新生物制品審批方法

《新生物制品審批方法》于1999年3月26日經國家藥品監督管理局局務會審議通過，現予發布。本規定自1999

年5月1日起施行。

一九九九

年四月二十二日

新生物制品審批方法

第一章總那么

第一條根據《中華人民共和國藥品管理法》、《中華人民共和國藥品管理法實施方法》

的規定，為加強新生物制品研制和審批的管理，特制定本方法。

第二條生物制品是應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋臼質工程、發醉工程等生

物技術獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料刎備，用于人類疾病

預防、治療和診斷的藥品。

第三條新生物制品系指我國未批準上市的生物制品；已批準上市的生物制品，當改換

制備疫苗和生物技術產品的菌毒種、細胞株及其他重大生產工藝改革對制品的平安性、有效

性可能有顯著影響時按新生物制品審批。

第四條新生物制品審批實行國家一級審批制度。

第五條凡在中華人民共和國境內進行新生物制品研究、生產、經營、使用、檢定、審

批、監督管理的單位和個人，都必須遵守本方法。

第二章新三物制品命名及分類

第六條新牛?物制品的命名應遵照《中國生物制品規程》和藥品命名原那么的有美規定命

名。

第七條新生物制品分為五類：

第一類：國內外尚未批準上市的生物制品。

第二類：國外已批準上市，尚未列入藥典或規程，我國也未進口的生物制品。

第三類：1.療效以生物制品為主的新復方制劑。

2.工藝重大改革后的生物制品。

第四類：1.國外藥典或規程已收載的牛?物制品。

2.已在我國批準進口注冊的生物制品。

3.改變劑里或給藥途徑的生物制品。

第五類：增加適應癥的生物制品。

第三章新生物制品研制的要求

第八條新生物制品研制內容，包括生產用菌毒種、細胞株、生物組織、生產工藝和產

品質量標準、檢定方法、保存條件、穩定性以及與制品平安性、有效性有關的免疫學、藥理

學、毒理學、藥代動力學等臨床前的研究工作和臨床研究。并根據研窕結果提出制造檢定規

程和產品使用說明書（草案）。

第九條新生物制品研制和生產要分別符合我國《藥品非臨床研究質量管理標準》

1GLP）、《藥品生產質量管理標準》（GMP）的有關規定。

第十條新生物制品研制過程一般分為以下幾個階段，各階段的要求如下。

1.實驗研究

包括應用根底研究，生產用菌毒種或細胞株的構建、選育、培養、遺傳穩定性，生物組

織選擇，有效成分的提取、純化及其理化特性、生物特性的分析等研究，取得制造和質量檢

定的根本條件和方法。

2.小量試制

根據實驗研究結果，確定配方、建立制備工藝和檢定方法，試制小批量樣品，進行臨床

前平安性和有效性的實驗，并制定制造與檢定根本要求。

3.中間試制

（D生產工藝根本定型，產品質量和產率相對穩定，并能放大生產。

（2）有產品質量標準、檢定方法、保存穩定性資料，并有測定效價用的參考品或對照品。

（3）提供自檢和中國藥品生物例品檢定所復檢合格，并能滿足臨床研究用量的連續三批

產品。

（4）制定較完善的制造檢定試行規程和產品使用說明書（草案）。

4.試生產

在試生產階段，完善生產工藝和質量標準及其檢定方法：同時按有關規定完成第IV期臨

床試驗、制品長期穩定性研究和國家藥品監督管理局要求進行的其他工作。

5.正式生產

按要求完成試生產期工作后，經國家藥品監督管理局批準轉入正式生產。

第四章新生物制品臨床研究申報與審批

第十一條申報新生物制品臨床研究，研制單位要填寫申請表（附件一），提交規定的

有關申報材料（附件二、三、四、五，其中保密資料按保密有關規定辦理），送所在省、自

治區、直轄市藥品監督管理部門。省級藥品監督管理部門對申報材料進行形式審查，并對研

制條件和原始資料進行現場核查，提出意見后，報送國家藥品監督管理局審批.

