位置，也沒(méi)有合適的限制酶切割位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)人員為了在枯草桿菌中表達(dá)hIGF-1，應(yīng)用加端PCR技術(shù)對(duì)hIGF-1cDNA進(jìn)行改造，以期獲得含有hIGF-1成熟蛋白79個(gè)氨基酸編碼序列，并在兩端分別帶有PstⅠ和SalⅠ酶切位點(diǎn)的DNA片段。加端PCR技術(shù)示意圖如下，回答下列問(wèn)題：（1）進(jìn)行加端PCR時(shí)應(yīng)選用的引物是。（2）在目的基因的兩端添加限制酶切割位點(diǎn)的目的是，將含有改造后的hIGF-1基因?qū)肟莶輻U菌的常用方法是用Ca2+處理枯草桿菌，其目的是；原核生物作為基因工程的受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)有(答出3點(diǎn))。（3）限制酶PstⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)為-CTGCA↓G-，請(qǐng)根據(jù)該序列寫(xiě)出經(jīng)PstⅠ切割后產(chǎn)生的黏性末端。（4）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，使用PstⅠ和SalⅠ酶兩種限制酶切割hIGF-1基因和質(zhì)粒，而不是只選擇一種限制酶切割hIGF-1基因和質(zhì)粒，這樣做的優(yōu)點(diǎn)是(答出2點(diǎn))。

答案解析部分1．【答案】B【解析】【解答】A、毛霉主要通過(guò)產(chǎn)生脂肪酶、蛋白酶參與腐乳發(fā)酵，黑曲霉主要通過(guò)產(chǎn)生蛋白酶參與醬油發(fā)酵，A錯(cuò)誤；

B、果酒、果醋制作所利用的菌種分別是酵母菌、醋酸菌，酵母菌是兼性厭氧菌，醋酸菌是好氧菌，兩者均能夠進(jìn)行有氧呼吸，B正確；

C、制作泡菜時(shí)，泡菜壇中加料不要加滿(mǎn)，裝至八成滿(mǎn)，不需要每天排氣，C錯(cuò)誤；

D、單細(xì)胞蛋白是微生物菌體，不能從微生物細(xì)胞中提取，D錯(cuò)誤。故答案為：B。

【分析】1、泡菜的制作使用的微生物是乳酸菌，代謝類(lèi)型是異養(yǎng)厭氧型，在無(wú)氧條件下乳酸菌能夠?qū)⑹卟酥械钠咸烟茄趸癁槿樗帷?/p>

2、果酒的制作離不開(kāi)酵母菌，酵母菌是兼性厭氧型生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，在無(wú)氧條件下，酵母菌進(jìn)行酒精發(fā)酵。溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件，20℃左右，酒精發(fā)酵時(shí)，一般將溫度控制在18~25℃，在葡萄酒自然發(fā)酵過(guò)程當(dāng)中，其主要作用的是附著在葡萄皮上的野生酵母菌。

3、醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時(shí)，才能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿帷４姿峋淖钸m生長(zhǎng)溫度為30~35℃。

4、參與腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陳代謝類(lèi)型是異樣需氧型。2．【答案】C【解析】【解答】A.水源的消毒可用氯氣消毒，A正確；

B、培養(yǎng)皿可在干熱滅菌箱中160~170℃滅菌2h，B正確；

C、對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，一般采用高壓蒸汽滅菌法，而對(duì)牛奶一般采用巴氏消毒法進(jìn)行消毒，C錯(cuò)誤；

D、涂布器需要用灼燒滅菌，需要冷卻后才能進(jìn)行涂布操作，D正確。

故答案為：C。

【分析】消毒和滅菌消毒滅菌概念使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌適用對(duì)象操作空間、某些液體、雙手等接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等3．【答案】D【解析】【解答】A、在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是鑒別乳酸菌，利用的原理是乳酸和碳酸鈣發(fā)生反應(yīng)使培養(yǎng)基出現(xiàn)透明圈的原理實(shí)現(xiàn)的，A正確；

