ICS13.020.99CCSZ01T/JSAE2—2024TechnicalspecificationforecologicalqualityassessmentofJiangsucoastalbeachbasedoninsectbiodiversI II 12規范性引用文件 3術語和定義 4生物評估工作流程 25生物評估技術規程 25.1調查采樣 25.2生物監測 45.3生物指數計算 55.4生物評估等級判定 6附錄A（資料性）采樣信息記錄表 7附錄B（資料性）樣線掃網法觀測數據記錄表 9附錄C（資料性）人為活動干擾情況評估表 附錄D（資料性）沿海灘涂昆蟲指示類群表 附錄E（資料性）沿海灘涂昆蟲指示類群的確定方法 本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇沿海地區農業科學研究所提出。本文件由江蘇省農業工程學會歸口。本文件起草單位：江蘇沿海地區農業科學研究所、鹽城師范學院，鹽城工學院，江蘇鹽城國家級珍禽自然保護區管理處。本文件主要起草人：王凡、孫星星、葛寶明、李洪山、陳浩、成海、王凱、蔣穎潔、高波、黎文建、胡積祥、于鵬、張成碩。基于昆蟲多樣性指數的江蘇沿海灘涂生態質量評估技術規程本文件規定了沿海灘涂昆蟲的調查采樣技術、生物監測方法，以及基于昆蟲指示類群DNA監測數據的沿海灘涂生態質量評估方法。本文件適用于江蘇沿海灘涂生態系統的生物評估。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ710.8生物多樣性觀測技術導則淡水底棲大型無脊椎動物SN/T4278國境口岸醫學媒介昆蟲DNA條形碼鑒定操作規程T/CSES81淡水生物監測環境DNA宏條形碼法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。沿海灘涂coastalmudflat沿海大潮高潮位與低潮位之間的潮浸地帶，包含已利用的灘涂。3.2昆蟲多樣性指數insectbiodiversityindex表示昆蟲群落內的分類單元或分子分類單元多樣性程度的量綱的數值，是用來判斷昆蟲群落結構變化或生態系統穩定性的指標。3.3指示類群indicativetaxa生態系統中的一種或多種優勢類群、特有類群或先期定居類群的總稱，其群落組成和功能結構的變化可以反映生態環境的變化。3.4DNA條形碼DNAbarcode生物體內能夠代表該物種的、標準的、有足夠變異、易擴增且相對較短的DNA片段，可用于生物的識別和鑒定。23.5DNA條形碼鑒定技術DNAbarcodingidentificationtechnique利用DNA條形碼基因片段進行生物物種鑒定的技術，建立在基因擴增和序列比對的基礎之上。3.6分子分類單元moleculartaxonomicunitDNA條形碼監測物種分類工作中的操作單元，有特定的名稱和序列分類特征，如OTU。4生物評估工作流程包括沿海灘涂昆蟲調查采樣、生物監測、指示類群監測數據匯總、生物評估和評估等級劃分等，示意圖見圖1。圖1評估工作流程示意圖5生物評估技術規程5.1調查采樣5.1.1調查采樣時間與頻次綜合考慮昆蟲生物學特征和種群動態情況，根據監測條件和評估要求開展。按年度監測，可選擇在昆蟲發生盛期5-10月份，調查次數不少于2次，避開雨水集中的時間；按季節監3測，分別在春、夏、秋、冬季進行；按月度監測，每月1次，監測的時間間隔應盡量一致。5.1.2調查采樣點布設總則采樣區域的選擇需要綜合考慮灘涂濕地中不同昆蟲類群的生態特征和生活史、不同生境類型中的植被分布、不同水體類型的深度、底質類別、水化學等因素的影響，盡量覆蓋所有生境類型。采樣樣線或點位的布設盡量避免污水處理廠、養殖和垂釣區域等人類活動影響較大的區域，采樣同時填寫采樣信息記錄表。陸生昆蟲調查采樣布設按照沿海灘涂植被覆蓋情況劃分蘆葦、堿蓬、米草、光灘、灌叢等典型生境區域，每個典型生境內至少選擇3個調查采樣區域，并填寫采樣信息表（附錄A.1）。水生昆蟲調查采樣布設根據監測要求在沿海灘涂近海海域設置采樣點位，可選擇主要河流入海口區域、近海岸區域、閘口區域以及潮灘小水體區域。在快速流動的海水和河流區域，建議采樣點位間隔10km以上。在緩慢流動的河流和溪流中，建議間隔1km以上設置采樣點，根據水體的寬度和深度設置采樣點位，并填寫采樣信息記錄表（附錄A.2）。5.1.3調查采樣方法樣線掃網法每個調查采樣區域內設置不少于5條樣線，監測者按照1km/h～2km/h的速度沿樣線行進，左右揮動180°為一復網，每10復網為一組，每條樣線調查10組，調查人員對捕獲到的昆蟲進行初步物種鑒定并填寫數據記錄表（附錄B）。