第十二條除體外診斷試劑外，生物制品臨床研究須經國家藥品監督管理局審評、批準

前方可進行。臨床研窕用藥的生產工藝和質量標準應與臨床前研究用藥一致。

1.預防用新生物制品臨床研究工作，由國家藥品監督管理局指定的單位按照附件六、七

的技術要求和程序組織實施。

2.治療用新生物制品臨床研究參照新藥臨床研究的要求，須在國家藥品監督管理局確定

的藥品臨床研究基地按《藥品臨床研究質量管理標準》（GCP）的要求進行。

3.體外診斷用品的臨床研究，申報單位于申報前，須在三個以上省級醫療衛生單位用其

他方法診斷明確的陽性、陰性標本（總數一般不少于1000例）考核其申報品種的特異性、

敏感性。申報后，根據需要由國家藥品監督管理局指定單位做進一步的臨床考核。

4.人用鼠源性單克隆抗體、體細胞治療和基因治療的臨床研究申報和審批具體要求見附

件四、八、九。

5.【、H、H1期臨床試驗用藥由研制單位無償提供并承當研究費用。IV期臨床試驗用藥

的提供和研究費用，由生產單位與承當單位雙方商定；有明確規定者按有關規定執行。

第十三條中外合作研制的新生物制品，合作雙方在國內外實驗研究的資料和樣品均可

店于臨床研究申報。

第五章新芻物制品生產的申報和審批

第卜四條新生物制品HI期臨床試驗結束后，研制單位填寫申請表（附件卜三），提交

規定的有關申報資料（附件二），報送國家藥品監督管理局審批，批準后發給新藥證書。

多家聯合研制的新生物制品，國家藥品監督管理局批準后，給每個單位頒發研制單位聯

合署名的新藥證書。

第十五條多家聯合研制的新生物制品，第一類新生物制品允訐其中兩個單位生產：其

他類別的新生物制品允許?個單位生*。

第十六條申報生產新生物制品的企業，在經過國家驗收符合GMP要求的車間內連續生

產三批，經中國藥品生物制品檢定所抽樣檢定合格，填報申請表（附件一二），提交新藥證

書、生產車間驗收文件?、中國藥品生物制品檢定所的檢定報告復印件，報國家藥品監督管理

局審批，批準后，發給批準文號。第一類為“國藥試字SXXXXXXXX”，其中S代表

生物制品，其他類別的新生物制品除某些制品外均為“國藥準字sxxxxxxxx-o

第十七條更換生產用菌毒種或細胞的疫苗、牛.物技術產品或第基酸數目、順序等結構

發生改變的生物技術產品以及需試產期考核的改變給藥途徑的產品核發試生產文號。

第十八條國藥試字新生物制品試生產期二年。試生產期滿3人月前，生產單位填寫申

請表（附件十四），提交規定的有關申報資料（附件二），報國家藥品監督管理局審批：審批

期間，其試生產批準文號仍然有效。如有特殊情況，確需延長試生產期者，經批準可延長試

生產期.批準轉正式生產的產品，發給新的批準文號為“國藥準字SXXXXXXXX”，

逾期未提出轉正式生產巾清或試產期滿未批準轉正式生產的產品原批準又號取消。

第十九條已批準上市的生物制品，經過工藝重大改革，研究資料證明改革后的產品質

量、平安性和有效性明顯提高者，按新生物制品審批后，發給新的批準又號，原工藝產品的

批準文號予以取消。其他單位采用新工藝時按新藥技術轉讓規定辦理。

第:十條凡新生物制品申報原料藥的，按本方法規定進行審批，核發新藥證書和批準

文號。

第二十一條新體外診斷試制，研制單位完成產品臨床考核，其連續三批產品（批量見

附件十二）經中國藥品生物制品檢定所檢定合格后，填寫巾請表（附件一三），提交規定的

有關資料（附件二、四、十、十一）.報國家藥品監督管理局審批，批準后，發新藥證書,

具備相應生產條件者發批準文號。生*單位用外購的主要原材料制備的新體外診斷試劑，經

批準，發批準文號,不發新藥證書。

第六章新生物物品制造檢定規程的轉正

第：十二條新生物制品生戶批準后，其制造檢定規程為試行規程。試行期第?類為三

年（含試生產期），其他類別為二年.

第二十三條試行期滿三個月前，生產企業填寫申請表（附件一五），提交規定的有關

申報資料（附件十六），報國家藥品監督管理局。

第二十四條國家藥品監督管理局責成中國生物制品標準化委員會對試行規程按規定的

要求和程序（附件十六）進行審式，提出制造檢定正式規程，報國家藥品監督管理局審批、

發布。

第二十五條規程試行期滿，未提出轉正申請或未按要求補充材料的生產企業，國家藥

品監督管理局取消其產品的批準文號,

第七章附那么

第二十六條本方法中體外診斷試劑指免疫學、微生物學、分子生物學等體外診斷試劑。

第二十七條抗生素、動物臟器制品按《新藥審批方法》管理.