B、微生物培養(yǎng)時(shí)，為避免雜菌污染，分離純化所用的培養(yǎng)基需要進(jìn)行滅菌處理，B正確；

C、分離純化乳酸菌時(shí)，需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)@樣做的目的是使聚集在一起的乳酸菌分散成單個(gè)細(xì)胞，有利于在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，C正確；

D、分離純化乳酸菌時(shí)，應(yīng)挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌，D錯(cuò)誤。故答案為：D。

【分析】從泡菜濾液中分離純化乳酸菌的實(shí)驗(yàn)過(guò)程：梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)→挑取具有透明圈的菌落。4．【答案】B【解析】【解答】A、細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜具有流動(dòng)性，誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法有聚乙二醇融合法、電融合法等，A正確；

B、原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志是新的細(xì)胞壁形成，B錯(cuò)誤；

C、植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素，它們的濃度、用量的比例等都會(huì)影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向，當(dāng)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值低時(shí)，有利于芽的形成，C正確；

D、植物體細(xì)胞雜交可以打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，D正確。故答案為：B。

【分析】進(jìn)行植物體細(xì)胞雜交時(shí)先用酶解法去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，進(jìn)行植物原生質(zhì)體的融合，形成雜種細(xì)胞，再通過(guò)植物的組織培養(yǎng)將雜種細(xì)胞培育成雜種植株。不同種的植物之間具有生殖隔離，該種方法打破了不同種植物間的生殖隔離，克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。5．【答案】C【解析】【解答】在克隆哺乳動(dòng)物過(guò)程中，通常選擇減數(shù)第二次分裂中期的去核卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，即次級(jí)卵母細(xì)胞。故答案為：C。【分析】體細(xì)胞核移植過(guò)程：6．【答案】B【解析】【解答】A、在植物體細(xì)胞雜交技術(shù)中，根據(jù)酶的專(zhuān)一性原理，用纖維素酶和果膠酶可去除細(xì)胞壁，這種去壁的方法較溫和，不損傷細(xì)胞的其他結(jié)構(gòu)，A正確；

B、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，不可以提高單個(gè)細(xì)胞中次生代謝物的含量，但可以通過(guò)培養(yǎng)更多的細(xì)胞從而提高次生代謝物的產(chǎn)量，B錯(cuò)誤；

C、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，C正確；

D、細(xì)胞全能性是指已分化的細(xì)胞，仍然具有產(chǎn)生完整的個(gè)體或分化為各種細(xì)胞的潛能和特性。通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得克隆動(dòng)物，體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性，D正確。故答案為：B。【分析】1、進(jìn)行植物體細(xì)胞雜交時(shí)先用酶解法去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，進(jìn)行植物原生質(zhì)體的融合，形成雜種細(xì)胞，再通過(guò)植物的組織培養(yǎng)將雜種細(xì)胞培育成雜種植株。不同種的植物之間具有生殖隔離，該種方法打破了不同種植物間的生殖隔離，克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。

2、體細(xì)胞核移植技術(shù)：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為克隆動(dòng)物。原理是動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。7．【答案】D【解析】【解答】A、導(dǎo)入外源基因的精子可放入人工配制的獲能液中，或利用雌性動(dòng)物的生殖道使其獲能，獲能液的成分因動(dòng)物種類(lèi)不同而有所差異，常見(jiàn)的有效成分有肝素、Ca2+載體等，A錯(cuò)誤；

B、轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，導(dǎo)入外源基因的精子和卵細(xì)胞經(jīng)過(guò)②過(guò)程后并不意味著轉(zhuǎn)化完成，B錯(cuò)誤；

C、②為體外受精過(guò)程，③為早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，前者在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐羞M(jìn)行，后者在發(fā)育培養(yǎng)基中進(jìn)行，這兩個(gè)過(guò)程所用培養(yǎng)液的成分不完全相同，C錯(cuò)誤；

