關(guān)于植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)1、直接檢查：利用肉眼或放大鏡注意有無(wú)害蟲(chóng)的排泄物、脫皮殼、卵、幼蟲(chóng)、蛹、繭和成蟲(chóng)諸蟲(chóng)態(tài)以及食痕和危害狀等。第2頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、過(guò)篩檢驗(yàn)：取樣攜回室內(nèi)進(jìn)行過(guò)篩檢驗(yàn)，按糧谷、油料、豆類(lèi)顆粒形狀和大小，選用不同孔徑的規(guī)格篩第3頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、過(guò)篩檢驗(yàn)：將需用的篩層，按篩孔大小順序套好(小篩孔放在下面)，將樣品放人上層選篩內(nèi)(不宜過(guò)多，約達(dá)篩層高度的2／3)，套上篩蓋，電動(dòng)或手動(dòng)回旋轉(zhuǎn)動(dòng)一定時(shí)間后，按篩層將篩上物和篩下物分別倒入白瓷盤(pán)中，用擴(kuò)大鏡或解剖鏡檢查，檢出昆蟲(chóng)和螨類(lèi)，同時(shí)還可檢出蟲(chóng)粒、病粒、雜草籽和其它夾雜物。若檢查時(shí)室溫低于10℃，最下層篩出物須在20—30℃下處理15—20min，促使害蟲(chóng)活動(dòng)，再行檢查。第4頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)一、現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)3、軟X光透視檢測(cè)4、檢疫犬檢查第5頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)1、相對(duì)密度檢驗(yàn)一定濃度的食鹽水或其它溶液第6頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、染色檢驗(yàn)法檢查糧粒中的谷象、米象等可將樣品放在鐵絲網(wǎng)中，在30℃的水中浸lmin，再移入1％高錳酸鉀溶液中l(wèi)min，然后用清水沖洗或用過(guò)氧化氫硫酸液洗滌20—30s，用擴(kuò)大鏡檢查，挑出有直徑約0．5mm黑斑點(diǎn)的籽粒，再行剖檢。豆類(lèi)可用1％碘化鉀或2％碘酒染色1—1．5min，再移入0．5％氫氧化鈉或氫氧化鉀液中20—30s，取出用水沖洗30s，如粒面有1—2mm直徑的黑圓點(diǎn)，則內(nèi)部可能隱藏豆象。第7頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)2、染色檢驗(yàn)法對(duì)植物病原細(xì)菌檢驗(yàn)可以用革蘭氏染色法和鞭毛染色法，對(duì)于植物病原線蟲(chóng)則用透明染色法第8頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)3、直接鏡檢第9頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法用于檢測(cè)種子表面附著的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、銹菌的夏孢子以及多種半知菌的分生孢子等。第10頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法洗滌檢驗(yàn)的操作程序如下：(1)洗脫孢子：將一定數(shù)量的種子樣品放人容器內(nèi)并加入定量蒸餾水或其它洗滌液，振蕩5一lOmin，使孢子脫離種子，轉(zhuǎn)移到洗滌液中。(2)離心富集：將孢子洗滌液移人離心管，低速離心(2500—3000r／min)10—15min，使孢子沉集在離心管底部。第11頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)4、洗滌檢驗(yàn)法洗滌檢驗(yàn)的操作程序如下：(3)鏡檢計(jì)數(shù)：棄去離心管內(nèi)的上清液，加入一定量蒸餾水或其它浮載液，重新懸浮沉集在離心管底部孢子，取懸浮液，滴加在血球計(jì)數(shù)板上，用高倍顯微鏡檢查孢子種類(lèi)并計(jì)數(shù)，據(jù)此可計(jì)算出種子的帶菌量。(4)孢子生活力測(cè)定：用常規(guī)孢子萌發(fā)測(cè)定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑(TTC)染色法判定孢子死活。第12頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)5、分離培養(yǎng)檢驗(yàn)主要適用于潛伏于種子、苗木、繁殖材料及植物產(chǎn)品內(nèi)的病原菌分離真菌一般用PDA培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)細(xì)菌用牛肉汁培養(yǎng)基，對(duì)于特殊要求的菌類(lèi)可以用選擇性培養(yǎng)基第13頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)5、分離培養(yǎng)檢驗(yàn)方法有：組織分離法稀釋分離法劃線分離法第14頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)6、血清學(xué)檢驗(yàn)方法有：免疫電鏡技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)斑點(diǎn)免疫法免疫熒光抗體法第15頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)7、生理生化測(cè)定第16頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細(xì)胞，在液體培養(yǎng)時(shí)，使混濁的細(xì)菌懸浮液變得澄清，在固體平板上培養(yǎng)時(shí)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊，透明光亮的圓形無(wú)菌空斑，稱(chēng)為“噬菌斑”，肉眼即可分辯。