第二十八條生物制品工藝重大改革的審查認定由中國藥品生物制品檢定所負責。

第二十九條治療用生物制品臨床研究的要求、新生物制品的技術轉讓、新生物制品研

制過程中違規處分等與《新藥審批方旅》規定類同的事項均參照《新藥日批方法》執行。

第三十條本方法由國家藥品監督管理局負責解釋。

第三十一條本方法自1999年5月1日起施行。

附件：

一、新生物制品臨床研究申請表

二、新生物制品申報資料工程

（一）治療用新生物制品中報資料工程

（二）預防用新生物制品中報資料工程

（三）體外診斷用品申報資料工程

三、人用重組DNA制品質量控制要點

四、人用鼠源性單克隆抗體質量控制要點

五、傳代細胞系生產生物制品規程

六、預防用新生物制品臨床研究的技術要求

七、預防用新生物制品臨床研究程序

八、人的體細胞治療申報臨床試驗指導原那么

九、人基因治療申報臨床試驗指導原那么

十、放射免疫分析藥盒申報資料工程及要求

十一、用于檢測病原體的體外核酸擴增（PCR）診斷試劑盒的申報、審評兩行方法

十：、體外生物診斷試劑報批批量最低要求

十三、新生物制品證書生產申請表

十四、新生物制品轉正式生產申請表

十五、新生物制品試行規程轉正申請表

十六、新生物制品試行規程轉正的具體要求

附件一：

新生物制品臨床研究申請表

名稱：

類別：

研究單位：國家藥品監督管理局制

研制單位填報工程

I中文

名I

品名I英文

名

I漢語拼音

劑型I規格

組成成

份

及含

量

制

備

r

藝

適應癥與用法

活

性

測

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方

法

和

結

論

效力實

驗

或藥理

學

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爬

和結

論

111

11

1

11

1

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1

1實驗室平安

11

1

1性及毒

性

11

1

1研究工程及

11

1

1結

論1

1

11

1

111

1

11

1

11

1

11t1

1申請單

位

11111

I郵政編瑪

地址

I電話

I研制負責人I（簽字）I日期I年月日I

附件二：

新生物制品申報資料工程

（-）治療用新生物制品申報資料工程

1.新生物制品臨床研究申請表，附中檢所復檢報告

2.研究工作總結

3.新制品名稱、選題目的和依據、國內外有關方面研究現狀（包括專利）、生產和使用

情況綜述及主要參考文獻

4.生產用菌毒種來源、歷史、全面檢定及鑒別資料和傳代限度試驗資料；或工程菌（細

服）構建的詳細資料，包括目的基因的獲得、表達載體詳細結構、宿主茵（細胞）基因型、

表型特征等；或雜交瘤株建株詳細資料

5.生產用原材料質控要求的々.關資料

6.生產工藝研究及確定的有關資料

7.中試產品質量研究總結資料,包括生物活性測定方法試驗研究資料

8.工作參考品或對照品的制備及檢定資料

9.培養及生產過程中使用對人有潛在毒性物質的檢查資料

10.生產用動物合格證明，研制和中試車間面積、凈化、工藝走向圖紙，制備和檢定用主

要儀器、設備等情況，省級藥品監督管理部門核實蓋章

1L與國內外同類產品質量比擬資料

12.內包裝材料及選擇的依據

13.供臨床研究用連續三批中試產品的制造和檢定原始記錄

14.中試產品制造和檢定規程草案及起草說明

15.至少三批中試產品初步穩定性試驗資料

16.制劑的處方、工藝及處方依據，輔料的來源及質量標準，有關文獻資料等

17.目的基因核甘酸序列、表達質粒酶切圖譜以及特異性鑒別資料

18.目的基因表達產物結構確證資料，包括氨基酸組成分析、N末端15個氨基酸及C末

端1?2個氨基酸序列分析、肽圖分析、圓二色光譜分析等，或單抗特異性、親和力、活性

等試驗資料

19.原始種子庫和生產種子庫建庫資料以及貯存復蘇過程中宿主載體表達系統遺傳、表

達穩定性試驗資料，或雜交瘤細胞株分泌抗體穩定性試驗資料

20.生產用種子庫外源因子檢查（細菌、真菌、支原體和病毒）、細胞基質外源因子檢查、

核型分析及致瘤性試驗資料

21.與治療作用有關的動物主要藥效學研究資料及文獻資料

22.動物一般藥理學研究資料及文獻資料

23.動物藥代動力學研究資料及文獻資料

24.動物急性（單劑量）毒性研究資料及文獻資料

25.動物長期（重復給藥）毒性研究資料及文獻資料

26.動物局部用藥毒性研究資料及文獻資料

27.復方制劑中多種組分對動物藥效或毒性影響的研究資料及文獻資料

28.遺傳毒性研究資料及文獻資料

29.生殖帚性研究資料及文獻資料

30.致癌研究資料及文獻資料

31.藥物依賴性研究資料及文獻資料

32.免疫毒性和/或免疫原性研究資料及文獻資料

33.供臨床醫師參閱的臨床前藥理毒理研究結論綜述及擬進行的臨床研究方案及有關文