D、胚胎移植時(shí)，需對(duì)供體和受體使用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，以保證胚胎移植入相同的生理環(huán)境，D正確。故答案為：D。【分析】胚胎移植：指將雌性動(dòng)物體內(nèi)的早期胚胎，或通過(guò)體外受精及其他方式獲得的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。分析題圖：圖示表示培育轉(zhuǎn)基因鼠的基本流程，其中①是篩選獲得導(dǎo)入外源基因的精子的過(guò)程，②是體外受精過(guò)程，③是早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，④是胚胎移植過(guò)程。8．【答案】C【解析】【解答】A、由于只有雌性奶牛才會(huì)產(chǎn)奶，因此應(yīng)選擇良種雌性奶牛作為供體奶牛，A錯(cuò)誤；

B、供體奶牛組織經(jīng)胰蛋白酶處理(不能用胃蛋白酶處理)可以得到分散的細(xì)胞，B錯(cuò)誤；

C、可使用促性腺激素處理母牛使其超數(shù)排卵，進(jìn)而獲得更多卵母細(xì)胞，C正確；

D、由于受體母牛對(duì)移植來(lái)的胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，因此不需要使用免疫抑制劑，D錯(cuò)誤。故答案為：C。

【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①對(duì)供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。②配種或人工授精。③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)（也叫沖卵）。對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑葚或囊胚階段。直接向受體移植或放入-196℃的液氨中保存。④對(duì)胚胎進(jìn)行移植。⑤移植后的檢查。對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。9．【答案】D【解析】【解答】A、分析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)工程的準(zhǔn)備工作，與題意不符，A錯(cuò)誤；B、研究蛋白質(zhì)的氨基酸組成是為了設(shè)計(jì)或改造相關(guān)基因，這不是蛋白質(zhì)工程的最終目的，B錯(cuò)誤；C、獲取編碼蛋白質(zhì)的基因序列信息實(shí)現(xiàn)了對(duì)基因的修飾或合成過(guò)程，但不是蛋白質(zhì)工程的最終目的，C錯(cuò)誤；D、改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，從而滿(mǎn)足人類(lèi)的需求，實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的定向改造，這是蛋白質(zhì)工程的最終目標(biāo)，D正確。故答案為：D。

【分析】蛋白質(zhì)工程的實(shí)質(zhì)是：改造基因。蛋白質(zhì)工程的過(guò)程：根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列；進(jìn)行基因修飾或基因合成；最終還是回到基因工程上來(lái)解決蛋白質(zhì)的合成問(wèn)題。因此，蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)合成的蛋白質(zhì)是自然界中不存在的新型蛋白質(zhì)分子。10．【答案】C【解析】【解答】A、轉(zhuǎn)基因等技術(shù)是把雙刃劍，要發(fā)展有利的一面，限制有危害的一面，不能因噎廢食，A錯(cuò)誤；

B、治療性克隆有助于疾病的治療，較少涉及倫理道德問(wèn)題，當(dāng)今社會(huì)的普遍觀點(diǎn)是禁止克隆人的實(shí)驗(yàn)，但不反對(duì)治療性克隆，B錯(cuò)誤；

C、嚴(yán)格選擇轉(zhuǎn)基因植物的目的基因，可避免產(chǎn)生對(duì)人類(lèi)有害的物質(zhì)，減少人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食物安全的擔(dān)憂，屬于理性看待生物技術(shù)的，C正確；

D、利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造新型致病菌用于醫(yī)學(xué)研究，禁止生產(chǎn)生物武器，D錯(cuò)誤。故答案為：C。

【分析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問(wèn)題：食物安全(滯后效應(yīng)、過(guò)敏源、營(yíng)養(yǎng)成分改變)、生物安全(對(duì)生物多樣性的影響)、環(huán)境安全(對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響)。轉(zhuǎn)基因食品、產(chǎn)品上都要標(biāo)注原料來(lái)自轉(zhuǎn)基因生物，如“轉(zhuǎn)基因xx”“轉(zhuǎn)基因xx加工品(制成品)”“加工原料為轉(zhuǎn)基因xx”“本產(chǎn)品為轉(zhuǎn)基因xx加工制成”。對(duì)于轉(zhuǎn)基因食物潛在隱患要進(jìn)行開(kāi)展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、預(yù)警跟蹤等措施多環(huán)節(jié)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌踩栽u(píng)價(jià)，保障了現(xiàn)代生物技術(shù)的安全性。11．【答案】C【解析】【解答】A、通過(guò)克隆技術(shù)產(chǎn)生人類(lèi)個(gè)體的成功率低，孕育的健康個(gè)體可能極少，A正確；

