《實驗瑤山樹鼩第1部分：飼養管理》（征求意見稿）編制說明工作簡況（一）任務來源與項目編號為規范和統一實驗瑤山樹鼩飼養管理的具體操作，建立實驗瑤山樹鼩飼養管理技術規范，結合目前尚無實驗瑤山樹鼩飼養管理國家標準及地方標準，有必要制定實驗瑤山樹鼩飼養管理地方標準。本標準承蒙廣西科研條件建設與開發利用研究課題《廣西瑤山亞種樹鼩資源實驗動物化研究與開發基地》（編號：廣西科技基礎條件平臺建設14-91-03）；《廣西瑤山亞種樹鼩近交系培育和實驗動物化的研究》（編號:桂科攻1347003-6）資金支持。（二）主要起草單位本標準由廣西中醫藥大學負責起草完成。（三）主要起草人員名單主要起草人員名單如下：研制人員姓名職務/職稱專業所在單位項目負責人冷靜教授免疫學廣西中醫藥大學主要參加人員黃正團高級實驗師動物學廣西中醫藥大學唐海波副研究員預防獸醫學廣西中醫藥大學運晨霞教授免疫學廣西中醫藥大學肖健教授免疫學廣西中醫藥大學梁亮工程師微生物學廣西中醫藥大學張麗峰副教授免疫學廣西中醫藥大學楊慶利研究員免疫學廣西中醫藥大學二、編制標準意義面對發達國家巨大的資源優勢，實驗動物資源的缺乏和多樣性的不足，已成為制約我國生命科學研究與應用的瓶頸之一。導致許多生命科學研究與應用因無理想的實驗動物無法進行，只有加強資源開發的力度，才能為我國生命科學的發展提供長期的技術支撐。醫學試驗研究必須建立在科學的動物實驗基礎上，實驗動物種類的選擇必須符合與人體相似的基本原則，非人靈長類動物在遺傳進化、免疫、生理和代謝等諸多方面與人類高度近似，理論上更加適合醫學研究。但隨著自然環境的破壞和進一步惡化，可用于醫學研究的非人靈長類動物如猴、大猩猩、黑猩猩、狒狒等的品種和數量越來越少，有的已瀕臨滅絕，且價格較高。因而極大地限制了靈長類動物的使用，為此，非靈長類動物資源的開發與利用已漸漸被提上議事日程而具有了潛在的價值。近年來研究者逐漸將注意力轉向樹鼩。從解剖學分析，樹鼩的免疫系統、內分泌系統和神經系統的組織形態特征與靈長類高度相似。中國樹鼩全基因組測序已完成，通過與多個物種基因組比較分析進一步證實了樹鼩與靈長類親緣關系最為接近。樹鼩與人類在生理機能、生化代謝和基因組等方面的相似性遠高于大鼠、小鼠、土撥鼠等常用嚙齒類實驗動物。樹鼩的許多分子和細胞結構近似人類，同時樹鼩具有個體小，易于操作，性成熟時間比較短，飼養方法簡單且繁殖較快，價格相對便宜等優點。此外樹鼩已被證實可感染多種人類相關病毒，包括EB病毒、乙肝病毒及丙型肝炎病毒等。因此樹鼩有望代替靈長類動物作為某些人類重大疾病研究的動物模型，具有廣泛的應用前景。瑤山亞種樹鼩是廣西的一個特色物種資源，利用我區特色資源-瑤山亞種樹鼩為基礎，以解決實驗瑤山樹鼩資源培育及種質資源保存問題為核心，研究瑤山亞種資源實驗動物化培育及種質資源保存的基礎理論與方法，實現從廣西野生瑤山亞種樹鼩資源到實驗樹鼩資源轉變；以實驗樹鼩資源的應用和共享為目標，繁殖生產提供質量合格的實驗樹鼩，建立一整套實驗瑤山樹鼩的標準和基礎（理論）數據，實現基礎理論上有突破、關鍵技術上有創新，為我區在實驗樹鼩及相關領域的研究成果進入國內、國際領先行列提供良好的基礎，制定本標準十分必要。