就資料

34.新生物制品證書、生產申請表，附臨床研究批件

35.臨床藥代動力學的研究資料及文獻資料

36.臨床研究負責單位總結的臨床研究資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

37.制定保存條件及效期的穩定性試驗資料

38.連續三批試產品原始制檢記錄及中檢所復核報告

39.制造和檢定試行規程及起草說明

40.內包裝材料及選擇的依據

41.使用說明書及包裝、標簽樣稿

42.臨床研究批件要求完成工作的完成情況及試驗資料

43.生產用原材料、試劑、化學藥品的規格及標準

44.生產車間的GMP認證證書

45.臨床前研究工作簡要總結

46.新生物制品轉正式生產申請表，附試生產批件、制造和檢定試行規程、使用說明書

47.N期臨床研究總結資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

48.試生產批件上要求完成工作的完成情況及試驗資料

49.試生產工作總結，包括試生產概況、產量及全面質量檢定結具等

50,連續3?5批試制品的原始制檢記錄及中檢所復檢報告

51.修改后的制造及檢定試行規程和使用說明書，以及修改說明并提供有關試驗資料

52.連續3?5批試制品的穩定性考核資料及所有試制品留樣考核結果總結

關于申報資料工程的幾點說明：

1.不包括基因治療和體細胞治療制劑。

2.每份研究資料后面都應注明試驗設計者、試驗參加者、試驗單位、試驗日期、原始資

料保存處和聯系人等。

3.藥學：

1）常規方法生產制品申報臨末資料需報資料1?16項，采用DNA重組技術或雜交瘤技

術制備制品尚需申報17?20項（I、U類制品）：申報新藥證書、試生產需報資料34?45

項：轉正式生產需報資料46?52項。13項中應說明試制和檢定用主要儀器、設備、環境條

件等。

2）血液制品尚需增加病毒滅活工藝驗證，請參照“血液制品去除或滅活病毒方法及其

驗證和論證程序”。

3）特殊申請申報資料根據不司品種而定。

4）單抗及修飾單抗詳細要求參照“人用鼠源性單克隆抗體質量控制要點”。

5）111、IV類制品根據重大生聲工藝改革情況或劑型、途徑改變情況而減少申報工程。

6）V類制品主要申報1?3和41項。

4.藥理毒理研究：

1）許多新生物制品具有較強的種屬特異性、免疫原性等生物學特性，因此，申報資料的

21?33項，對某些新生物制品可能涉及到選擇相關動物種屬（指受試物在此類動物體內能

逃過表達的受體或抗原決定簇產生藥理活性）進行體內外試驗。有時只能確定一種相關動物

壓于試驗。如確無可供選擇的相關動物種屬，應考慮使用表達人源受體的相關轉基因動物或

使用同系蛋白。

2）未經修飾的人源性血液制品和特異性免疫球蛋白，可免報平安性研究資料（不包括復

方制品）：微生態制品只需做一般平安試驗，其他平安性研究資料可免技。

3）人體內用單克隆抗體的有關申報資料的毒理研究要求，可參考“人用鼠源性單克隆抗

體質量控制要點”（附件四）中有關臨床前研究局部。

4）對第28項的說明：常規使用的遺傳毒性研究方法不適用于生物技術藥物，因此可免

做。但如果對產品有某些擔憂（例如結合蛋白產品中存在有機聯接物），應考慮用相關的或

新建立的方法進行研究。

5）對第29項的說明：可根據女品的情況、臨床適應癥和預期使月的病人群體決定是否

進行該項研究。

6）對第30項的說明：常規使用的致癌研究方法一般不適用于生物技術藥物，然而有些

如生長因廣、免疫抑制劑等產品，應根據臨床用藥時間、病人群體和生物活性對其進行潛在

致癌性的評價。如具有加強或誘導轉化細胞增生和克隆擴增潛力的產品燈能具有致瘤性，可

無相關的惡性或正常細胞和動物模型進行研究。

7）對第32項的說明：免疫毒性研究主要考察擬用于刺激或抑制免疫系統的某些生物技

術藥物，因其可能影響細胞介導的免度或改變靶細胞外表抗原的表達（可能導致自身免疫）。

免疫毒理學評價的一個方面還應包括評價潛在的免疫原性，許多生物技術藥物對動物行

免疫原性，其評價可在市豆給藥毒性試驗中檢測抗體以助說明。

一般對■蛋白質產品呈陽性的豚鼠過敏試驗結果不能預測人體反響，因此，對這類產品進

行該試驗無必要。

8）對申報資料21?33項的有關具體技術要求可進一步參考“藥理毒理申報資料技術要

求”指導原那么的有關章節。

9）第五類制品主要中報21、22、24、25、26、33項（延長用藥周期和/或增加劑量者）。

（二）預防用新生物制品中報資料工程

1.新生物制品臨床研究申請表，附中檢所復檢報告

2.研究工作總結

3.新制品名稱、選題目的和依據、國內外有關方面研究現狀（包括專利）、生產和使用

情況綜述及主要參考文獻

4.生產用菌、毒種來源、歷史、全面檢定及鑒別資料和傳代限度成驗資料

5.生產用菌、毒種毒力（或毒性）及毒力穩定性、傳代限度試驗研究資料

6.生產用菌、毒種原始種子庫和生產種子庫建庫及保存條件、貯存資料

7.生產用菌、毒種原始種子庫和生產種子庫外源因子檢查資料（細菌、真菌、支原體和

病毒）

