不育不孕輔助生育技術克隆技術

發育生物學第六講思考題：幾種試管嬰兒的適應癥2010年諾貝爾生理學或醫學獎授予英國生理學家RobertEdwards

,以表彰他在體外受精技術領域做出的開創性貢獻。不育孕癥的發病率發達國家5%-8%,我國為6-10%女性不孕占60%，男性占40%全世界：約8000萬-1.1億

由于學習、就業壓力，性傳播疾病、環境污染的加重，發病率有上升的趨勢。

女性不孕的原因1、排卵障礙3.子宮因素2.輸卵管不通暢或功能不良

4.子宮頸因素5.子宮內膜異位癥6.不明原因不孕：有10%的不孕夫婦經各種檢查不能發現異常。A）精液異常：精子＜2000萬/毫升，活精率＜50%，畸形精子＞50%。

先天發育異常：如雙側隱睪

全身因素：抽煙，酗酒等

局部因素：睪丸結核，精索靜脈曲張男性不育的原因B）妨礙精子運送：陽痿，早泄C）免疫因素：精漿產生抗精子的抗體不孕不育癥的檢查：

1.有無排卵

2.輸卵管是否通暢

3.B超檢查有無子宮病變、內膜異位癥等

4.男方精液是否正常

輔助生育技術概述輔助生育技術（AssistedReproductionTechnology，ART）：

指人工輔助受精或胚胎體外培養和胚胎移植的生殖方法。觀察胚胎發育過程，揭示生殖奧秘治療不育不孕癥生殖醫學成為21世紀生命科學研究的核心。1978年7月25日世界上第1例試管嬰兒LouiseBrown,20世紀世界醫學史上最偉大的事件之一。輔助生育技術發展史1997年12月美國報道了人克隆胚胎成功，但由于禁止人克隆的呼聲，12天后被銷毀。1998年11月美國獲得5個胚胎干細胞系和人胚胎生殖細胞建系工作。1984年，世界上第一例冰凍胚胎的嬰兒在

英國誕生。1988年北京醫科大學附屬三院誕生首例試管嬰兒，與世界首例相差10年時間(原因：中國的計劃生育國策，國內技術設備落后，住處閉塞等)中國輔助生育技術的發展贈卵試管嬰兒于1992年6月12日首例凍融胚胎移植試管嬰兒于1995年2月6日1996年中山醫科大學單精子卵胞漿內注射技術(第二代試管嬰兒)，解決了男性不育的問題，與先進國家差距僅為4年。首例代孕試管嬰兒于1996年9月8日誕生。我國試管嬰兒臨床妊娠率保持在30%-40%左右，近期出生試管嬰兒達到3萬多個。

全球試管嬰兒超過三百萬人七十對試管嬰兒“回娘家”1.宮腔內丈夫精液人工授精方法:洗滌精液并使制之獲能，在女方排卵期內通過導管注入宮腔.主要適合下列病人：1.中度少精，弱精癥的患者2.精液不液化3.宮頸粘液或精液中有抗體4.不明原因不孕5.陽痿，早泄的病人瀘醫附院順利通過省衛生廳生殖技術校驗檢查四川省衛生廳專家一行對瀘醫附院的“夫精人工授精技術”進行校驗檢查，自2010年開展以來，已成功授孕22例，分娩10例。試管嬰兒三關：人工誘發超排卵和采集卵細胞體外受精、體外培養胚胎移植A人工誘發排卵----超排卵（superovulation）枸櫞克羅米酚（CC）、人絕經期促性腺激素（hMG）、卵泡刺激素（FSH）、生長激素（GH）、促性腺激素釋放激素類似物（GnRHa）。常規用GnRH-a進行調節，當有2個或兩個以上卵泡直徑大于16～18mm時，注射5000～10000IU的hCG，誘發卵細胞成熟及便于卵細胞從卵泡壁脫離。

精液液化進行常規檢查;處理精子,使精子獲能和發生頂體反應;將含精子混懸液與成熟卵細胞培養受精;C體外受精和體外培養在37℃培養中完成受精,30h左可見第一次卵裂為2細胞胚卵；在40h左右二次卵裂成4細胞胚卵；到48h后，胚卵一般處于4～8細胞階段。胚卵發育到16細胞階段約需85h，早期胚囊約需120h。D胚胎移植