捕獲的昆蟲放置毒瓶內毒殺后，浸泡于濃度≥80%的乙醇溶液中。對于大型蛾蝶類昆蟲，則使用乙醇溶液進行胸部注射毒殺后，取單側足浸泡于≥80%的乙醇溶液中。采集到的樣品野外常溫保存，室內4℃保存。馬來氏網法每種主要生境類型中設置不少于3個馬來氏網誘捕昆蟲。用固定繩索拉緊馬來氏網各個網面，使網脊傾斜角度保持在35°~45°。馬來氏網前端頂部安裝收集瓶，收集瓶中放入2/3以上體積的100%乙醇，在極端干旱或濕潤條件下，盡量放滿瓶的100%乙醇。每15d回收收集瓶一次，收集瓶野外常溫保存，室內4℃保存。此方法主要適用于采集雙翅目、膜翅目、半翅目等昆蟲類群。樣方陷阱法每個調查采樣區域內選取5個樣方，每樣方間隔>2m。樣方內安置3個陷阱杯（呈三4角形排列，間隔約50cm陷阱杯為高度12cm、杯口直徑8cm的硬質塑料杯，每個陷阱杯內盛50mL左右的50%丙二醇溶液，用于殺死和保存昆蟲標本，雨水較多的季節可在陷阱杯上方搭建不影響昆蟲爬行的遮擋板。每7d取出陷阱杯回收昆蟲一次，回收的昆蟲清除枯葉等雜質后浸泡于濃度≥80%乙醇溶液中，野外常溫保存，室內4℃保存。此方法主要適用于采集鞘翅目等地表昆蟲類群。燈光誘集法~使用支桿撐掛白色幕布用于收集昆蟲，并在幕布前方0.1m處安置高壓汞燈（功率250~500W），選擇20:00-02:00時間段進行燈誘。將捕獲的昆蟲至于毒瓶后，浸泡于濃度≥80%乙醇溶液中，野外常溫保存，室內4℃保存。此方法主要適用于采集有趨光性的昆蟲。采泥器取樣法每個調查采樣區域選擇不少于3個樣點。在深度大于1m的水域，使用Peterson采泥器（1/16m2）抓取底泥8次。采樣時，將采泥器在打開狀態下掛好提鉤，緩慢放至底部，抖脫提鉤后上提，待兩頁閉合后拉出水面。若采泥器未完全閉合，需重新采集。樣品篩選可參考HJ710.8的規定執行，篩選后的樣品可不做分揀，保留剩余環境基質加入乙醇溶液，確保最終的乙醇濃度≥80%，野外常溫保存，室內4℃保存。此方法主要適用于深水區水生昆蟲的采集。D型網取樣法流速緩慢的淺水區，利用D型網（40目紗網）沿岸邊刮取底泥。在垂直方向上下網掃，約進行10次。同時，在水平方向逆水流沿底泥網掃2m，完成一個D形網的采集。每個采樣區域需完成30個D形網采集。樣品篩選和保存方法同4.4.5。此方法主要適用于淺水區水生昆蟲的采集。5.2生物監測5.2.1沿海灘涂昆蟲物種鑒定昆蟲種類鑒定主要采用DNA條形碼鑒定技術，獲取每個調查點位昆蟲物種的分子分類單元數和相對豐度。陸生昆蟲樣品DNA條形碼鑒定方法按照SN/T4278的規定執行。水生昆蟲樣品DNA條形碼鑒定方法按照T/CSES81的規定執行。5.2.2昆蟲指示類群監測數據匯總按照附錄D以科級為分類單元對物種鑒定結果進行數據統計，獲取每個調查點位昆蟲指示類群各物種的分子分類單元數和相對豐度。55.3生物指數計算5.3.1昆蟲多樣性指數瑪格列夫指數（Margalefindex,D)式中：D——瑪格列夫指數；S——總分子分類單元數目；N——總序列數香農-威納指數（Shannon-Wienerindex,H'）式中：H'——香農-威納指數；S——總分子分類單元數目；Pi——分子分類單元i的相對豐度。Pielou均勻度指數（Pielou’sevenessindex,J）式中：J——Pielou均勻度指數；H'——香農-威納指數；S——總分子分類單元數目。5.3.2昆蟲綜合多樣性指數（Comprehensiveinsectbiodiversityindex，CIQI）陸生昆蟲綜合多樣性指數（CIQIt）按照公式（4）計算，各指數的權重設定參照表1。表1陸生昆蟲各多樣性指數權重瑪格列夫指數香農-威納指數（H'）Pielou均勻度指數（J）權重0.8212.26水生昆蟲綜合多樣性指數（CIQIa）按照公式（5）計算，各指數的權重設定參照表2。6表2水生昆蟲各多樣性指數權重瑪格列夫指數香農-威納指數（H'）Pielou均勻度指數（J）權重1昆蟲綜合多樣性指數（CIQI）按照公式（6）計算。5.4生物評估等級判定根據昆蟲綜合多樣性評估指數（CIQI）得分情況劃分沿海灘涂生態質量評估等級為5級，由高到低分別為：優秀、良好、中等、較差、很差，見表3。