1T/PYQGSXXXXXX—XXXX陰生觀賞植物組織培養(yǎng)快繁技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了陰生觀賞植物組織培養(yǎng)的基本要求、培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)材料與外植體滅菌、接種操作、組培苗移栽和培育、種苗質(zhì)量、包裝、標(biāo)簽和運(yùn)輸。本文件適用于紅掌、白掌、竹芋、綠蘿等陰生觀賞植物組培種苗繁殖活動。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實(shí)驗室生物安全通用要求NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1外植體從自然生長的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。3.2組培苗plantlet利用植物的組織、器官或細(xì)胞等作為起始材料，通過植物組織培養(yǎng)方式生產(chǎn)獲得的植株。3.32T/PYQGSXXXXXX—XXXX移栽到穴盤中培育的組培苗。3.4生長在固體培養(yǎng)基（凝固劑一般為瓊脂）的組培生根苗。3.5無瓊脂苗ex-agarplantlet從培養(yǎng)容器中取出并洗去表面培養(yǎng)基的組培生根苗。4基本要求4.1人員要求4.1.1工作人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)獲取上崗資格。4.1.2接種人員應(yīng)在更衣室更換拖鞋、穿白大褂（或接種服），戴上帽子和口罩后進(jìn)入接種室（或經(jīng)過風(fēng)淋室后進(jìn)入接種室），操作前和操作中經(jīng)常用75%酒精棉球擦手。4.2設(shè)施要求應(yīng)配備洗滌室、培養(yǎng)瓶晾干室、試劑室（稱量室）、培養(yǎng)基配制室、高壓滅菌室、培養(yǎng)基儲存室、更衣室、接種室、培養(yǎng)室、出苗室和貯物室等。4.3設(shè)備、儀器要求應(yīng)配備高壓滅菌器、紫外燈、臭氧發(fā)生器、電子天平、pH計、冰箱、微波爐、超凈工作臺、微量移液器、接種器具（電熱殺菌器）、石英玻璃珠、槍狀鑷子、手術(shù)刀柄刀片、切割碟子、溫度計、光照培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架（包括日光燈）、調(diào)速振蕩器、組培瓶、試管、盛裝器皿（燒杯、試劑瓶等）、計量器皿（量筒、容量瓶等）以及其他常用消耗品等。儀器設(shè)備應(yīng)符合GB19489的規(guī)定。5培養(yǎng)基配置3T/PYQGSXXXXXX—XXXX5.1培養(yǎng)基選擇根據(jù)培養(yǎng)材料及培養(yǎng)目的選擇合適的基本培養(yǎng)基和植物生長調(diào)節(jié)劑種類及濃度配比。5.2化學(xué)試劑選擇和保存5.2.1試劑在使用前目測應(yīng)無異物、異色或者吸濕結(jié)塊。5.2.2試劑標(biāo)簽完整，并在有效期內(nèi)。5.2.3試劑應(yīng)按試劑說明要求存放。5.3基本培養(yǎng)基母液配置和保存5.3.1母液配制應(yīng)用蒸餾水或去離子水。5.3.2母液配好后容器上應(yīng)貼好標(biāo)簽，注明名稱、濃度、配制日期。5.3.3發(fā)現(xiàn)標(biāo)簽不明、有沉淀、渾濁或變色現(xiàn)象的母液應(yīng)停止使用。5.4植物生長物質(zhì)母液配置植物生長物質(zhì)的母液配制應(yīng)符合接種植物的生長特性需求，母液配制好后貼好標(biāo)簽，按規(guī)定要求保存，保存期應(yīng)不超過2個月。5.5培養(yǎng)基制作5.5.1依據(jù)培養(yǎng)基成分準(zhǔn)備好蒸餾水、蔗糖、瓊脂和各類母液。5.5.2加適當(dāng)比例的水，再加瓊脂粉放入鍋中加熱攪拌使其融化。5.5.3瓊脂粉融化后，加入蔗糖，攪拌使蔗糖溶解。5.5.4蔗糖溶解后，停止加熱，放入吸取的各類母液，并充分?jǐn)嚢琛嚢杈鶆蚝螅尤胝麴s水混合定容并攪拌均勻。5.5.5定容后，根據(jù)不同定量分裝，每瓶30m1～40ml，蓋好瓶蓋或用封口膜封口。5.6培養(yǎng)基消毒滅菌將分裝好的培養(yǎng)基、蒸餾水、接種器械、無菌紙、工作服、口罩、帽子等放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，采用濕熱空氣滅菌法（滅菌壓力0.11MPa～0.14MPa、溫度120℃~126℃、時間15min～20min）進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基高壓滅菌取出后，置于室溫至培養(yǎng)基凝固后即可使用。4T/PYQGSXXXXXX—XXXX6培養(yǎng)材料與外植體滅菌6.1培養(yǎng)材料選擇選擇觀賞性狀好、生長健壯、無病蟲害、花期長的優(yōu)良的品種，并選用帶芽莖段為外植體。6.2外植體滅菌選擇生長健壯的帶芽莖段，在自來水下沖洗20min。在無菌室內(nèi)把嫩莖放入75％的酒精中浸泡20s，用無菌水沖洗一遍，再用10％的次氯酸鈉浸泡8min～10min，然后用無菌水沖洗6遍～7遍，用無菌濾紙吸干水分。7接種操作7.1接種準(zhǔn)備7.1.1接種人員在接種之前應(yīng)準(zhǔn)備酒精燈或電熱滅菌器、酒精、無菌脫脂棉或紗布以及接種器械、培養(yǎng)基、接種用苗等。