B、生殖性克隆是指通過(guò)克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體，克隆人只是某些人出于某種目的制造出的“產(chǎn)品”，沒(méi)有“父母”，這可能導(dǎo)致他們?cè)谛睦砩鲜艿絺Γ珺正確；

C、生殖性克隆給不孕者帶來(lái)希望，使這樣的家庭可以擁有自己的后代，不屬于生殖性克隆人面臨的倫理問(wèn)題，C錯(cuò)誤；

D、生殖性克隆屬于無(wú)性繁殖，沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭、兩性關(guān)系的倫理道德觀念，D正確。故答案為：C。【分析】1、治療性克隆：指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織(皮膚、神經(jīng)或肌肉等)用于治療性移植。

2、生殖性克隆：指將克隆技術(shù)用于生育目的，即用于產(chǎn)生人類(lèi)個(gè)體。12．【答案】B【解析】【解答】A、豬屬于哺乳動(dòng)物，哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒(méi)有細(xì)胞核，不能用于DNA的粗提取，A錯(cuò)誤；

B、DNA不溶于酒精，細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可溶于酒精，離心后取上清液加入等體積的冷酒精進(jìn)行DNA的粗提取，B正確；

C、DNA不溶于酒精，提取DNA時(shí)可加入酒精，目的是讓DNA析出，C錯(cuò)誤；

D、將提取到的絲狀物先溶解到2mol/L的氯化鈉溶液中，再加入二苯胺試劑，沸水浴加熱后，溶液變?yōu)樗{(lán)色，D錯(cuò)誤。故答案為：B。

【分析】DNA粗提取和鑒定過(guò)程：1、實(shí)驗(yàn)材料的選取：凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是使用DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功的可能性更大；

2、破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液：動(dòng)物細(xì)胞的破碎比較容易，以雞血細(xì)胞為例，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過(guò)濾后收集濾液即可。如果實(shí)驗(yàn)材料是植物細(xì)胞，需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。

3、去除濾液中的雜質(zhì)：方案一的原理是DNA在不同濃度NaCI溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同；

4、DNA的析出與鑒定：（1）將處理后的溶液過(guò)濾，加入與濾液體積相等、冷卻的酒精溶液，靜置2~3min，溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取的DNA.用玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分；（2）取兩支20mL的試管，各加入物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCI溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較兩支試管溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否變藍(lán)。13．【答案】C【解析】【解答】A、根據(jù)題干“泡菜制作過(guò)程中亞硝酸鹽峰值一般出現(xiàn)在第5天”，而本實(shí)驗(yàn)亞硝酸鹽峰值出現(xiàn)在第3天，推測(cè)原因可能為溫度更為適宜，A正確；

B、根據(jù)題圖分析可知，本實(shí)驗(yàn)亞硝酸鹽峰值均出現(xiàn)在第3天，說(shuō)明不同體積分?jǐn)?shù)的食醋會(huì)影響亞硝酸鹽的峰值，但對(duì)峰值出現(xiàn)的時(shí)間無(wú)影響，B正確；

C、根據(jù)題圖分析可知，濃度為0.60%的食醋對(duì)泡萊中亞硝酸鹽產(chǎn)生的抑制效果相對(duì)明顯，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能說(shuō)明食醋體積分?jǐn)?shù)越大，對(duì)泡菜中亞硝酸鹽產(chǎn)生的抑制效果越明顯，C錯(cuò)誤；

D、根據(jù)題圖分析可知，腌制10天左右的酸菜亞硝酸鹽的含量基本為0，所以健康飲食應(yīng)選擇食用在此條件下腌制10天左右的酸菜，D正確。故答案為：C。【分析】根據(jù)題圖分析可知：亞硝酸鹽峰值出現(xiàn)在第3天；濃度為0.60%的食醋對(duì)泡菜中亞硝酸鹽產(chǎn)生的抑制效果相對(duì)明顯；釀制10天左右的酸菜亞硝酸鹽的含量基本為0。14．【答案】D【解析】【解答】A、菌株甲為大腸桿菌的甲硫氨酸(Met)營(yíng)養(yǎng)缺陷型，菌株乙為蘇氨酸(Thr)營(yíng)養(yǎng)缺陷型，一般情況下，各營(yíng)養(yǎng)缺陷型缺少合成相應(yīng)氨基酸的酶，A正確；