表3沿海灘涂生態質量等級判定標準等級優秀較差很差CIQICIQI>2.01.5<CIQI≤2.01.0<CIQI≤1.50.5<CIQI≤1.0CIQI≤0.57附錄A（資料性）采樣信息記錄表表A.1陸生昆蟲采樣信息記錄表樣地編號：樣地名稱：天氣：溫度：濕度：風速：海拔：生境類型：植物物候期：植被類型：植被覆蓋度：人為活動干擾類型：人為活動干擾強度：o樣線掃網法樣線1經度：緯度：開始時間：結束時間：樣線2經度：緯度：開始時間：結束時間：樣線3經度：緯度：開始時間：結束時間：樣線4經度：緯度：開始時間：結束時間：樣線5經度：緯度：開始時間：結束時間：o馬來氏網法經度：緯度：樣品數量：o樣方陷阱法經度：緯度：樣品數量：o燈光誘集法經度：緯度：樣品數量：備注：8表A.2水生昆蟲采樣信息記錄表樣點編號：樣點名稱：天氣：溫度：經度：緯度：海拔：樣品數量：采樣人員：采樣日期：生境條件水域特征o入海河口o淺水溪流或河流o溪流源頭o深水河流o其他：水環境狀況o清澈無異味o比較清澈，有少量異味o比較渾濁，有異味，有生活垃圾o很渾濁，有大量的刺激性氣味，生活垃圾較多生境類型o米草灘涂o林地o光灘o灌叢o禾草灘o混合植被o堿蓬灘涂o其他：岸邊植被情況：種類覆蓋度o大于90%的岸邊表面被植被覆蓋，種類多樣o70%~90%的岸邊表面被植被覆蓋，種類簡單o50%~70%的岸邊表面被植被覆蓋，部分裸露o少于50%的岸邊表面被植被覆蓋，裸露率較高采樣區域微生境復雜性o有枯木、巖石、水生植物等3種以上微生境o存在2種微生境o微生境單一底質類別o淤泥o粘土o粗砂o礫石o巖土o其他：人為活動干擾類型人為活動干擾強度物理指標pH值：電導率（?/cm）：濁度：溶解氧（mg/L）：水深（m流速（m/s）：備注：9附錄B（資料性）樣線掃網法觀測數據記錄表表B樣線掃網法觀測數據記錄表觀測地點：樣線編號：樣線長度：天氣：溫度：濕度：風速：起點經緯度：終點經緯度：生境類型：主要植被：起止時間：記錄者：觀測者：學名組數合計123456789備注：（資料性）人為活動干擾情況評估表表C人為活動干擾情況評估表干擾類型干擾強度A開發建設1.公路建設；2.鐵路建設；3.旅游開發；4.礦產資源開發（含采石、挖沙）；5.管線、風電、水電、火電、光伏發電、河道整治等開發建設o強：植被基本消失，生境受到嚴重干擾，動物難以棲息繁衍。o中：植被部分消失，但干擾消失動物棲息繁衍受到一定程度影響。o弱：植被基本保持原樣；生境受到一定干擾，但對動物棲息繁衍影響不大。o無：植被保持原始狀態；生境沒有受到干擾，對動物棲息繁衍無影響。B農牧漁業活動2.填海造地；3.毀草開墾；4.毀林開墾。C環境污染1.水污染；2.大氣污染；3.土壤污染；4.固體廢棄物排放。D其他2.砍伐；3.采集；4.捕撈；5.狩獵；6.割草；7.噴灑農藥；8.施肥；9.耕作；11.道路交通等。附錄D表D沿海灘涂昆蟲指示類群表科Family鞘翅目ColeopteraEndomychidae；螢科Lampyridae雙翅目Diptera蠓科Ceratopogonidae；食蚜蠅科Syrphidae蜉蝣目Ephemeroptera四節蜉科Baetidae；小蜉科Ephemerellidae；蜉蝣科Ephemeridae；扁蜉科Heptageniidae；細裳蜉科Leptophlebiidae；新蜉科Neoephemeridae；短絲蜉科Siphlonuridae；越南蜉科Vietnamellidae膜翅目Hymenoptera繭蜂科Braconidae；方頭泥蜂科Crabronidae；姬蜂科Ichneumonidae；泥蜂科Sphecidae；胡蜂科Vespidae鱗翅目Lepidoptera弄蝶科Hesperiidae；灰蝶科Lycaenidae；蛺蝶科Nymphalidae；鳳蝶科Papilionidae；粉蝶科Pieridae；蜆蝶科Riodinidae；眼蝶科Satyridae蜻蜓目Odonata綜蟌科Synlestidae；麗蟌科Amphipterygidae；幽蟌科Euphaeidae；色蟌科Calopterygidae襀翅目Plecoptera綠襀科Chloroperlidae；卷襀科Leuctridae；叉襀科Nemouridae；扁襀科Peltoperlidae；襀科Perlidae；刺襀科Styloperlidae毛翅目Trichoptera貝石蛾科Beraeidae；短石蛾科Brachycentridae；枝石蛾科Calamoceratidae；畸距石蛾科Dipseudopsidae；舌石蛾科Glossosomatidae；鉤翅石蛾科Helicopsychidae；鱗石蛾科Lepidostomatidae；長角石蛾科Leptoceridae；細翅石蛾科Molanbudae；齒角石蛾科O