7.1.2超凈工作臺（或潔凈無菌接種室）提前30min打開紫外燈，滅殺菌30min后關(guān)掉紫外燈，然后開機(jī)通風(fēng)，打開接種用電熱滅菌器，15min～20min后人員才可進(jìn)入室內(nèi)。用75%酒精擦洗超凈工作臺面消毒。7.2接種器械滅菌接種器械先用75%酒精擦拭，再放在酒精燈外焰上灼烤，時間≥10s。若使用接種用電熱滅菌器，接種器械先用75%酒精擦拭，待電熱滅菌器溫度升至250℃~300℃,再插入接種用電熱滅菌器中進(jìn)行滅菌，第一次滅菌3min～4min，以后每次使用滅菌≥15s。7.3外植體接種7.3.1初代培養(yǎng)在無菌濾紙上將表面滅菌處理后的外植體切割成所需大小，接入初代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。外植體初代培養(yǎng)20d～40d后，一般可誘導(dǎo)出幼芽。7.3.2增殖培養(yǎng)5T/PYQGSXXXXXX—XXXX將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)形成幼芽或叢生芽后，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)周期根據(jù)培養(yǎng)材料及組培苗生長情況而定，一般培養(yǎng)周期為30d～60d；增殖培養(yǎng)代數(shù)控制在16代～24代以內(nèi)，繁殖系數(shù)控制在2.5～4.0。7.3.3壯苗培養(yǎng)將增殖的叢生芽接種到壯苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20d～30d后幼苗株高可生長達(dá)2cm～5cm。7.3.4生根培養(yǎng)從壯苗培養(yǎng)的幼苗中切取生長健壯、葉色正常、葉片舒展、適于生根的無根苗，接種在生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)20d～30d后幼苗基部長出數(shù)根新根。8組培苗移栽和培育8.1移栽要求生根培養(yǎng)30d后，幼苗基部長出3條以上，新根長為1cm～3cm，根系粗壯有活力。8.2煉苗在移栽前將培養(yǎng)瓶放置溫室自然散射光下，溫度控制在25℃±3℃,封口煉苗3d～7d。8.3移栽8.3.1出瓶用鑷子輕輕取出組培幼苗并洗凈其根部培養(yǎng)基，用多菌靈溶液浸泡2min～5min。8.3.2基質(zhì)配置配制混合基質(zhì)，泥炭土、珍珠巖、蛭石等按一定比例混配好，裝入穴盤中并壓緊，定植前用多菌靈溶液浸透。8.3.3定植用竹簽等工具在每穴上打能容納根系的孔，將組培苗的根系放入孔內(nèi)，覆土壓實(shí)。8.4穴盤苗培育6T/PYQGSXXXXXX—XXXX用薄膜和遮陽率75%的遮陽網(wǎng)蓋膜保濕遮光，空氣濕度控制在75%～85%；14d后撤掉薄膜和遮陽網(wǎng)，不應(yīng)強(qiáng)光直曬，保持基質(zhì)濕潤，養(yǎng)護(hù)溫度為25℃~28℃;當(dāng)小苗有新根和新葉長出時開始施肥。選用肥料應(yīng)符合NY/T496的規(guī)定。8.5種苗出圃當(dāng)種苗株高5cm～8cm，苗健壯挺拔，形態(tài)完整，葉色濃綠有光澤，根系成團(tuán)時可出圃。9種苗質(zhì)量9.1組培苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)9.1.1整體感：苗有活力，粗壯、挺直，葉片大小協(xié)調(diào)、有層次感、色澤正常，葉色具原品種特性。9.1.2根系狀況：有新鮮根系（一般3條以上），長勢好、色白健壯，根長適中，基本無愈傷組織。9.1.3苗高：苗高適中，一般3cm～5cm。9.1.4葉片數(shù)：具有適宜和正常的葉片數(shù)，一般不少于3片。9.1.5整齊度：同一批次90%以上的苗高達(dá)到要求的高度。9.1.6培養(yǎng)基污染狀況：無污染。9.2組培穴盤苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)9.2.1整體感：苗健壯、挺拔和新鮮，形態(tài)完整、葉片大小協(xié)調(diào)，葉色具原品種特性、有光澤。9.2.2根系狀況：應(yīng)具有完整而發(fā)達(dá)的根系，根系充滿穴盤孔，能輕易拔出而基質(zhì)不散。9.2.3苗高：苗矮壯墩實(shí)，一般8cm～12cm。9.2.4葉片數(shù)：具有較多的葉片數(shù)，一般8片以上。9.2.5整齊度：同一批次90%以上的苗高達(dá)到要求的高度。9.2.6病蟲害損傷：無檢疫性病蟲害，亦無病蟲害危害斑點(diǎn)。10包裝、標(biāo)簽和運(yùn)輸10.1包裝10.1.1組培苗產(chǎn)品應(yīng)按照客戶（或者訂單）要求包裝，同時保證組培苗成活率。7T/PYQGSXXXXXX—XXXX10.1.2瓊脂苗包裝：保留在培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶放在泡沫箱里，箱外再用紙箱包裝，高溫季節(jié)泡沫箱內(nèi)最好加冰袋。為防止上下倒置運(yùn)輸時可使用托盤。10.1.3無瓊脂苗包裝：生根組培苗洗去瓊脂后，先裝入小塑料盒（袋），再放在泡沫箱里，箱外再用紙箱包裝，高溫季節(jié)泡沫箱內(nèi)最好加冰袋。運(yùn)