第四章藥物的含量測定方法與驗證2025/1/191醫學ppt定量分析方法的分類與特點

1樣品分析的前處理方法2藥品質量標準分析方法驗證32025/1/192醫學ppt第一節

定量分析方法的分類與特點

一、容量分析法二、光譜分析法三、色譜分析法2025/1/193醫學ppt一、容量分析法(一)特點與適用范圍(1)方法簡便易行(2)方法耐用性高(3)測定結果準確(4)方法專屬性差適用于原料藥含量測定(二)有關計算:1.滴定度與滴定度計算2.含量計算

(1)直接滴定法

(2)間接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法

將已知濃度滴定液滴加至被測藥物溶液中,至滴定終點,根據滴定液的濃度,體積和滴定度,計算含量.2025/1/194醫學ppt結果計算1、滴定度的計算aA+bB=cC+dD;cC+eE=fF+gG;

滴定反應fF+hH=iI+lLaAhH

m:滴定劑摩爾濃度；M被測物摩爾質量；a/h:反應摩爾比2025/1/195醫學ppt2.含量測定直接滴定法

生成物滴定法剩余量滴定法(1)(2)(3)2025/1/196醫學ppt(1)直接滴定法注意掌握滴定反應的原理,藥物與滴定劑在反應中的摩爾比正確計算滴定度和百分含量2025/1/197醫學ppt(2)生成物滴定法注意摩爾比的替換藥物與A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量計算方法與直接滴定法相同2025/1/198醫學ppt（3）回滴定（剩余滴定）（a）不做空白試驗時百分含量計算（b）做空白試驗時百分含量計算

2025/1/199醫學ppt

司可巴比妥鈉含量測定:本品約0.1g,加水10ml溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加鹽酸5ml,放置15分鐘,加碘化鉀試液10ml,用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定,滴定的結果用空白試驗校正W=0.1022g;硫代硫酸鈉滴定液F=1.038;供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白23.21ml2025/1/1910醫學ppt滴定度司可巴比妥鈉M=260.27,與溴摩爾比為1:12025/1/1911醫學ppt二、光譜分析法定義分類

UV-Vis利用物質的光譜進行定性、定量和結構分析的方法——光譜分析法

IR

AA

FluorFP(flamephotometry)2025/1/1912醫學ppt三、色譜分析法特點與應用分類

依據分離原理：(1)高靈敏度:ng-μg/ml(2)高專屬性:選擇性檢測(3)高效能與高速度吸附;分配;離子交換;分子排阻色譜法

復方制劑含量測定的首選方法依據分離方式：紙色譜;薄層色譜;柱色譜;氣相色譜;高效液相色譜法

2025/1/1913醫學ppt第二節樣品分析的前處理方法一、不經有機破壞的前處理方法二、經有機破壞的前處理方法(一)水解法;(二)還原法(一)干法破壞;(二)濕法破壞2025/1/1914醫學ppt

進行藥物定量分析之前，一般都需要對樣品進行前處理。根據待測元素在藥物分子中結合的牢固程度，前處理方法各異。在分析含金屬或含鹵素、氮、硫、磷等元素的有機藥物前，需進行適當的樣品前處理。2025/1/1915醫學ppt含鹵素有機藥物系指藥物分子結構中所含鹵素直接與芳環或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽。2025/1/1916醫學ppt一、不經有機破壞的方法

1.酸水解法水難溶性含金屬有機藥物與礦酸(鹽酸)共熱:

回流有機結合的待測元素原子離解,轉化為無機鹽(離子)2.堿水解法含鹵素有機藥物(脂肪碳鏈)與氫氧化鈉溶液回流:適用于:結合不牢固的含金屬或含鹵素有機藥物(一)水解法2025/1/1917醫學ppt碘他拉酸測定:氫氧化鈉試液與鋅粉回流后,用硝酸銀滴定回流堿性溶液中加鋅粉回流,使碳-碘鍵還原轉化為無機碘化物碘番酸膽影酸膽影葡胺注射液泛影酸泛影酸鈉泛影葡胺注射液

適用于:結合牢固的含碘有機藥物

(直接與芳環連接)

(二)還原法2025/1/1918醫學ppt常見的含鹵素有機藥物三氯叔丁醇六氯對二甲苯2025/1/1919醫學ppt泛影酸2025/1/1920醫學ppt膽影酸2025/1/1921醫學ppt碘他拉酸2025/1/1922醫學ppt碘番酸2025/1/1923醫學pptI碘苯酯鹽酸胺碘酮2025/1/1924醫學ppt諾氟沙星2025/1/1925醫學ppt醋酸氟輕松2025/1/1926醫學ppt磺溴酞鈉2025/1/1927醫學ppt含鹵素有機藥物的分析直接回流后測定法堿性或酸性還原后測定法氧瓶燃燒分解后測定法2025/1/1928醫學ppt