8.細胞基質外源因子檢查、核型分析及致瘤性試驗資料以及傳代使用代次限度試驗資料

9.抗原性試驗研究資料

10.免疫原性或效力試驗研究資料

1L過敏原性研究資料

12.生產工藝確定及質量檢定方法研究資料

13.中試產品質量及產量全面總結資料

14.參考品或對照品制備及檢定資料

15.至少三批中試產品初步穩定性試驗資料

16.培養及生產、純化過程中參加對人有潛在毒性物質檢查資料

17.供臨床研究用連續三批中試產品的制造和檢定原始記錄

18.中試產品制造和檢定規程草案及起草說明

19,擬進行的臨床研究方案及有關文獻資料

20.生產用動物合格證明，研制和中試車間面積、凈化、工藝走向圖紙，制備和檢定用主

要儀器、設備等情況，省級藥品監督管理部門核實蓋章

21.與原制品比擬資料

22.內包裝材料及選擇的依據

23.工程菌（細胞）構建的詳細資料，包括目的基因的獲得、表達載體詳細結構、宿主

M（細胞）基因型、表型特征等

24.原始種子庫和生產種子庫建庫資料以及貯存復蘇過程中宿主我體表達系統穩定性試

驗資料

25.目的基因核昔酸序列及酶切圖譜以及特異性鑒別資料

26.目的基因表達產物結構確證資料，包括氨基酸組成分析、N末端15個氨基酸及C末

端1?2個氨基酸序列分析、肽圖分析等

27.剩余人D\A含量、宿主蛋白剩余量測定

28.新生物制品證書、生產申請表，附臨床研究批件

29.臨床研究負責單位總結的臨床研究資料，并附各臨床研窕單位的分報告等資料

30.制定保存條件及效期的穩定性試驗資料

31.連續三批試產品原始制檢記錄及中檢所復核報告

32.制造和檢定試行規程及起草說明

33.內包裝材料及選擇的依據

34.使用說明書及包裝、標簽樣稿及有關說明

35.臨床研究批件要求完成工作的試驗資料

36.生產用原材料、試劑、化學藥品的規格及標準

37.試生產車間的GMP認證證書

38.臨床前研究工作簡要總結

39.新生物制品轉正式生產申請表，附試生產批件、制造和檢定試行規程、使用說明書

40.IV期臨床研究總結資料，并附各臨床研究單位的分報告等資料

41.試生產批件上要求完成工作的試驗資料

42.試生產工作總結，包括試生產概況、產量及全面質量檢定結具等

43.連續3?5批試制品的原始制檢記錄及中檢所復檢報告

44.修改后的制造及檢定試行規程和使用說明書，以及修改說明并提供有關試驗資料

45.連續3?5批試制品的穩定性考核資料及所有試制品留樣考核結果總結

說明：

1.不包括DNA疫苗。

2.每份研究資料后面都應注明試驗設計者、試驗參加者、試驗單位、試驗日期、原始資

料保存處和聯系人等。

3.臨床研究申請：用常規方法制備菌苗、疫苗、類毒素申報資料1?22項，用DNA重組

技術產品尚需增加申報23?27項。

4.新生物制品證書、試生產巾請需報28?38項：轉正式生產申請需報39?45項。

（三）體外診斷用品申報資料工程

1.新生物制品證書/生產申請表。

2.研究工作總結。

3.新體外診斷用品的名稱，選題目的和依據，國內外有關的研究現狀及生產使用情況綜

述及主要參考文獻資料，專利檢索資料。

4.產品的研制報告：包括原材料的選擇、制造，生產工藝過程確實定，成品質控標準的

建立，成品性能評價（靈敏度,特異性精密度等），與國內外同類產品進行比擬等試驗資料。

5.連續生產三批產品的原始制造檢定記錄復印件，及中國藥品生物制品檢定所對這三批

產品進行檢定的報告書。

6.穩定性試驗資料：至少三批產品在儲存溫度條件下保存至效期后兩個月的試驗資料，

及37c保存的試驗資料。檢測工程應按成品檢定標，準進行。

7.臨床使用考核資料：選擇三家以上省級醫療衛生單位用統一的方案進行考核，提供一

份總的臨床考核總結報告及各單位的分報告，附臨床考核原始數據。病例數一般不少于1000

例，非常見病可酌減，但要有統計學位義。

8.制造檢定規程草案：參照《中國生物制品規程》的格式書寫。

9.使用說明書：包括中英文名稱，規格，前言（原理、用途、特點），試劑盒組份、操作

步麻，結果判定，考前須知，保存條件及有效期，生產單位名稱、地址、、等。

10.包裝材料及各組份標簽實物或樣稿。

11.《藥品生產企業許可證》豆印件。生產車間驗收文件復印件。

12.轉正式生產申請報告。

13.原批準的試生產批件及試行制檢規程、使用說明書。

14.試生產期間完善生產工藝、生產、銷售情況總結及臨床使用情況分析總結。

15.對試生產批件中耍求進行的研究工作完成情況的總結。

16.提供重新修改的產品制檢規程和使用說明書。

17.中國藥品生物制品檢定所對連續試生產的三批樣品的檢定報缶書及原始生產制造檢

定記錄復印件。

關于申報資料工程的幾點說明：

1.自制原材料為單克隆抗體或基因工程產品，申報資料要求參照附件三、四。

2.放射免疫分析藥盒申報資料工程及要求見附件十。

3.用于檢測病原體的體外核酸擴增（PCR）診斷試劑盒申報資料工程及要求見附件十一。

4.體外診斷用品證書/生產中請需報1-11項，試生產轉正式生產申請需報12?17項。