也將為廣西特色資源動物的醫藥應用開發奠定基礎，為地方社會經濟發展提供動力。三、標準編制及研究起草過程（一）標準前期工作2013年以來課題先后承擔相關課題：廣西科研條件建設與開發利用研究課題《廣西瑤山亞種樹鼩資源實驗動物化研究與開發基地》（編號：廣西科技基礎條件平臺建設14-91-03）；《廣西瑤山亞種樹鼩近交系培育和實驗動物化的研究》（編號:桂科攻1347003-6）。課題開展了廣西瑤山亞種樹鼩實驗動物化培育及種質資源基地基礎建設：建立規范化實驗樹鼩飼養繁殖設施、設備，研究實驗瑤山亞種樹鼩實驗動物化和資源保存技術和方法，建立資源基地。（二）標準研究過程廣西瑤山亞種樹鼩資源實驗動物化研究與開發基地立項建設以來，課題組收集整理本基地及國內外已有實驗樹鼩質量標準、技術規程和相關技術資料。研究分析國內外各類標準制定的背景、指導原則、動物等級劃分和質量控制參數設置的依據，研究分析我國發布執行的地方標準與現行實驗動物國家標準架構上的異同點，分析比較國內國外標準和相關規程對實驗樹鼩質量控制要求的異同點。收集整理我們基地及我國實驗樹鼩已有研究成果，到實驗樹鼩其它的生產機構和一些省市相關實驗機構（如云南的中國醫學科學院生物醫學研究所、中國科學院昆明動物研究所）等進行實地調研，開展廣西瑤山亞種樹鼩飼養管理、微生物學、寄生蟲學、遺傳學、病理學、配合飼料和環境條件等方面的各項指標和參數的標準化研究，為標準制定提供數據。以實驗瑤山亞種樹鼩的標準化為目的，綜合大量基礎數據并結合實際操作中質量控制方面存在的不足和近年來實驗動物國家標準在執行過程中暴露出的問題，提出實驗瑤山亞種樹鼩標準制定思路和基本原則以及相關指標和參數的設置范疇。本課題通過收集、整理和研究，補充了影響實驗樹鼩質量的各種基礎數據的工作基礎上，確定了制定標準的指導思想和基本原則。編制小組對取得的數據進行全面整理，根據試驗結果，確定了實驗瑤山樹鼩的術語和定義、實驗瑤山樹鼩的馴化、飼養、繁殖的方法及注意事項，并在編制過程中咨詢了內行專家，對收到的反饋意見進行分析、采納、修改，形成了本標準的工作組討論稿。提出了尚無國家標準的實驗瑤山亞種樹鼩地方標準研究稿。總結公開發表了論文10多篇，培養碩士研究生3名。工作組討論稿形成后，課題組積極向廣西壯族自治區市場監督管理局申請并獲得了標準修訂立項。立項后，課題組對標準編制小組進行了詳細的任務分工，積極推進標準的修訂。2020年12月-2021年2月，完成標準征求意見稿，并請標準協會專家進行格式審查，課題組對標準格式及編制說明存在的問題進行統一修改后，向自治區市場監管局請示網上公開征求意見。2021年2月-2021年3月，課題組初列標準征求意見專家名單，廣泛討論，兼顧專家所在單位的范圍，包含醫療機構、管理機構、行業協會、企業等不同領域的專家。最后形成征求意見專家名單，并報自治區市場監管局請示審核。意見征集情況及修改說明尚未開始。