移植時間：受精48h后，選擇約8細胞階段或胚泡階段。

移植過程：吸入含有胚胎的移植液，應試者取臥位，在超聲波引導下插入導管于宮腔中，注入胚胎移植液，靜置60s后慢慢拔出導管。術后護理：應試者臥床24h，限制活動3～4天，同時接受黃體酮等孕激素助孕，于10天后進行早期妊娠檢查與診斷。①少精、弱精：精子密度＜20×106ml，活精子＜50%,快速前向移動精子＜25%；②輸卵管堵塞、子宮內膜異位癥等的不孕癥患者；③原因不明的不育癥：夫妻雙方經過檢查均無異常發現。

(3)體外受精-胚胎移植的適應癥3.卵母細胞單精子注射技術（ICSI)---

第二代試管嬰兒適應癥：嚴重的少、弱、畸精子癥（數量約低于2千萬/m1，且活率低于50％，活力II級以下）；不可逆的梗阻性無精子癥；生精功能障礙、阻塞性無精等

（如輸精管梗阻，而睪丸或附睪穿剌活檢有精子）；男性免疫性不育（存在抗精子抗體等，通過單精子注射技術進行洗滌處理）；體外受精--胚胎移植受精失敗；精子無頂體或頂體功能異常。方法：選擇活力好、形態正常的單個精子用顯微注射器將其直接注射到卵細胞內，培養至分裂后，將胚胎移植到子宮腔內使其繼續生長發育成胎兒。卵母細胞單精子顯微注射Intra-cytoplasmicsperminjection(ICSI)4.胚胎植入前遺傳學診斷PGD—

第三代試管嬰兒指將患者的卵子用第一代試管嬰兒(IVF)技術或第二代試管嬰兒技術授精，當胚胎培養到6-8細胞期，取出1-2個細胞進行分析，診斷染色體病或基因病，挑選正常的胚胎移植，可以避免將遺傳病傳給下一代。適應癥為：單基因相關遺傳病、染色體病、性連鎖遺傳病及可能生育異常患兒的高風險人群等。

中山醫科大學已經成功地對胚胎進行活檢并基因診斷Genetictestingperformedpriortoembryotransfer5.冷凍胚胎移植后尚有剩余的胚胎可以冷凍儲存,用于補充治療，但凍融對胚胎是損傷，影響胚胎生命力。6.贈卵試管嬰兒7.卵胞漿置換術----第四代試管嬰兒

由于胚胎中存在第三者的卵漿，人們對其遺傳特征產生質疑，這對社會倫理觀念構成了一定的挑戰。2003年10月1日，衛生部開始實施的《人類輔助生殖技術規范》，對禁止使用技術作了明確規定。第一代“試管嬰兒”主要適合于輸卵管堵塞、子宮內膜異位癥等的不孕癥患者，把精子和卵子放在一起，增加兩者相遇機會。第二代“試管嬰兒”技術是將單個精子直接注射入卵子里，從而“制造”出受精卵、胚胎，它適用于男方少精、弱精、甚至無精的情況第三代“試管嬰兒”技術主要適合于植入前遺傳學診斷，解決遺傳病及優生問題。第四代“試管嬰兒”技術主要適合于年齡大的患者。

第一、二、三、四代試管嬰兒只是適應癥不同，不是一代比一代好

分析：有一位母親是血友病基因的攜帶者，她自己雖然不發病，但是，她的兩個兒子都是血友病患者，接連不幸夭折。這位悲傷的母親來到試管嬰兒中心，要求給她做試管嬰兒。請分析該婦女適合做那種試管嬰兒？

血友病是一種X染色體連鎖隱性遺傳性疾病

“第三代”試管嬰兒超排卵方案二、輔助生育技術的開展的影響因素種植前遺傳學診斷比最初設想的復雜單精子卵胞漿內注射（ICSI）的安全性2012-07-20衛生部批準102家醫療機構可進行輔助生育技術,9家機構設置人類精子庫（cryopreservedsemen,spermbank）

四川省：(4家)

1、四川大學華西第二醫院：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射、供精人工授精技術。

2、成都市錦江區婦幼保健院：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射技術。

3、四川省人民醫院：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射技術。

4、四川生殖學院附屬醫院：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射技術。

重慶市：(2家)1、重慶市婦產科醫院生殖與遺傳研究所：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射、胚胎移植前遺傳學診斷、供精人工授精技術。2、重慶醫科大學附屬第一醫院：體外受精-胚胎移植、卵胞漿內單精子顯微注射技術