B、從表格中看出，菌株I為甲硫氨酸(Met)營(yíng)養(yǎng)缺陷型，菌株Ⅲ為蘇氨酸(Thr)營(yíng)養(yǎng)缺陷型，B正確；

C、菌株甲和菌株乙菌液混合后，通過(guò)結(jié)合發(fā)生基因重組，形成了新的菌株Ⅱ(基因型為ab)和菌株IV(基因型為AB)，當(dāng)然也可能發(fā)生了基因突變，但基因突變的概率很小，C正確；

D、菌株IV可能來(lái)自菌株甲或菌株乙的基因突變，但也可能是菌株甲和菌株乙菌液混合后，通過(guò)結(jié)合發(fā)生基因重組，D錯(cuò)誤。故答案為：D。

【分析】分析表格可知：菌株I在基本培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，只有在加入Met或加入Met和Thr的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，菌株I為甲硫氨酸(Met)營(yíng)養(yǎng)缺陷型；菌株Ⅱ在基本培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，只有在同時(shí)加入Met和Thr的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，菌株Ⅱ?yàn)榧琢虬彼?Met)和蘇氨酸(Thr)營(yíng)養(yǎng)缺陷型；菌株III在基本培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)，只有在加入Thr或加入Met和Thr的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，菌株Ⅲ為蘇氨酸(Thr)營(yíng)養(yǎng)缺陷型；菌株IV在基本培養(yǎng)上能生長(zhǎng)，說(shuō)明菌株IV體內(nèi)可以合成甲硫氨酸和蘇氨酸。15．【答案】A【解析】【解答】A、結(jié)合題圖，重構(gòu)胚中在加入Kdm4d的mRNA和TSA后，發(fā)育成克隆鼠，而Kdm4d的mRNA表達(dá)產(chǎn)物為組蛋白去甲基化酶，可以使組蛋白去甲基化，TSA為組蛋白脫乙酰酶抑制劑，抑制組蛋白脫乙酰酶的作用，保持組蛋白乙酰化，即組蛋白乙酰化和去甲基化有利于重構(gòu)胚后續(xù)的胚胎發(fā)育過(guò)程，A正確；B、①過(guò)程的小分子化合物誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞脫分化為iPS細(xì)胞，并未發(fā)生突變，B錯(cuò)誤；C、③為動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程，誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生融合所用的是滅活的病毒，C錯(cuò)誤；D、圖示流程運(yùn)用了體細(xì)胞核移植、胚胎移植等技術(shù)，并未運(yùn)用重組DNA技術(shù)（基因工程中核心技術(shù)），D錯(cuò)誤。故答案為：A。

【分析】分析題圖：①過(guò)程的小分子化合物誘導(dǎo)小鼠成纖維細(xì)胞脫分化為iPS細(xì)胞，②過(guò)程為去除卵母細(xì)胞的核，③為動(dòng)物細(xì)胞融合的過(guò)程，④表示胚胎移植的過(guò)程。16．【答案】C【解析】【解答】A、啟動(dòng)子是與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列，所以B基因在水稻卵細(xì)胞中不能轉(zhuǎn)錄，可能是B基因的啟動(dòng)子在卵細(xì)胞中無(wú)法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，A正確；

B、目的基因獲取途徑之一就是從cDNA文庫(kù)中獲得，B正確；

C、T-DNA上含有潮霉素抗性基因，所以過(guò)程②在培養(yǎng)基中加入潮霉素以檢測(cè)T-DNA是否整合到水稻細(xì)胞染色體DNA上，C錯(cuò)誤；

