玉環縣人民醫院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-048版本/修訂號：C/0主題內容生化室作業指導書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準執行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01糖化血紅蛋白測定標準操作規程1檢驗申請糖化血紅蛋白（HbA1c）測定2

標本采集與處理2.1

標本采集2.1.1

常規靜脈采血約2ml，EDTA二鉀抗凝，置于專用的真空采血管。2.1.2

檢驗申請單和血標本試管標上統一且唯一的標識符。2.1.3

急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4

標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態，對不合格標本予以拒收。2.1.5

下列標本為不合格標本2.1.5.1

標本量不足：少于1.0ml的全血標本。2.1.5.2

無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.3

其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.1.5.4

標本凝固。2.2

標本保存2.2.1

接收標本后無須分離出血清，用全血測定。2.2.2

標本保存時間：普通冰箱中（2～8℃）穩定5天。為避免標本中水分揮發使血清濃縮，對保存時間超過1天的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3

已完成測試的標本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內保存7天。2.3

標本采集的注意事項2.3.1

采血前使受檢者一般不需準備。2.3.2

必須使用抗凝血，推薦的抗凝劑是EDTA二鉀。3、方法原理糖化血紅蛋白檢測使用高壓液相色譜原理（HPLC）。一個雙活塞，低脈沖HPLC泵和一個成比例的閥門來輸送緩沖液到分析柱和監測器中。一個程序化的增強離子強度的緩沖液梯度來輸送樣本到分析柱，由于各種糖化血紅蛋白組分所帶的電荷不同，在不同離子強度洗脫液的梯度洗脫下，糖化血紅蛋白被分離。被分離的血紅蛋白然后通過過濾器光度計，415nm吸光度的改變計算出其百分濃度。4

試劑及其他用品4.1

試劑：愛科來公司配套試劑盒。4.2

試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉內穩定30天。質控品、校準品放2-8℃保存。4.3

試劑盒準備：即開即用，無特殊準備。5

校準品與校準模式5.1

校準品：與試劑盒配套的校準液，其濃度可溯源至美國糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）標準參考材料。5.2

校準類型和校準點數目：線性模式，2個校準點。5.3

校準周期：①更換試劑批號或出現質控漂移時；②儀器進行全面保養后；③儀器的重要零件更換后，進行一次校準。5.4

校準液重建方法：用7毫升的校正稀釋液溶解血紅蛋白校準液。6

質控品與室內質控規則6.1

質控品采用由BIO-RAD公司提供的兩個不同水平定值質控血清。6.2

質控液重建方法：干粉質控，加0.5ml蒸餾水到質控液中,充分溶解后輕輕混勻后5ul分裝-20℃保存期。6.3質控品測定：每星期一或更換試劑批號、儀器重大維護后測定質控,每支加650ul的H液，完全溶血后放黃色架上做。6.4

質控規則：采用Westgard多規則質控規則，由計算機程序進行檢索與判斷。6.5

如出現失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態后開始標本檢測。7

適用儀器適用HA-8160糖化血紅蛋白檢測系統。8

標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。9

主要分析參數分析儀器配套的原裝試劑，可采用儀器提供的分析參數直接使用。10結果計算儀器根據校準曲線自動計算出樣本的結果。11

檢驗結果的報告及范圍11.1

結果的報告11.1.1

結果經審核后，確認準確無誤后發出報告。11.1.2

報告單上標明結果的計量單位、參考區間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫學信息。11.1.3

如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2

報告范圍：2.0～18.5%，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據標本稀釋后重復測定的結果。12

操作性能12.1

精密度：變異系數批內為0.5-1.0%；批間為1.65-2.66%左右。12.2

方法的有限性及干擾因素:膽紅素、維生素C、氨基甲酰血紅蛋白、乙酰化血紅蛋白和乳糜微粒對測定均無影響。13

參考范圍及醫學決定水平參考范圍：HbA1c

0～6.5%.14

臨床意義14.1評價血糖控制治療的療效：反映2～3個月前平均血糖水平，可作為衡量糖尿病人血糖控制情況的良好指標糖化血紅蛋白是葡萄糖或磷酸化葡萄糖與血紅蛋白中2個β鏈的N末端氨基酸結合后形成的產物，稱為GHb或HbA1。HbA1包括HbA1a、HbA1b、HbA1c和HbA1d。其中HbA1c是葡萄糖與血紅蛋白β鏈N末端氨基酸發生的非酶促反應的產物。首先形成中間產物醛亞胺的反應快速且可逆，稱為不穩定的HbA1c；繼而通過Amadori轉位和分子重排，形成酮胺結構，稱為穩定型的HbA1c，該反應緩慢且不可逆。HbA1c占HbA1的2/3以上，其余的糖化血紅蛋白是血紅蛋白與磷酸葡萄糖或果糖結合的產物。血紅蛋白發生非酶促糖化反應的量與反應物的濃度即血紅蛋白和葡萄糖成正比。由于血紅蛋白濃度保持相對穩定，因此，血紅蛋白的糖化水平主要取決于葡萄糖的濃度。血紅蛋白的半衰期為60天，故HbA1c的含量可反映測定前8～10周的平均血糖水平。測定糖尿病患者HbA1c的水平，可以監測近2個月的血糖控制水平。可協助判斷預后：糖尿病合并視網膜病者，如HbA1c為8-10%，提示病變為中等程度，可用激光進行治療；大于10%為嚴重病損，預后較差。對妊娠糖尿病，判斷是否致畸、死胎和子癇前期更有意義。14.2

病理性低血糖,各種原因所致紅細胞平均壽命縮短的溶血性貧血，影響了血紅蛋白的糖化過程，會使HbA1C降低。15

結果審核以及分析與相關項目的聯系15.1

由資深專業人員負責檢驗結果的審核。15.2

認真審核每一個測定結果，審核者對發出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3

相關項目：審核與空腹血糖、餐后二小時血糖、糖耐量等的關系，如出現與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16

暫時無威脅生命的“緊急值”及報告規定17

有關引用程序與文件17.1HA-8160糖化血紅蛋白