標準審訂情況尚未開始。六、標準編寫原則及確定標準內容的論據（一）標準編寫原則1.遵循《中華人民共和國標準化法》等法規和標準。2.本標準的格式和編寫方法執行GB/T1.1-2009的規定。3.本標準的制定力求準確、系統，內容與當前云南省滇西樹鼩的飼養管理地方標準緊密結合，同時根據瑤山樹鼩實際差異，對飼養管理中存在的問題進行修訂與改善，重視實際可操作性。（二）標準編寫依據1.制定本標準的目的是規范和統一實驗瑤山樹鼩飼養管理的具體操作，建立廣西瑤山亞種樹鼩資源基地。2.本標準的編寫以實驗瑤山樹鼩飼養管理的高效性、安全性生產高質量的實驗瑤山樹鼩為基本依據。七、標準主要技術內容確定依據(一)范圍本標準列出了實驗瑤山樹鼩飼養管理的術語和定義，規范了實驗瑤山樹鼩的馴化、飼養、繁殖的具體方法，注意事項。（二）規范性引用文件GB5749-2006生活飲用水衛生標準GB8978-2006污水綜合排放標準GB14924.1-2001實驗動物配合飼料通用質量標準GB14925-2010實驗動物環境及設施GB50447-2008實驗動物設施建筑技術規范（三）主要技術內容及其說明1.野生瑤山亞種樹鼩來源：野生瑤山亞種樹鼩來源于產地-廣西金秀大瑤山。瑤山亞種樹鼩生活習性：瑤山亞種樹鼩的外形非常像松鼠，善于攀緣樹木，行動很敏捷。多活動于山地、平原谷地的森林或林緣灌木林地區，也可見于村寨附近的灌叢。樹鼩食性雜，以昆蟲為主食，其次是小型哺乳動物和甜果。清晨和傍晚是樹鼩覓食的高潮期，進食時，它們都會用前面的雙爪子抓住食物啃食，同時發出清脆、快速的嗒吱聲，進食后常常舔舐雙爪，表現出類似“洗臉”和“洗手”的動作。樹鼩體內的分泌的尿液、唾液含有的氣味在領土行為上發揮著重要的作用，雄樹鼩的體液物質以及領土行為是由雄激素所產生控制的。縮小生活空間、增加同性別個體數量可使樹鼩應激性增強而發生角斗，導致使其體重下降，雄性樹鼩會出現性行為減退，血象、骨髓象各類細胞均升高。樹鼩易受驚，對環境非常敏感的動物，外界環境發生刺激，樹鼩即刻處于高度緊張狀態。如果這種緊張狀態延續時，樹鼩體重會減輕，臭腺發育不正常，雄性個體的睪丸會縮小，睪丸位置也會發生改變，甚至因衰竭而死亡。處于妊娠階段的雌性樹鼩如果受到過度驚嚇，會引起流產、早產、難產。如果哺乳階段的雌性樹鼩受到驚嚇，則極有可能造成乳腺分泌上的障礙，或拒絕哺乳，甚至因臭腺功能的喪失而咬食仔樹鼩。野生瑤山亞種樹鼩實驗室馴化飼養籠：不銹鋼樹鼩籠（380*260*300mm），每籠后面帶PVC休息箱（200*100*140mm），四層沖洗式（4*5套籠）。實驗室飼養環境：普通開放環境動物房，裝有空調和排風扇，房間備用除濕機。控制環境條件：成年瑤山樹鼩飼養室內溫度控制在15～25℃，室內濕度控制在45～70%。天晴時可將窗口打開但必須確保紗窗關閉；若陰天則采用風機進行間斷性通風；晚上關閉。每天150w日光燈人工光照12h（7:30～19:30）。室內禁止任何人為的響動，開關門必須最大限度的減少噪音。