7-GTDF分子印跡聚合物的制備及其吸附性能研究【摘要】目的：制備對7-GTDF有分離富集功能的新型分子印跡材料，為猴耳環(huán)中有效成份的分離提供參考。方法：采用沉淀聚合法制備7-GTDF分子印跡聚合物，通過掃描電鏡、傅里葉紅外光譜儀對制得的分子印跡聚合物進(jìn)行表征；進(jìn)一步評(píng)估其等溫靜態(tài)吸附性能與等溫動(dòng)態(tài)吸附性能，計(jì)算其印跡因子和吸附量；同時(shí)考察印跡材料對四種7-GTDF結(jié)構(gòu)類似物的特異選擇性，最終將材料運(yùn)用于猴耳環(huán)醇提樣品中7-GTDF的分離。結(jié)果：以4-乙烯基吡啶（4-VP）為功能單體合成的印跡材料對7-GTDF具有特異性吸附作用，材料的平衡吸附量為34.02mg/g，印跡材料對猴耳環(huán)中其他四種結(jié)構(gòu)類似物ECGC、ECG、槲皮苷、楊梅苷選擇因子為0.97、1.18、1.01和1.03；將該材料用于實(shí)際的猴耳環(huán)醇提物樣品進(jìn)行考察，在優(yōu)化條件下，7-GTDF的回收率為56.78%，純度為53.67%。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)制備的4-VP分子印跡材料對7-GTDF有特異性吸附作用，可用于猴耳環(huán)中7-GTDF的制備分離。為猴耳環(huán)中有效成分的綠色富集分離，目標(biāo)物質(zhì)藥理活性的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。【關(guān)鍵詞】猴耳環(huán)；7-GTDF；4-VP；沉淀聚合法；分子印跡聚合物注：本論文(設(shè)計(jì))題目來源于教師的國家級(jí)(或省部級(jí)、廳級(jí)、市級(jí)、校級(jí)、企業(yè))科研Preparationandadsorptionpropertiesof7-GTDFmolecularlyimprintedpolymer[Abstract]:Objective:Toprepareanovelmolecularimprintingmaterialwithseparationandenrichmentfunctionfor7-GTDF,providingreferencefortheseparationofeffectivecomponentsinA.clypearia.Method:7-GTDFmolecularimprintedpolymerwaspreparedbyprecipitationpolymerizationmethod,andcharacterizedbyscanningelectronmicroscopyandFouriertransforminfraredspectroscopy.Further,theisothermalstaticadsorptionperformanceandisothermaldynamicadsorptionperformancewereevaluatedandtheimprintingfactorandadsorptioncapacitywerecaculated.Moverover,thespecificselectivityofimprintingmaterialsforfour7-GTDFstructuralanalogueswereexamed,andthematerialswereultimatelyappliedtotheseparationof7-GTDFintheethanolextractedsamplesofA.clypearia.Result:Theimprintedmaterialsynthesizedwith4-vinylpyridine(4-VP)asthefunctionalmonomershowedspecificadsorptionon7-GTDF,withanequilibriumadsorptioncapacityof34.02mg/g.TheselectionfactorsfortheotherfourstructuralanaloguesECGC,ECG,quercetin,andmyricetininA.clypeariawere0.97,1.18,1.01,and1.03;ThematerialwasusedtoinvestigatetheactualalcoholextractsampleofA.clypearia.Underoptimizedconditions,therecoveryrateof7-GTDFwas56.78%,andthepuritywas53.67%.Conclusion:The4-VPmolecularimprintingmaterialpreparedinthisexperimentshowaspecificadsorptioneffecton7-GTDFandcanbeusedforthepreparationandseparationof7-GTDFinA.clypearia,whichprovidereferenceforthegreenenrichmentandseparationofactiveingredientsinA.clypearia,andfurtherdevelopmentandutilizationofthepharmacologicalactivityofthetargetsubstance.[Keywords]Archidendronclypearia;7-GTDF;4-VP;Precipitationpolymerization;Molecularlyimprintedpolymer