有機金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結合比較牢固如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利2025/1/1929醫學ppt酒石酸銻鉀2025/1/1930醫學ppt硬脂酸鎂富馬酸亞鐵2025/1/1931醫學ppt葡萄糖酸銻鈉2025/1/1932醫學ppt卡巴胂醋酸苯汞2025/1/1933醫學ppt汞撒利2025/1/1934醫學ppt二、經有機破壞的方法(一)濕法破壞

適用于含氮有機藥物分析的前處理

硫酸作為分解劑,氧化劑(硝酸,高氯酸)輔助分解劑

凱氏定氮法

(二)干法破壞高溫熾灼法用于含鹵素藥物的鑒別無水碳酸鈉,硝酸鎂,氫氧化鈣,氧化鋅等輔助灰化

2.氧瓶燃燒法適用于:含金屬,鹵素,氮,硫,磷等有機藥物

(待測原子與碳原子結合牢固者)2025/1/1935醫學ppt1.高溫熾灼法高溫灼燒灰化用于含鹵素藥物的鑒別2.氧瓶燃燒法2025/1/1936醫學ppt

（1）

氧瓶燃燒法原理

氧瓶燃燒法：將有機藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進行燃燒，并將燃燒所產生的欲測物質吸收于適當的吸收液中，然后根據欲測物質的性質，采用適宜的分析方法進行鑒別、檢查或含量測定。2025/1/1937醫學ppt適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機藥物的分析。本法特點是簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析。2025/1/1938醫學ppt（2）儀器與材料①儀器裝置

燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網狀2025/1/1939醫學ppt②稱樣用材料及稱樣A.固體樣品無灰濾紙B.液體樣品紙袋C.軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹2025/1/1940醫學ppt③氧氣④吸收液A.作用：吸收液的作用是將樣品經燃燒分解所產生的各種價態的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉變為一定的便于測定的價態2025/1/1941醫學pptB.吸收液的選擇氟水氯

NaOH溶液溴

H2O2-NaOHNaOH-硫酸肼飽和溶液碘

NaOH－硫酸肼飽和溶液硫

NaOH或H2O2

硒硝酸溶液2025/1/1942醫學ppt（3）操作方法①燃燒瓶燃燒前的準備用洗液洗凈后，按各藥品項下的規定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。②樣品的準備取樣品適量，精密稱定后按規定方法包裹，固定于鉑絲下端的網內或螺旋處。2025/1/1943醫學ppt③樣品的燃燒點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，待燃燒完畢（應無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然后按各藥品項下規定的方法進行鑒別、檢查或含量測定。2025/1/1944醫學ppt①根據被燃燒分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。ChP（2005）規定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析注意事項：2025/1/1945醫學ppt待分解樣品量燃燒瓶的體積

3~5mg（微量分析）

150~250ml

20~30mg（半微量分析）

300~500ml

50~60mg

1000ml

0.6~0.7g或更多

2000ml或特殊結構的燃燒瓶2025/1/1946醫學ppt

正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。2025/1/1947醫學ppt②測定含氟有機藥物時，用石英制燃燒瓶③鉑絲燃燒時起催化作用④應同時做空白試驗⑤燃燒時要注意防爆⑥燃燒要完全⑦燃燒產生的煙霧完全被吸收2025/1/1948醫學ppt應用例磺溴酞鈉的含量測定ChP(2005)2025/1/1949醫學ppt燃燒分解O2HBr+S2-+SO4+…

HBr+S2-NaBr+Na2SO4

+H2O

NaOH,H2O22025/1/1950醫學ppt含金屬的有機藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機酸及酚的金屬鹽或配位化合物如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵2025/1/1951醫學ppt需驗證的項目驗證的內容準確度定量限防腐劑溶出度,釋放度鑒別試驗雜質檢查含量測定第三節藥品質量標準分析方法驗證

精密度專屬性檢測限線性范圍耐用性重復性中間精密度重現性2025/1/1952醫學ppt一、準確度（accuracy）：測量值與真實值接近的程度表示:回收率測定方法：回收試驗加樣回收試驗2025/1/1953醫學ppt（一）含量測定方法的準確度1、原料藥回收試驗：

空白+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M2025/1/1954醫學ppt加樣回收試驗：已準確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M。2025/1/1955醫學ppt