飼養員在室內手機調為振動并且禁止接聽和撥打。注意觀察記錄樹鼩飼養房內的溫度、濕度、通風情況、氨濃度變化及飼養密度等。馴化飼養4.1個人防護：野生瑤山樹鼩的病原微生物不確定性，為了飼養人員的安全，因此飼養員必須做好個人防護。進入工作區前必須穿戴好自己的防護裝備，其包括工作服、頭套、口罩、一次性薄膜手套以及深筒水靴。4.2飼養馴化過程：新野生瑤山樹鼩主要是蘋果等果蔬為主，新野生瑤山樹鼩剛回來的第一周主要喂蘋果、梨、蘿卜、西瓜、黃瓜等果蔬，在飼料盒中添加幾克飼料，第二周開始逐步增加飼料的量（大概每天每只10g左右），第三、第四周也一樣逐步增加飼料的量，第五周過渡到飼料為主、果蔬為輔的日常飼養。飼養馴化過程中特別注意環境安靜，同時密切觀察野生瑤山樹鼩的狀態和吃食狀況，有特殊的情況要及時調整飼養馴化進度。4.3日常飼養管理瑤山樹鼩日常飼養：樹鼩基礎日糧是自由采食購自中國醫學科學院醫學生物研究所的配合飼料及蘋果、梨、蘿卜、西瓜、黃瓜等果蔬；飼喂時間早上8:00～10:00，喂日常飼料（25g/只）；下午14:30～15:00蘋果等果蔬（40g/只），15:00～15:30日常飼料（15g/只）。飼喂的量應充分滿足每只瑤山樹鼩正常的新陳代謝，切忌浪費，增加不必要的成本。定時定量給與樹鼩食物，盡量降低樹鼩因飼喂時間和量不同所造成的應激，以保障樹鼩正常的生長、發育、繁殖。按需供給純凈水，每天按時更換。4.4日常衛生管理盛料槽必須保證清潔衛生無污染而且用優氯凈液浸泡清洗（2~3次/周）。蘋果用高錳酸鉀液或優氯凈液浸泡10分鐘后清洗干凈，切塊飼喂。每次喂飼料前將剩余飼料倒出，加入新料（同時做食欲記錄）；蘋果飼喂后若有剩余須撿出。每天早上清掃糞便完成后飼喂；至少每周（最好每天）對地面進行噴霧消毒一次；每月對飼養房進行徹底消毒一次。4.5樹鼩飼養籠的清洗消毒飼養人員每個月逐一對飼養籠至少進行1次徹底的清洗消毒，在整個過程中飼養人員必須穿戴好工作服、帽子、口罩、橡膠手套、深筒水靴以及防水衣。將瑤山樹鼩轉移至清洗消毒好的飼養籠。工作人員相互配合將飼養籠取下并轉移至清洗消毒室。對飼養籠進行無死角的清洗。清洗完畢后將飼養籠放入消毒池浸泡30分鐘以上。消毒液的配制：84消毒液按2%濃度配比后浸泡飼養籠，過氧乙酸液0.5%濃度配比后浸泡飼養籠。飼養籠浸泡后再次用清水徹底清洗。最后將飼養籠放至儲存間備用。飼養架于房間內用抹布擦洗干凈后用三氯異氰尿酸按1:1000～1:2000的濃度進行噴霧消毒。4.6篩選基礎種群瑤山亞種種樹鼩選擇體況好無傷殘，被毛光亮，母樹鼩乳頭大且均勻，公樹鼩睪丸明顯，另外還要注意不選擇有下列情況的樹鼩作為種用：被毛臟亂、無光澤或脫毛的樹鼩；雌樹鼩體況過于消瘦或肥胖，體重偏離正常范圍（160g~210g）的母樹鼩；骨盆腔狹窄的母樹鼩；雄樹鼩陰莖過短或隱睪的公樹鼩。4.7結果與分析4.7.1野生瑤山亞種樹鼩實驗室飼養的成活情況2014~2016年期間，我們在廣西金秀大瑤山捕獲野生瑤山亞種樹鼩152只，有6只是因為捕捉或者運輸圖中受傷，到實驗很快死亡。