5.試劑盒檢定所用的參比品由中國藥品生物制品檢定所提供和/或認可。

6.CUTOFF值確實定：正常人標本測定人數應在400人份以上，所得數據經統計學處理。

7.評價體外診斷試劑盒試驗標準應包括兩方面：真實性和可靠性。

①真實性(Validity)：真實性指測量值9實際值符合的程度。(診斷試驗應能提供哪些

人確實有病(真陽性)和哪些人確實無病(真陰性)的指標，這是試驗的真實性)。評價真

實性的兩個指標:靈敏度(Sensitivity)及特異度(Specificity)o

靈敏度是試臉檢出有病(即陽性)的人占病人總數的比例，即真陽性率。特異度指試驗

檢出無病(即陰性)的人占無病者總數的比例，即真陰性率。

表評價一個試驗真實性的資料歸納表

試驗有病(真陽性)無病(具陰性)合V

陽性AB

A+B

陰性CD

C+D

總數A+CB+DA+B

+C+D

用以下公式表示：

靈敏度(真陽性率)=A/(A+CjX100%

特異度(其陰性率)=D/(B+DjX100%

假陽性率=1^(出口)乂100%

假陰性率=C/(A+C)X100%

除上述指標外，還可計算以下幾種指標：

1)粗一致性(Crudeagreement)=(A+D)/(A+B+C+D)X100%

2)調整一致性(adjustedagreement)=1/4{A/(A+B)+A/G\+C)+D/(C+D)+D/(B+D)X100%}

以上兩個指標均說明診斷試驗陽性與羽性結果均正確的百分比，亦反映試驗的真實性。

3)約登指數(youden'sindex)=A/(A+C)+D/(B+D)T約登指數是將靈敏度與特異度之

和減1,指數可從0?1。約登指數愈大，其真實性亦愈大。

②可靠性(reliability)：可靠性是指試驗在相同條件下重復試驗獲得相同結果的穩定

程度。如試驗結果為均數，可用變異系數(coefficientofVariation)表示。公式為

CV=S/XX100%

S為標準差，X為平均值

③預示值(Predictivevalue)：預示值是說明試驗的診斷價值。試驗陽性的預示值是

指試驗陽性者中患病者(真陽性)的可能性；試驗陰性的預示值是指試驗陰性者中為非病人

(真陰性)的可能性。可用以下公式表示：

陽性試驗的預示值=A/(A+B)X100%

陰性試驗的預示值=D/(C+D)X100%

附件三：

人用重組DNA制品質量控制要點

1.引言

由于分子遺傳學、核酸化學及重組D\A（rDNA）技術的迅速開展，現已能夠確定和獲得許

多天然活性蛋白的編碼基因，將其插入表達載體或引入某種宿主細胞后，能有效地表達該基

優產物，再經別離、純化和檢定，可得到用于偵防和治療某些人類疾病的制品，諸如現有的

乙型肝炎疫苗、胰島素、生長激素、干擾素等。

用不同于常規方法的rDNA技術生產的制品，是近年來出現的新產品，評價其平安性和

有效性亦不同于常規方法。目前在這方面的生產和質量控制經驗不多，而且這一領域中的知

法和技術還在不斷開展，但是，為了有利于這類制品在我國的研究和開展，并為這類制品的

審評提供依據，有必要制定一個原那么性指導文件，以保證在人群中試驗或應用時平安有效。

本“質量控制要點”（以下簡稱《要點》）不可能面面俱到，可能有許多專門技術問題會

出現，對于這類問題或某一特定制品，那么應視具體問題具體研究決定。本《要點》亦將隨科

學技術開展和經驗積累而逐步完善。

2.總那么

2.1本《要點》適用于rDNA技術生產并在人體內應用的制品。

2.2凡屬與一般生物制品有關的質量控制，均按現行《中國生物制品規程》執行。

有關生產設施的要求應參照國家藥品監督管理局《藥品生產質量管理標準》1999年版

執行。

3.質量控制要求

3.1原材料的控制

表達載體和宿主細胞

應提供有關表達載體詳細資料，包括基因的來源、克隆和鑒定，表達載體的構建、結構

和遺傳特性。應說明載體組成各局部為來源和功能，如復制子和啟動子天源，或抗生素抗性

標志物。提供至少包括構建中所用位點的海切圖譜。應提供宿主細胞的資料，包括細胞株（系）

名稱、來源、傳代歷史、檢定結果及根本生物學特性等。

應詳細說明載體引入宿主細胞的方法及載體在宿主細胞內的狀態，是否整合到染色體

內，拷貝數。應提供宿主和載體結合后的遺傳穩定性資料。

3.1.2克隆基因的序列

應提供插入基因和表達載體兩側端控制區的核甘酸序列。所有與表達有關的序列均應詳

細表達。

表達應詳細表達在生產過程中，啟動和控制克隆基因在宿主細胞中的表達所采用

的方法及表達水平。

3.2生產的控制

主細胞庫（MASTERCELLBANK）

rDNA制品的生產應采用種子批（SEEDLOT）系統。從已建立的主細胞庫中，再進一步

建立生產細胞庫（WCB）。

含表達載體的宿主細胞應經過克隆而建立主細胞庫。在此過程中，在同一實驗室工作區

內，不得同時操作兩種不同細胞（菌種）：一個工作人員亦不得同時操作兩種不同細胞或菌

種。

應詳細記述種子材料的來源、方式、保存及預計使用壽命。應提供在保存和復蘇條件卜.