二、批準設置人類精子庫的機構(11家)

1、中信湘雅不孕與遺傳專科醫院2、江蘇省人民醫院3、廣東省計劃生育專科醫院4、上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院5、浙江省計劃生育科學技術研究所6、國家人口和計劃生育委員會科學技術研究所7、山東省立醫院8、山西省計劃生育科學研究所附屬醫院9、河南省婦幼保健院(2008年通過)10、湖北省人類精子庫

11、重慶計劃生育科學研究所附屬醫院精子庫(2012-03-09

)精子庫的建立優點甚多：冷凍精子可貯存20年，男子放心作結扎手術；二是有利于優生，選擇健康的精子可使患有遺傳性疾病男子的妻子受孕，杜絕父方的有害遺傳；三是為解決男性不育癥提供了有效的方法；四是為優生學提供了科學依據；五是有利于解決珍稀動物和瀕危動物的種族繁衍。費用促排卵藥物的費用：進口藥和國產藥3000-20000元不等，一般花費在5000-10000元左右.手術及實驗室操作費用,一般大約1萬元左右。總的花費在1萬多至3萬多元不等。

那些人不適合做試管嬰兒

1.女方有重要的臟器功能異常者，如心臟、肝臟、腎臟疾病等而不能經受妊娠及分娩

2.女方體內存在急性或慢性活動性傳染性疾病、急性感染性急病

3.女方有卵巢、子宮或乳腺惡性腫瘤者，不能接受接受胚胎移植著床、生長

影響成功率的因素（1）女方因素：超過35周歲時影響妊娠率;單純因雙側輸卵管梗阻引起的不孕，其成功率較高。（2）男方因素：嚴重的精液異常等，其成功率較低（4）誘發超排卵影響：卵泡的數量、大小及發育速率等均影響其成功率。（5）實驗室環境及操作的影響(白人夫婦生出黑孩子)4、醫學專家呼吁規范輔助生育技術

我國不育的發病率在10％左右，只有1％至2％（1／3）的試管嬰兒不靠試管就可以來到人間。經濟效益的驅動使個別醫療機構盲目擴大試管嬰兒的適應征。美國的一個醫生未經患者許可，用自己的精子為幾十名婦女做了人工受精，結果有了75個自己的孩子，被法院判處他256年監禁。（1）人工受精技術給我們帶來的一系列社會與道德問題。1987年我國第一例因人工受精引起的法律糾紛發人深省。嬰兒相貌與供精者（生物學）父親相似，但與養父（社會學父親）長相全然不同，在巨大的社會輿論下，養父的心理防線崩潰，最終導致家庭的破裂。

5、輔助生育技術使用帶來的問題精源的商業化造成了嚴重的社會問題，不僅給社會和不孕家庭帶來了痛苦和負擔，也違背了人工受精的初衷。從技術上講，目前人類已具備使一個孩子有5位父母的可能：精子的捐贈者、卵子的捐贈者、懷孕母親、撫養孩子的父母社會學問題：誰是人工受精出生孩子的合法父親？社會學父親應負的責任是什么？撫養、繼承權的問題如何通過法律的形式確定？

這些問題不解決，對嬰兒的成長、家庭、社會都是極為不利的。目前自愿供精的人比較少，精源緊張，而且不易控制。若干年后，很可能出現同父異母的孩子相戀、通婚，釀成惡果。（2）代孕母親涉及的倫理問題。代孕母親分娩嬰兒的，能從其中得到報酬，因此這完全是一種商業行為，可能使某些人出于經濟目的，使自己的子宮成為制造嬰兒、換取金錢的工具。同時，這樣就形成了遺傳學父母，生物學父母，社會學父母之間錯綜復雜的關系，容易出現法律上的糾紛。冷凍技術涉及的倫理學問題。冷凍胚胎的命運由誰來決定？冷凍胚胎在法律上是否作為一個人？胚胎冷凍后延遲種植時間過長，是否會引起輩分的改變等。生不了就生個試管嬰兒，這種觀念目前在年輕人中頗有市場，有的年輕人甚至因此“有恃無恐”。可事實上，由于各種原因，不是所有的不孕不育夫婦都可以通過輔助生殖技術獲得孩子的。