剩余的146只經過一個多月的馴化飼養，野生瑤山亞種樹鼩成活有135只：其中雄性67只、雌性68只。野生瑤山亞種樹鼩成活率達到96%，經過馴化飼養后的野生瑤山亞種樹鼩體重穩妥，基本極少出現死亡。說明相對于野外，實驗室飼養提供的食物、環境能滿足瑤山亞種樹鼩的需求。經過4個月實驗室飼養馴化，野生樹鼩逐漸適應實驗室喂食及飼養條件，整體體重基本趨于平穩。4.7.2瑤山亞種種樹鼩基礎種群的篩選瑤山亞種種樹鼩基礎種群的篩選是以建立瑤山亞種種樹鼩封閉群為建群目標，2016年我們從野生馴化樹鼩篩選出瑤山亞種種樹鼩封閉群基礎種群數量為152只，2017年3月抽樣檢測用了6只，2018年飼養過程中出現過疾病死亡11只，2019新引入61只，目前種群規模為196只（雄性90只、雌性106只），符合封閉群數量不能小于25對的要求；基礎種群足夠大可以有效地保持野生瑤山亞種樹鼩遺傳的多樣性，能保存各種有價值或潛在有價值的基因，但成本投入巨大;基礎種群者過小成本投入較小，但不排除有生物醫學價值的性狀隨著基因的純和而被剔除。因此，基礎種群的大小應綜合各種因素，建立最佳方案。5實驗瑤山亞種樹鼩的繁殖生長的研究5.1繁殖籠：8個不銹鋼樹鼩籠(400*550*600mm),每籠右側帶有一個PVC材質的休息箱（250*250*180mm），對待產的母樹鼩，在其巢箱內放入高壓滅菌過的稻草，供其做窩產仔及保溫。5.2配種根據籠子大小我們的瑤山樹鼩采用1：1的雌雄比例交配繁殖。選種好瑤山樹鼩，把公樹鼩和母樹鼩從飼養籠一起移到繁殖籠中，母樹鼩懷孕后繁殖籠中待產，移走公樹鼩；2-6月份期間若是配對合籠一個月后不懷孕則拿出公母樹鼩單獨飼養，清理消毒繁殖籠1周后從新挑選公樹鼩和母樹鼩進行配對籠，其余月份期間則是配對合籠兩個月后不懷孕從新配種合籠。剛開始配種合籠時要密切觀察有無異常表現，若有異常，則應及時采取妥善處理措施。選配不當者及時調配，對咬傷情況早發現、早治療，平時并向獸醫報告。5.3懷孕檢查雌雄瑤山樹鼩合籠后，每周按時稱重，若體重連續兩周增加10g以上，腹部觸診可觸及腹部膨隆，初步判斷為母樹鼩懷孕。體重連續增加的母樹鼩，用手觸摸檢查2-3次以確定母樹鼩懷孕妊娠，檢查發現出母樹鼩懷孕后雌雄分籠，留母樹鼩在繁殖籠中待產。5.4種樹鼩的飼養管理在樹鼩日常飼養管理的基礎上，配種合籠、妊娠期和哺乳期樹鼩飼喂的基礎飼料、蘋果等果蔬要根據個體差異酌情增加飼喂量。下午16:30～17:30增加飼喂面包蟲5-10g/天。做好分娩前準備，樹鼩懷孕期45d～50d，分娩前10天左右應將棉布或稻草放入暗盒。5.5仔樹鼩的哺乳與管理仔樹鼩的哺乳：仔樹鼩一般情況下由母樹鼩母乳哺乳幼產，每天早晚2次觀察幼仔情況，若發現幼仔爬出巢箱，及時將其放回，以防餓死或凍死；若發現有母樹鼩咬死幼仔，則將被咬死的幼仔及時取出，并立即用清水洗消巢箱，注意動作輕柔，避免驚擾母樹鼩及其他幼仔；若母樹鼩母性不好，連續咬食幼仔，或不哺育幼仔，則取出幼仔行母樹鼩被動哺乳，并配合喂食配方奶。