宿主載體表達系統的穩定性證據。采用新的種子批時，應重新作全面檢定。

高等真核細胞用于生產時，組胞的鑒別標志，如特異性同功酶或免疫學或遺傳學特征，

對鑒別所建立的種子是有用的。有關圻用傳代細胞的致腫瘤性應有詳細報告（參照：陽0生

物制品規程No.37）。如采用微生物培養物為種子，那么應表達其特異表型特征。

一般情況下，在原始種子階段應確證克隆基因的DNA序列。但在某些情況下，例如傳代

細胞基因組中插入多拷貝基因。在此階段不適合對克隆基因作DNA序列分析。在此情況下，

可采用總細胞DNA的雜交印染分析，或作mRNA的序列分析。對最終產品的特征鑒定應特別

注意。

種子批不應含有nJ?能致癌因子（在使用情況下），不應含有感染性外源因子，如細菌、

支原體、真菌及病毒。

但是有些細胞株含有某些內源病毒，例如逆轉錄病毒，且不易除去。但當已確知在原始

細胞庫或載體局部中污染此類特定內源因子時，那么應能證明在生產的純化過程可使之滅活或

去除。

有限代次生產

用于培養和誘導基因產物的材料和方法應有詳細資料。對培養過程及收獲時，應有靈敏

的檢測措施控制微生物污染。

應提供培養生長濃度和產量恒定性方面的數據，并應確立廢棄一批培養物的指標。根據

宿主細胞/載體系統的穩定性資料，確定在生產過程中允許的最高細胞倍增數或傳代代次，

并應提供最適培養條件的詳細資料。

在生產周期結束時，應監測宿主細胞/載體系統的特性，例如質粒拷貝數、宿主細胞中

表達載體存留程度、含插入基因的載體的曲切圖譜。一般情況下，用來自一個原始細胞庫的

全量培養物，必要時應做一次基因表達產物的核甘酸序列分析。

連續培養生產

根本要求同。

應提供經長期培養后所表達基因的分子完整性資料，以及宿主細胞的表型和基因型特

征。每批培養的產量變化應在規定范圍內。對可以進行后處理及應廢棄的培養物，應確定指

標。從培養開始至收獲，應有靈敏的檢查微生物污染的措施。

根據宿主/載體穩定性及表達產物的恒定性資料，應規定連續培養的時間。如屬長時間

連續培養，應根據宿主/載體稔定性及產物特性的資料，在不同間隔時間作全面檢定。

純化

對于收獲、別感和純化的方法應詳細記述，應特別注意污染病毒、核酸以及有害抗原性

物質的去除。

如采用親和層析技術，例如用單克隆抗體，應有檢測可能污染此類外源性物質的方法，

不應含有可測出的異種免疫球蛋白。

對整個純化工藝應進行全面研究，包括能夠去除宿主細胞蛋白、核酸、糖、病毒或其它

雜質以及在純化過程中參加的有害的化學物質等。

關于純度的要求可視制品的用途和用法而確定，例如，僅使用一次或需反豆屢次使用；

用于健康人群或用于重癥患者；對純受可有不同程度要求。

3.3最終產品的控制

應建立有關產品的鑒別、純度、卷定性和活性等方面的試驗方法。檢測的必要性和純度

要求取決于多種因素：產品性質和用途、生產和純化工藝及生產工藝的經驗。一般說來以F

試驗對控制產品質量是可以采用的。

物理化學鑒定

.1宏基酸成份分析

完整的氨基酸成份分析結果，應包括甲硫雙酸、半胱敏酸及色氨酸的準確值。氨基酸成

份分析結果應為三次分別水解樣品測定后的平均值。

.2局部氨基酸序列分析

局部氨基末端序列分析（N端15個緘基酸）可作為rDNA蛋白質和肽的重要鑒別指標。

.3肽圖分析

肽圖分析可作為與天然產品或參考品作精密比擬的于?段。與氨基酸成分和序列分析結果

合并，可作為蛋白質的精確鑒別。對含二硫鍵的制品，肽圖可確證制品「二硫鍵的排列。

.4聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）及等電聚焦

PAGE及等電聚焦有助于證實蛋白質和肽類的純度和分子量，亦可作為鑒別試驗。

PAGE應包括在復原和非復原條件下試驗，且應有適宜的分子量標記物作參比。凝膠帶

應用靈敏的方法染色，例如銀染法，可測定微量蛋白質，亦有助于檢出羊蛋白質物質，例如

核酸、糖及脂類。對分子量小于800C的肽類，PAGE測得的分子量可能不準確。

.5高效液相色譜（HPLC）

測定蛋白質和肽類的純度，HPLC是一種有用的方法，在某些情況卜.,還可用來評定其

分子構型和用作鑒別試驗。

.6剩余細胞DNA測定

必須用敏感的方法測定來源于宿主細胞的剩余DNA含量，這對于用哺乳動物傳代細胞（轉

化的細胞系）生產的制品尤為重要。一股認為剩余DNA含量小于lOOpg/劑是平安的，但應

視制品的用途、用法和使用對象而決定可接受的限度。

.7其它外源性物質

例如，用單克隆抗體（鼠源）親和層析純化的制品，應測定可能存在的鼠IgG,細胞培

養生產的制品，應測定剩余小半血清含量（以p.p.m表示）：在培養及純化過程中所添加的

可能有害物質，亦應有相應的測定數據。

生物學測定

.1鑒別試驗

在可能情況下，應用參考品將rDNA制品與天然產品通過生物學比擬試驗，確定其與天

然產品是一致的。

.2效價測定

采用國際或國家參考品，或經過國家檢定機構認可的參考品，以體內或體外法測定制品

的生物學活性，并標明其活性單位。

.3特異比活性測定

在測定生物學活性的根底上，對有些制品還應測定其特異比活性，以活性單位/重量表

示之。

.4熱原質試驗

應采用注射家兔法或窗試驗法（LAL）作熱原質檢測（《中國生物制品規程》），控制標準

可參照天然制品的要求。

.5病毒污染檢查

應采用適當的培養基質和培養條件，檢查可能污染的病毒，應證實最終制品不含外源病

擊。

.6無菌試驗

參照現行《中國生物制品規程》進行無菌試驗，應證實最終制品無細菌污染。

.7抗原性物質檢查

在有必要時，如制品屬大劑量反復使用者，應測定最終制品中可能存在的抗原性物質，

如宿主細胞、亞細胞組分及培養基成份等。患者反復接受大劑量的這類制品時，應密切監測

止這些抗原可能產生的抗體或變態反響。

.8毒性試驗

可參照現行《中國生物制品規程》執行。

4.臨床前平安性評價

臨床前平安性試驗的目的主要是確定新制品是否會在人體引起未能預料的不良反響。但

是，用于一般化學藥物的傳統平安性或毒性試驗對rDNA產品不一定適用，用傳統毒性試驗

來評價rDNA產品往往有困難，并受多種因素的影響。例如，某些蛋白質，如干擾素，具有

高度種屬特異性，這種人的蛋白質對人的藥理學活性遠超于對動物的活性，而且人的蛋白質

負基酸序列，常常與來自其它種系的蛋白質不同，例如糖基就不一樣。因而由基因工程技術

