GB/T40176—2021植物源性產(chǎn)品中木二糖的測定親水保留色譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40176—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)歸口。1GB/T40176—2021植物源性產(chǎn)品中木二糖的測定親水保留色譜法本文件規(guī)定了植物源性產(chǎn)品中木二糖的高效液相親水保留色譜測定方法。本文件適用于植物源性產(chǎn)品中的木二糖的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。啉酮(PMP)發(fā)生衍生反應，生成具有強紫外吸收的穩(wěn)定產(chǎn)物，對其采用高效液相親水保留色譜紫外檢5試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1.2無水乙醇(CH?CH?OH)。5.1.9磷酸(H?PO?):色譜純。5.1.10木二糖(C??H??Og,CAS號：6860-47-5):純度≥99.0%。2GB/T40176—20215.2.4磷酸水溶液(0.1%):量取1mL磷酸，加水溶解并定容至1L。5.3標準溶液配制稱取0.1g木二糖，精確至0.0001g,用水溶解并定容至100mL,配制成質(zhì)量濃度約為1000μg/mL的標準儲備液，儲存于4℃條件下，在1個月內(nèi)使用。移取2.5mL標準儲備液(5.3.1)用水定容至25mL容量瓶，分別從容量瓶中移取0.1mL、現(xiàn)用現(xiàn)配。易變質(zhì)試樣置于0℃~4℃保存。3GB/T40176—20218分析步驟取1g(精確至0.0001g)混勻后的樣品于燒杯中，用水分散，轉移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度；混勻后，25℃下360W超聲10min,靜置30min,取5mL上清液于20mL容量瓶中，加入無水乙醇定容至刻度，取5mL溶液于離心管中，25℃下360W超聲10min,10000g高速離心10min;取2mL上清液，氮吹除去乙醇；余渣加水充分溶解，轉移至5mL容量瓶中，用水定容至刻取1g(精確至0.0001g)混勻后的樣品于燒杯中，用50mL水溶解，混勻后轉移至2氫氧化鈉溶液(5.2.2)各400μL,混勻，70℃水浴反應100min。再加入0.3mol/L的鹽酸溶液(5.2.3)a)液相色譜柱：親水保留色譜柱(基質(zhì)鍵合兩性離子或中性酰胺官能團),柱長150mm,內(nèi)徑4GB/T40176—2021表1梯度洗脫程序時間min%%0520.18.4標準曲線的制作將系列標準工作液按從低到高的濃度依次注入液相色譜儀中，測定相應的響應值(峰面積),以標準工作液中木二糖的濃度為橫坐標，以響應值(峰面積)為縱坐標，繪制標準曲線。標準溶液色譜圖參見附8.5樣品溶液的測定將待測樣品液上機測定。若待測樣品液中木二糖含量超出標準工作曲線1.0μg/mL～100μg/mL范圍，應稀釋合適倍數(shù)后重新測定，記錄色譜圖。根據(jù)保留時間定性，記錄峰面積，根據(jù)標準曲線計算待測樣品液中木二糖的濃度。樣品溶液色譜圖參見附錄B中圖B.2、圖B.3和圖B.4。9分析結果的表述試樣中木二糖含量按照式(1)計算：式中：w——試樣中木二糖的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——根據(jù)樣液的峰面積由直線回歸方程計算出的木二糖的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣定容體積，單位為毫升(mL);f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；m——試樣稱樣量，單位為克(g)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留3位有效數(shù)字。10精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。本方法中植物源產(chǎn)品中木二糖的檢出限分別是：高蛋白類產(chǎn)品為0.6mg/g,高淀粉類產(chǎn)品為0.6mg/g,非淀粉糖類產(chǎn)品為0.3mg/g;定量限分別是：高蛋白類產(chǎn)品為2mg/g,高淀粉類產(chǎn)品為2mg/g,非淀粉糖類產(chǎn)品為1mg/g。5GB/T40176—2021(資料性)樣品分類說明植物源性樣品分類舉例參見表A.1。表A.1樣品分類舉例樣品分類舉例高蛋白質(zhì)類樣品豆?jié){粉、植物蛋白粉高淀粉類樣品烘焙用小麥粉非淀粉糖類樣品速溶功能飲料、固體飲料6Al!GB/TAl!(資料性)B.1木二糖標準品親水保留色譜圖木二糖標準品親水保留色譜圖參見圖B.1。0.60-0.500.400.300.200.100.000.002,004.006.008.0010.0012.0022.0024.0026.0028.0030.00圖B.1木二糖標準品親水保留色譜圖B.2試樣(高蛋白質(zhì)類產(chǎn)品)中木二糖親水保留色譜圖試樣(高蛋白質(zhì)產(chǎn)品)中木二糖色譜圖參見圖B.2。280.00210.00mAl.mAl.70.000.00-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.00圖B.2試樣(高蛋白質(zhì)類產(chǎn)品)中木二糖親水保留色譜圖B.3試樣(非淀粉糖類產(chǎn)品)中木二糖親水保留色譜圖試樣(非淀粉糖類產(chǎn)品)中木二糖色譜圖參見圖B.3。mAUmAU0.1000.0900.0800.0700.0600.0500.0400.0300.0200.0100.000-0.0100.002.004.006.008.00GB/T40176—202110.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.00圖B.3試樣(非淀粉糖類產(chǎn)品)中木二糖親水保留色譜圖B.4試樣(高淀粉類產(chǎn)品)中木二糖親水保留色譜圖試樣(高淀粉類產(chǎn)品)中木二糖色譜圖參見圖B.4。280.00