第17頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法國(guó)內(nèi)已采用噬菌體法檢查水稻稻種是否帶有白葉枯病菌。病田稻種的稻殼中通常都帶有專(zhuān)化性的噬菌體或存活細(xì)菌，可據(jù)以確定稻種確系帶菌。第18頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法取10g稻種，脫下谷殼剪碎或磨碎，放入已滅菌處理的燒杯中，加滅菌水20ml浸泡30min，過(guò)濾后分別吸取濾液1.5、1.0和0.5ml，置于三個(gè)滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)第19頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)8、噬菌體檢驗(yàn)法各加lml新培養(yǎng)的白葉枯細(xì)菌指示菌液(濃度為9X108／ml以上)混勻后加入10ml融化的肉汁胨瓊脂培養(yǎng)基，搖勻凝成平板后，放在25—28℃溫箱中，培養(yǎng)10—12h第20頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)吸水紙檢驗(yàn)法通常用底部鋪有三層吸水紙的塑料培養(yǎng)皿或其它適用容器作培養(yǎng)床。先用蒸餾水濕潤(rùn)吸水紙，將種子按適當(dāng)距離排列在吸水紙上，再在一定條件下培養(yǎng)，對(duì)多數(shù)病原真菌，適宜的培養(yǎng)溫度為20—25℃，每天用近紫外光(NUV)燈或日光燈照明12h。第21頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)吸水紙檢驗(yàn)法培養(yǎng)7一l0d后檢查和記載種子帶菌情況，檢查時(shí)，用兩側(cè)照明的實(shí)體顯微鏡逐粒種子檢查。本法依據(jù)種子上真菌菌落的整個(gè)形象，即“吸水紙鑒別特征”來(lái)區(qū)分真菌種類(lèi)。檢查時(shí)應(yīng)特別注意觀察種子上菌絲體的顏色、疏密程度和生長(zhǎng)特點(diǎn)、真菌繁殖結(jié)構(gòu)的類(lèi)型和特征第22頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)冰凍吸水紙法是前一個(gè)的改進(jìn)版，可以減少雜菌污染、抑制種子發(fā)芽第23頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)保濕培養(yǎng)檢驗(yàn)瓊脂平皿法用瓊脂培養(yǎng)基代替了吸水紙第24頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)9、保濕萌芽檢驗(yàn)萌芽法檢驗(yàn)沙土萌發(fā)檢驗(yàn)土內(nèi)萌發(fā)檢驗(yàn)試管幼苗癥狀測(cè)定第25頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)10、誘捕器誘集檢驗(yàn)信息素誘餌第26頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)11、鑒別寄主檢測(cè)應(yīng)用于植物病毒的鑒定、診斷及檢疫中第27頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲(chóng)的各種分離方法漏斗分離法：此法適于分離少量植物材料中有活動(dòng)能力的線蟲(chóng)。基本裝置是一個(gè)直徑適當(dāng)?shù)穆┒罚┒奉i末端接一段乳膠管，用彈簧夾把管子夾住。漏斗放置在支架上，其內(nèi)盛滿(mǎn)清水。把檢驗(yàn)的植物材料洗掉泥土后，切成0．5cm長(zhǎng)的小段，放在紗布中包起來(lái)，輕輕地浸入漏斗內(nèi)。線蟲(chóng)從植物組織中逸出，經(jīng)紗布沉落到漏斗頸底，經(jīng)12h或過(guò)一夜后，打開(kāi)彈簧夾使膠管前端的水流到玻皿內(nèi)，鏡檢線蟲(chóng)第28頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲(chóng)的各種分離方法淺盤(pán)分離法：原理同漏斗法第29頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲(chóng)的各種分離方法簡(jiǎn)易漂浮分離法：本法利用干燥的線蟲(chóng)胞囊能漂浮在水面的特性分離土壤中的馬鈴薯金線蟲(chóng)(Globoderarostochiensis)和各種胞囊線蟲(chóng)(Heterodera)。第30頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第一節(jié)常規(guī)檢驗(yàn)檢疫技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)檢疫技術(shù)12、植物病原線蟲(chóng)的各種分離方法過(guò)篩分離法：本法用于從大量土壤中分離各類(lèi)線蟲(chóng)。將充分混勻的土壤樣品置于不銹鋼盆或塑料盆中，加入2—3倍的冷水，攪拌土壤并振碎土塊后過(guò)20目篩，土壤懸浮液流人第二個(gè)盆中并噴水洗滌篩上物，棄去第一個(gè)盆中和篩上的剩余物，第二個(gè)盆中的土壤懸浮液經(jīng)lmin沉淀后再按上法過(guò)150目篩，從篩子背面將篩中物沖洗到燒杯中，盆中土壤懸浮液再繼續(xù)過(guò)325目和500目篩。篩中物收集在燒杯中靜置20—30min，線蟲(chóng)沉集底部，棄去上清液，將沉集物轉(zhuǎn)移到玻皿內(nèi)鏡檢或吸取線蟲(chóng)鑒定。第31頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第二節(jié)植物檢驗(yàn)檢疫新技術(shù)的應(yīng)用一、核酸雜交技術(shù)二、限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記技術(shù)（RFLP）第32頁(yè),共35頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五章植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)第二節(jié)植