試管嬰兒技術的妊娠成功率雖已提高，但基本仍在35%左右。而且，做一次試管嬰兒手術需要幾萬元費用。因此，對一般家庭也是一筆不小的負擔。還有，要做“試管嬰兒”有一定風險。比如，用比較大量的促排卵的藥物，有些人會引起惡心、嘔吐、腹部不適、體重增加、少尿、腎衰等卵巢過度刺激綜合征。而且，取卵、移植手術也有可能引起并發癥。克隆技術克隆(clone)：就是一種人工誘導的無性繁殖方式,被稱為“生物放大技術”。細胞核移植得到的個體都叫做克隆。通常所說的動物克隆指體細胞克隆，即動物的無性繁殖。1、克隆與無性繁殖不同無性繁殖是指不經過雌雄兩性生殖細胞的結合、只由一個生物體產生后代的生殖方式，常見的有孢子生殖、出芽生殖和分裂生殖。由植物的根、莖、葉等經過壓條或嫁接等方式產生新個體也叫無性繁殖。

綿羊、猴子和牛等動物沒有人工操作是不能進行無性繁殖的。科學家把人工遺傳操作動物繁殖的過程叫克隆，這門生物技術叫克隆技術。

2、克隆發展三個時期：微生物克隆，即用一個細菌很快復制出成千上萬個和它一模一樣的細菌，而變成一個細菌群生物技術克隆，比如用遺傳基因――DNA克隆；動物克隆，即由一個細胞克隆成一個動物。3、克隆技術的基本過程:將細胞核移植到去除了細胞核的卵細胞中，用人工的方法將其培養成胚胎，再將胚胎植入雌性動物體內，就可孕育出新的個體。4、克隆羊“多莉”的意義

（1）理論上證明：同植物細胞一樣，分化了的動物細胞核也具有全能性，在分化過程中細胞核中的遺傳物質沒有不可逆變化；

（2）在實踐上證明了：利用體細胞進行動物克隆的技術是可行的，從而為大規模復制動物優良品種和生產轉基因動物及稀有物種的繁殖提供了有效方法。（1）培育優良畜種和生產實驗動物；（2）生產轉基因動物；（3）生產人胚胎干細胞用于細胞和組織替代療法；（4）復制瀕危的動物物種，保存和傳播動物物種資源。5、克隆技術的應用前景在理論上，分化的體細胞克隆對遺傳物質重編（細胞核內所有或大部分基因關閉，細胞重新恢復全能性的過程）的機理還不清楚6、克隆技術存在的問題在實踐中，克隆動物的成功率還很低。維爾穆特研究組在培育“多莉“的實驗中，融合了277枚移植核的卵細胞，僅獲得了“多莉”這一只成活羔羊，成功率只有0.36％，同時進行的胎兒成纖維細胞和胚胎細胞的克隆實驗的成功率也分別只有1.7％和1.1％。1998年4月與威爾士山羊戴維產下邦尼，證明了克隆動物也能生育。2003.2.14日蘇格蘭向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫實施了安樂死。由于早衰問題，人們懷疑“多莉是穿著羔羊服裝的老羊”。生出的部分個體表現出生理或免疫缺限（早衰跡象）

如果克隆人真能存活下來，那么世界上基因多樣性和生物多樣性的原則就會被破壞。這正是生物學界反對克隆人的主要意見，因為克隆出來的基因完全是相同的等位基因，缺乏多樣性，無異于近親繁殖，疾病的發生率會大大提高。

基因和生物的多樣性會被破壞除了以上的理論和技術障礙外，克隆技術（尤其是在人胚胎方面的應用）對倫理道德的沖擊和公眾對此的強烈反應也限制了克隆技術的應用。

人被克隆：是技術勝利還是人性悲哀？布瓦瑟利耶宣稱的首名克隆嬰兒“夏娃”據稱現在已經隨父母出院回家。但關于對其克隆身份進行鑒定一事則一拖再拖。早先布瓦瑟利耶曾以夏娃的父母不同意為由表示相關基因測試要遲些進行。但3日有媒體報道說，布瓦瑟利耶所屬的雷爾教派創始人雷爾已經拒絕對夏娃進行基因測試。第二名克隆嬰兒在荷蘭誕生

塞繆爾?伍德成為世界上第一個克隆自己的人

克隆人距離我們到底還有多遠？意大利狂人醫生-安蒂諾里---

一心想當“克隆人之父”外號“狂人”