仔樹鼩環境條件的管理：保證樹鼩幼仔成活的關鍵因素之一就是要全年保持飼養室溫度在24～27℃，同時應注意夜間保溫；重視飼養室的環境衛生，每天定時清潔、消毒籠具，按時更換、洗消喂食槽及飲水瓶；每天定時進入飼養室喂養、觀察，減少工作人員的驚擾，保持飼養室內安靜。5.6離乳及繁殖觀察記錄一般出生40～45天可以離乳，個別的可以延長到50天。離乳后離乳當天母仔分籠，可將母樹鼩返回原籠；同一窩仔樹鼩放在同一個籠中飼養。5～10天后再將同一籠中的仔樹鼩分籠并編號，進行單籠單只飼養。給所有樹鼩統一編號，記錄雌樹鼩的配種合籠日期、生產日期、每胎產仔數、哺育情況及時間、離乳成活數、后代雌雄數量及比例等，同時注意觀察其飲食情況、母性好壞等，篩選出適合繁育的種樹鼩，注意在觀察時動作輕柔、安靜，避免驚擾樹鼩。5.7結果與分析5.7.1懷孕妊娠后母樹鼩體重和飲食的變化懷孕妊娠后母樹鼩體重的變化：統計分析了12窩懷孕妊娠母樹鼩，體重最多增加65.8g，最低25.9g，平均49.25g。懷孕妊娠前二周，體重變化不大，從懷孕妊娠第三周起，樹鼩體重呈現明顯增加趨勢，到生產前兩周，體重增加更為顯著，產前一周避免驚擾樹鼩而影響其分娩不稱重。至分娩前最后一次稱重，最重的215.3g，最輕的168.65g，平均189.68g。懷孕妊娠后母樹鼩飲食的變化：懷孕的前兩周，孕期母樹鼩食量變化不大，從第三周開始，孕期母樹鼩食量逐漸增加，產前母樹鼩食量下降。5.7.2受孕和生產情況經過挑選種樹鼩，我們的瑤山種樹鼩配對合籠共53次，母樹鼩受孕13次，母樹鼩配種受孕率24.53%，中途流產1只，未見死胎，順利分娩12胎，本試驗期總共產仔42只，每只雌樹鼩受孕1～3次，每窩產仔3~5只，平均3.5只。樹鼩懷孕期為39~63d，平均46.5d，分娩時間不固定。出生存活率92.86%，離乳存活率合計18只（42.86%，其中雄性8只、雌性10只）。結果表明瑤山亞種樹鼩全年都可以配種繁殖，沒有明顯的季節影響，但是以4～6月繁殖最為集中，一年可以繁殖三胎。5.7.3哺乳期觀察結果：幼仔初生體重為（12.4±1.6）g，剛出生的小樹鼩全身無毛，閉眼，皮膚呈粉紅色半透明狀，可見大部分內臟器官，只會蠕動；第5～6天皮膚變黑，有皺紋；第8～13天長出黃褐色絨毛；第22～25天睜眼；第27～30天爬到巢箱外找尋食物；第35～40天可離開母親獨立生活，此時可斷奶，分籠獨自生活，幼仔離乳時最重的82.6g，最輕的51g，平均體重為68.67g。綜合以上研究，本項目解決了瑤山亞種樹鼩馴養繁殖問題，篩選建立了瑤山亞種樹鼩實驗動物研究種群基地，初步解決了瑤山亞種樹鼩的質量控制和疾病防治，實現實驗樹鼩規范化繁殖生產控制管理，可以提供健康標準的實驗樹鼩及實驗室，滿足廣西實驗瑤山亞種樹鼩資源發展及應用實驗的需求，促進廣西實驗動物科研基礎條件提升及創新能力和核心競爭力。也為瑤山亞種樹鼩資源保存和應用提高有力的保證。八、與現行法律、法規及標準關系本標準（征求意見稿）制定是依據《中華人民共和國標