D、由于基因表達(dá)載體上有Luc基因，其表達(dá)的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光，所以在鑒定和篩選轉(zhuǎn)基因植株時(shí)，可以檢測(cè)加入熒光素的該植株卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光，D正確。故答案為：C。【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟︰（1）目的基因的獲取︰方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建︰是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，可以遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。啟動(dòng)子的本質(zhì)是DNA片段，其為RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞∶根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定∶分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因：DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)：抗原—抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定︰抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。17．【答案】（1）甘露醇；該培養(yǎng)基中無(wú)氮源，自生固氮菌能利用空氣中的氮?dú)鈦?lái)生長(zhǎng)繁殖，沒(méi)有固氮能力的微生物的生長(zhǎng)受到抑制（2）倒置；防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基；防止培養(yǎng)基中的微生物污染環(huán)境（3）1.56×107【解析】【解答】(1)碳源是指能為微生物提供碳元素的物質(zhì)，甘露醇是該培養(yǎng)基中的碳源；該培養(yǎng)基中無(wú)氮源，自生固氮菌能利用空氣中的氮?dú)鈦?lái)生長(zhǎng)繁殖，沒(méi)有固氮能力的微生物的生長(zhǎng)受到抑制，因此利用該培養(yǎng)基能分離出自生固氮菌。

(2)為了防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，接種后的平板需要倒置培養(yǎng)；為了防止培養(yǎng)基中的微生物污染環(huán)境，使用后的培養(yǎng)基丟棄前需要進(jìn)行煮沸處理，以殺滅其中的微生物，避免對(duì)環(huán)境和操作者造成感染。

(3)若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落的平均數(shù)量為156個(gè)，結(jié)合圖示可知，獲得最后的數(shù)據(jù)是在稀釋104倍之后獲得的，因此，每克土壤中含有的自生固氮菌為156÷0.1x104=1.56x107個(gè)。

【分析】1、培養(yǎng)基為微生物提供生長(zhǎng)、繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)歸納為碳源、氮源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計(jì)數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴(kuò)大化生產(chǎn)，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等；根據(jù)用途分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。

2、微生物常見(jiàn)的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

3、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法∶(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理∶利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法∶用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)∶不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法）①原理∶當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②操作∶a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性；b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(c/V)×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。18．【答案】（1）腸癌細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)；既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量（2）滅活病毒；既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)（4）多層；維持培養(yǎng)液的pH【解析】【解答】(1)用“生物導(dǎo)彈”治療腸癌時(shí)，單克隆抗體可以識(shí)別腸癌細(xì)胞膜表面特定的抗原(癌細(xì)胞表面的蛋白質(zhì))，還可以和抗癌藥物等結(jié)合，使其定向殺傷癌細(xì)胞，將癌細(xì)胞消滅掉而不影響正常細(xì)胞，同時(shí)減少了用藥劑量，所以療效高、毒副作用小。

(2)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合常用的方法有電融合法、聚乙二醇(PEG)融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法等。用選擇性培養(yǎng)基篩選得到的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體。

(3)通過(guò)特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞后，由于雜交瘤細(xì)胞的種類(lèi)較多，因此還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。

(4)在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞貼壁；當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞通常會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為接觸抑制。由于接觸抑制，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，瓶壁上只能形成單層細(xì)胞，而雜交瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖的特點(diǎn)，故在體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是多層。CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

【分析】1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。（3）溫度和pH。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH）。19．【答案】（1）外植體；愈傷組織（2）碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽；O2；純生姜精油具有抑菌的作用，且吐溫溶液可以增加純生姜精油的抑菌作用；SODI基因表達(dá)的產(chǎn)物能延緩細(xì)胞衰老，TOR基因和MTH基因表達(dá)產(chǎn)物能促進(jìn)細(xì)胞衰老【解析】【解答】(1)植物組織培養(yǎng)技術(shù)是指將離體的植物器官、組織或細(xì)胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其形成完整植株的技術(shù)。生姜的莖尖分生區(qū)附近無(wú)病毒，可作為組織培養(yǎng)的外植體，經(jīng)脫分化形成愈傷組織，進(jìn)一步培養(yǎng)可獲得脫毒苗進(jìn)行大量種植。