所制備的蛋白質或肽類往往會在人體以外的其它宿主中產生免疫應答，其生物學效應有所改

變，并可能因形成免疫復合物而導致有毒性反響，而這樣產生的毒性反響與人體平安性顯然

無關。

綜上述理由，對rDNA產品的臨床前平安性試驗要求，難以一概而論，應采取較為靈活

的處置方法。除了一般生物制品的毒性試驗要求之外，其它如長期毒性試驗、藥代動力學試

驗、藥理學試驗、毒理學試驗，以及致畸和致突變等試驗，應根據制品性質，與國家檢定機

構及藥品審評中心商定所需進行的試驗工程和方法，以及判定標準。

5.臨床試驗

用rDNA技術所生產的制品必需經過臨床試驗，以評價其平安性和有效性。

附件四：

人用鼠源性單克隆抗體質量控制要點

本品系用雜交瘤技術將抗原免疫動物后，取脾或外周血淋巴細胞或經體外免疫獲得的免

疫淋巴細胞與相應的骨髓瘤細胞融合建立穩定分泌特異抗體的雜交瘤細胞株，通過體內法或

體外培養法制備單克隆抗體，經提取純化獲得的特異性單克隆抗體制劑。用于有關疾病的診

呼或治療。

1雜交瘤細胞

1.1親本細胞

骨髓瘤細胞

SP2/0或其他適宜的骨筋瘤細胞系。應為不合成或不分泌免疫球蛋白維型，具有符合骨

燧瘤細胞的染色體條數，并布.明確的來源歷史及符合要求的保存條件。

免疫親代細胞

經抗原免疫的鼠脾B淋巴細胞或外周血B淋巴細胞。

應有明確的免疫原來源、性質及動物種系，免疫原詳細的制備過程。

適宜的免疫方法及免疫淋巴組胞制備的方法。

1.2細胞融合

末次免疫后第3天取脾制成組胞懸液，與骨髓瘤細胞按一定的比例混合并在融合劑作用

卜或在電融合儀中按常規法或其他適宜的方法進行細胞融合。

1.3克隆化

用ELISA或其他適宜方法篩選出分泌目的抗體的雜交痛經有限稀釋法或其他適宜方法對

具進行克隆化，直至獲得具有穩定分泌單克隆抗體能力的雜交瘤細胞系。

1.4雜交痛細胞檢定

抗體分泌穩定性

經克隆化及連續傳代后檢查。連續克隆化后至檢測單克隆抗體陽性率達100%,并在體

外傳代3個月以上細胞株能保持穩定為分泌抗體。

細胞核學特征

檢查細胞分裂中期染色體。應符合雜交瘤細胞的核型。

鼠源病毒檢查

按附錄1要求檢測鼠源病毒。

.1細胞接種法

細胞及培養上清分別接種人2BS細胞、Ver。細胞，接種量為107。樣品接種細胞后，傳

兩代，制片，用IFA法檢測病毒抗原，

.2動物接種法

樣品接種出生24小時以內乳小鼠兩窩(至少10只)，15?20g成年小鼠10只，300?350g

的豚鼠5只。每只動物腹腔接種107活細胞。觀察4周，存活率應在80%以上：另外接種對

謝.巴脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)敏感的成年小鼠10只，腦內接種106活紐I胞，觀察4周，

存活率應在80%以上。用ELISA或其他適宜的方法檢測血清中病毒抗體。

.3雞胚接種法

樣品接種SPF雞胚尿囊腔和卵黃囊。每種途徑至少10只，每只接種106活細胞，孵育

5天，用豚鼠和雞紅血球做HA法檢測病毒血凝素，同組雞胚中至少80%保持健康并存活，試

驗有效。單抗制品不應有鼠源病毒污染。

對產生單克隆抗體的鼠類細胞系，一般認為具有產生傳染性鼠類反轉錄病毒的能力，可

以不做反轉錄病毒檢測，但應有資料證明制造工藝中能去除或滅活反轉錄病毒。

支原體檢查

.1培養法

細胞及培養上清分別接種支原體培養基，按《生物制品檢定標準操作細那么》進行。應設

使、陽性對照。

.2DNA熒光染色法

細胞及培養上清分別與指示組胞共同培養，按《生物制品檢定標準操作細那么》進行。

無菌試驗

按《生物制品無菌試驗規程》進行。

2單克隆抗體的檢定

2.1免疫球蛋白類及亞類

用免疫雙擴散法或其他適宜的方法測定。

2.2親和力

用適宜的方法測定單抗的親和常數或相對親和力。

2.3特異性

測定單抗對靶抗原的特異性：分析單抗識別的抗原決定簇。

2.4交叉反響

按附錄2要求。

免疫組織化學法測定單抗與人體組織交叉反響，用冰凍及石蠟包埋的成年人及胎兒各臟

器組織溶定。來源于腫瘤相關抗原的單抗應進行可各種腫瘤組織的交叉反響試驗。

2.5效價測定

用ELISA法或其他特異性方法測定。

3其他原材料

3.1細胞培養用小牛血清

支原體檢測應為陰性。經小量試驗適于雜交瘤細胞生長。

3.2培養液

應有培養液來源，質量指標。

3.3化學試劑

規格應到達分析純以上。

4細胞庫的建立和單克隆抗體的生產

為了保證長期、穩定的生產出符合要求的高質量單抗，首先要建立高標準的細胞庫。同

時單抗生產場所必須符合GMP要求，潔凈無污染，生產人員無傳染病，穴得從事其他可導致

傳染原污染單抗制劑的工作：無關人員不得進入生產區內。在同一車間8,不得同時生產其

他無關單抗。

4.1細胞庫

建立原始細胞庫和生產細胞庫，幾種細胞株用于同一目的生產時，應分別建立細胞庫及

種子批。

原始細胞庫

為雜交瘤細胞建立時較原始的細胞管，即融合細胞管、一次克隆及屢次克隆的細胞管。

種子細胞庫

由原始細胞庫中建株細胞擴大培養凍存的細胞種子。每一批細胞管數不應少于20支，

賬上標簽放入液氮中保存。種子批應進行外源因子檢查，包括細菌、真茵、支原體及病毒污

染的檢查。

生產細胞庫

經檢定合格后的雜交瘤細胞按生產條件大量培養、凍存的細胞管為生產細胞庫。每一生

產細胞批細胞管數不少于10支，每次生產腹水時取生產細胞管一支復蘇、擴增及生產，不

再回凍。細胞庫應詳細紀錄存放細胞管位置、代數、管數、凍存、復蘇的情況，并有專人負

責。同時要進行各種外源因子檢測，保證沒有污染。

4.2單克隆抗體制備

小鼠腹水法

.1小鼠

制備腹水必需使用SPF級小鼠，生產用鼠必需經過檢查，應無鼠源病毒污染，并有合格

證明。在腹水牛.產過程中如發現動物不健康、咬傷、感染者均應廢棄。

.2動物實驗設施

動物實驗設施應有相關部門頒發的二級以上的合格證。

.3細胞擴大培養

取生產批細胞管一支復蘇，加營養液進行擴大培養，一支生產細胞只用一次，不再凍存。

.4細胞接種

制備腹水均須在無菌條件下完成。注射雜交瘤細胞之前，每只小鼠腹腔注射液體石蠟或

降植烷0.5ml。一般在1周后每只小鼠注射雜交瘤細胞1-3X106。

.5腹水的采集

注射細胞后一般7?10天，或在小鼠瀕死前一次性采集腹水