原料藥

（1）可用已知純度的對照品或樣品進行測定（2）用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。2025/1/1956醫學ppt

2、制劑（1）用含己知量被測物的各組分混合物進行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。（2）如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定。（3）另一個已建立準確度的方法比較結果。2025/1/1957醫學ppt2025/1/1958醫學ppt

中藥

分析的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在95～105%范圍內，有些方法操作步驟繁多時，可要求在90～110%范圍內。RSD一般在3%以內。2025/1/1959醫學ppt（二）雜質定量測定的準確度（1）可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。（2）如果不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較。2025/1/1960醫學ppt（三）數據要求規定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。2025/1/1961醫學ppt二、精密度1.重復性同一分析人員連續測定所得結果的精密度;也稱批內精密度或日內精密度2.中間精密度不同時間不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度批/日間精密度

3.重現性在不同實驗室不同人員測定結果之間的精密度

法定標準采用的分析方法進行

同一均勻供試品多次取樣測定所得結果之間的接近程度標準偏差(s,SD);相對標準偏差(RSD)數據要求同“準確度”定義2025/1/1962醫學ppt偏差（d）：測量值與平均值之差標準（偏）差（SD或S）:2025/1/1963醫學ppt三、專屬性（specificity）:指有其他成分（雜質、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性)。2025/1/1964醫學ppt(一)鑒別反應空白,結構相似物或有關物質呈負反應(二)含量與雜質測定含雜質或降解產物的試樣中各峰能獲得分離在其他成分(雜質,降解產物,輔料等)可能存在下,方法能正確測定出被測物的特性鑒別,雜質檢查和含量測定方法

定義與應用2025/1/1965醫學ppt四、檢測限（limitofdetection，LOD）：藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)

測定:信噪比法(S:N=3:1)2025/1/1966醫學ppt適用于可用目視法直接評價結果的分析方法,非儀器分析法鑒別的顯色法;雜質檢查的TLC適用于能直觀顯示信號與基線噪聲水平的分析方法,如HPLC法

信噪比S/N=3(2)時的相應濃度或量適用于不能直觀比較信噪比的儀器分析方法,如UV-Vis法

常用方法

1.目視法

2.信噪比法

3.標準偏差法

2025/1/1967醫學ppt五、定量限雜質和降解產物用定量方法研究時,應確定LOQLOQ的測定方法與LOD相同相應的系數(倍數)不同,如信噪比S/N=10定量限(limitofquantitation,LOQ

)是指試樣中被測物能被定量測定的最低量;2025/1/1968醫學ppt六、線性范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區間在試驗研究開始前確定驗證的范圍和方法在范圍內應能達到一定精密度,準確度和線性線性系指在設計的“范圍”內,響應值(y)與被測物濃度(x)直接呈正比關系的程度y=ax+b系列(n≥5)供試樣品測定,以響應信號作為被測物濃度的函數作圖用最小二乘法進行線性回歸;或經數學轉換后再進行線性回歸2025/1/1969醫學ppt七、范圍原料藥/制劑含量測定:80%~120%制劑含量均勻度檢查:70%~130%溶出度或釋放度檢查:下限-20%~上限+20%特殊元素含量測定:下限-20%~上限+20%雜質測定: 限度±20%

涉及定量測定的項目均需對范圍進行驗證 如:含量測定,含量均勻度,溶出度或釋放度,特殊元素或特殊雜質的定量檢查2025/1/1970醫學ppt八、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時,測定結果不受影響的承受程度;體現測定條件的允許變動范圍HPLC法典型因素有:流動相的組成和pH值及流速,不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱,柱溫等GC法典型因素有:不同廠牌或批號的色譜柱,固定相,不同類型的擔體,柱溫,進樣口和檢測器溫度等2025/1/1971醫學ppt九、驗證內容的選擇驗證內容選擇的一般原則:非定量分析方法

如鑒別,雜質的限度檢查法:

驗證“專屬性”,“檢測限”和“耐用性”定量分析方法

如原料藥或制劑的含量測定及含量均勻度,溶出度或釋放度的測定方法:

除“檢測限”和“定量限”外,其余均驗證微量定量分析方法

如雜質的定量測定方法:

除“檢測限”視情況而定外,其余均驗證2025/1/1972醫學ppt檢驗項目和驗證內容：項目內容鑒別雜質測定含量測定及溶出量測定定量限度準確度＋＋精密度－＋重復性＋＋中間精密度＋①＋①專屬性②＋＋＋＋檢測限－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現性驗證，不需驗證中間精密度②如一種