(2)①不同的微生物對(duì)生長(zhǎng)繁殖的需求是不同的，制備培養(yǎng)基時(shí)，除了添加必備的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽）外，還需要滿(mǎn)足微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。

②由表格可知，小孔添加150μL純生姜精油對(duì)不同菌種的抑菌圈直徑，比空白對(duì)照組以及添加150uL吐溫溶液和緩沖液(體積比1：1)都要大，說(shuō)明純生姜精油對(duì)不同菌種均有抑制作用，另外，小孔添加150μL吐溫溶液和純生姜精油(體積比1：1)對(duì)不同菌種的抑菌圈直徑比小孔添加150uL純生姜精油的抑菌圈直徑大，說(shuō)明吐溫溶液可以增加純生姜精油的抑菌作用，綜上所述，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明純生姜精油具有抑菌的作用，且吐溫溶液可以增加純生姜精油的抑菌作用。由題意可知，生姜精油具有抗衰老的作用，根據(jù)柱形圖結(jié)果可知，與對(duì)照組相比，SODI基因的表達(dá)量隨生姜精油的濃度增大而增大，而TOR和MTH基因表達(dá)量減小，說(shuō)明SODI基因表達(dá)的產(chǎn)物能延緩細(xì)胞衰老，TOR基因和MTH基因表達(dá)產(chǎn)物能促進(jìn)細(xì)胞衰老。

【分析】1、植物組織培養(yǎng)的流程為：外植體經(jīng)過(guò)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成胚狀體，長(zhǎng)出芽和根，進(jìn)而發(fā)育成完整的植株。

2、培養(yǎng)基為微生物提供生長(zhǎng)、繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)歸納為碳源、氮源、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽和水。培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基中加入凝固劑可以制成固體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基一般用于微生物的鑒別、分離和計(jì)數(shù)，液態(tài)培養(yǎng)基常用于擴(kuò)大化生產(chǎn)，觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)。根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基等；根據(jù)用途分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。20．【答案】（1）耐高溫的DNA聚合酶；BamHⅠ、HindⅢ；DNA連接酶（2）基因Leu；基因GFP；亮氨酸；不顯示（3）顯微注射；胚胎移植；內(nèi)細(xì)胞團(tuán)【解析】【解答】(1)過(guò)程①通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增物質(zhì)A，該過(guò)程中由于需要在高溫條件下讓模板DNA發(fā)生解旋，因此需要的酶是耐高溫的DNA聚合酶：根據(jù)黏性末端可以看出，過(guò)程②需要的限制酶有BamHI、HindII，過(guò)程③為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，需要的酶是限制酶和DNA連接酶。

(2)為成功篩選出含重組質(zhì)粒T的成纖維細(xì)胞，質(zhì)粒S中用作標(biāo)記基因的是基因Leu和基因GFP，但在重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程中GFP基因被破壞，因此，只能用Leu作為標(biāo)記基因，即含有該基因的細(xì)胞可以在不含亮氨酸的培養(yǎng)基上生存，為達(dá)到篩選目的，培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分

中應(yīng)不含有亮氨酸。原因是：質(zhì)粒S中的基因Leu通過(guò)控制相關(guān)酶的合成來(lái)影響亮氨酸的合成。將成纖維細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察，篩選出不顯示綠色熒光的細(xì)胞用于過(guò)程⑤。

(3)過(guò)程④表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，常用顯微注射法實(shí)現(xiàn)，過(guò)程⑨為胚胎移植，其實(shí)質(zhì)是早期胚胎在空間位置上的轉(zhuǎn)移。圖中的早期胚胎為囊胚，其中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將發(fā)育成轉(zhuǎn)基因羊的各種組織。

【分析】1、PCR技術(shù)

（1）概念：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

（2）原理：DNA復(fù)制。

（3）前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對(duì)引物。

（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚臺(tái)酶(Taq酶)。

（5）過(guò)程：①高溫變性：DNA解旋過(guò)程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴(kuò)増中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)。

2、基因工程技術(shù)的基本步驟︰（1）目的基因的獲取︰方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建︰是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，可以遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。啟動(dòng)子的本質(zhì)是DNA片段，其為RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞∶根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射