目錄TOC\o"1-3"\h\u1前言 前言猴耳環(huán)藥材來源于豆科猴耳環(huán)屬多年生喬木猴耳環(huán)Archidendronclypearia(Jack)Benth.的干燥葉，主產(chǎn)于廣東、福建、廣西、云南、海南、浙江等地[1]。作為我國的傳統(tǒng)中草藥之一，猴耳環(huán)最早在明代就被著名醫(yī)藥學(xué)家李時(shí)珍收錄在《本草綱目》中，猴耳環(huán)藥材味苦澀性偏寒涼,具有清熱解毒、涼血消腫、止瀉等功效。猴耳環(huán)屬植物具有抗病毒、抗腫瘤、抗炎[2]、抗過敏[3]以及抑制血管生成和抗氧化等等多種生物活性[4]，是廣東地區(qū)常用的珍貴中草藥,現(xiàn)已被開發(fā)成不同劑型的抗菌消炎的中藥制劑,如猴耳環(huán)消炎片、猴耳環(huán)消炎膠囊、猴耳環(huán)消炎顆粒等,臨床上主要用于上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃體炎、急性胃腸炎等疾病的治療。其中特有的7-沒食子酰基特利色黃烷（7-GTDF）具有降血糖、抑菌生物活性成分的作用[5]。分子印跡技術(shù)(Molecularimprintingtechnology，MIT)也稱分子模板技術(shù)，是一種模擬自然界中抗體和抗原[6]以及酶和底物[7]之間特異性結(jié)合的技術(shù)。基于分子印跡技術(shù)制備的一種具有分子記憶效應(yīng)的聚合物叫做分子印跡聚合物(Molecularlyimprintedpolymers，MIP)[8]。為制備性能良好的MIP，需要考慮多種構(gòu)成要素，包括模板分子、功能單體、致孔劑、交聯(lián)劑和引發(fā)劑等[9]，這些構(gòu)成要素在MIP的制備過程中發(fā)揮著不同的作用，其中功能單體與模板分子比例的選擇將直接影響印跡產(chǎn)物的吸附識(shí)別能力[8]。模板分子(也稱為目標(biāo)分子)與功能單體之間通過共價(jià)鍵、非共價(jià)鍵或半共價(jià)鍵形成簡單預(yù)聚合物，接著在適宜的致孔劑(也稱為溶劑)、交聯(lián)劑和引發(fā)劑的共同作用下進(jìn)行聚合反應(yīng)，形成含有特定空間結(jié)構(gòu)的剛性三維聚合物;最后選擇合適的洗脫溶劑去除其中的模板分子，即得到具有與模板分子在結(jié)合位點(diǎn)上完全匹配的MIP[10]。當(dāng)MIP與樣品溶液中的目標(biāo)分子再吸附時(shí)，能實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)分子的選擇性識(shí)別和富集。由于MIP具有高親和性和高選擇性，同時(shí)具有穩(wěn)定性好、制備簡單、成本低、適用范圍廣、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)，特別適合復(fù)雜基質(zhì)樣品中痕量或超痕量分析物的選擇性分離富集[11]。近年來，分子印跡聚合物被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、環(huán)境、材料等多個(gè)領(lǐng)域[12,13,14]。目前未見基于分子印跡技術(shù)對7-GTDF進(jìn)行聚合物制備的報(bào)告，本實(shí)驗(yàn)采用沉淀聚合法合成分子印跡聚合物，制得的7-GTDFMIP具有分離富集功能，為猴耳環(huán)生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、活性開發(fā)及活性物質(zhì)的分離提供了借鑒與參考。2儀器與材料2.1儀器UV1800型紫外-可見光分光光度計(jì)日本Shimadzu公司RCT磁力攪拌器德國IKA公司MettlerToledo電子分析天平瑞士mettlertoledo公司SK7200LHC型超聲波清洗器上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司AcquityUPLCH-Class液相色譜儀美國Waters公司HWS-26電熱恒溫水浴鍋上海一恒科學(xué)儀器有限公司KS3000Icontrol恒溫?fù)u床德國IKA公司MXW-200+混勻儀杭州齊威儀器有限公司2.2材料猴耳環(huán)藥材（批號(hào)202012001）廣東態(tài)合堂實(shí)業(yè)有限公司槲皮苷對照品（批號(hào)11538-202007，純度93.5%）中國食品藥品檢定研究院7-沒食子酰基特利色黃烷實(shí)驗(yàn)室自制甲醇天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司磷酸天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司純水屈成氏集團(tuán)乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）上海麥克林生化科技有限公司2,2-偶氮二異丁腈（AIBN）上海麥克林生化科技有限公司4-乙烯基苯甲酸（4-VP）上海麥克林生化科技有限公司2-乙烯基苯甲酸（2-VP）上海麥克林生化科技有限公司甲基丙烯酸（MAA）上海麥克林生化科技有限公司丙烯酸（AA）上海麥克林生化科技有限公司丙烯酰胺（AM）上海麥克林生化科技有限公司乙腈天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司氮?dú)鈴V州深冷特氣體設(shè)備有限公司3實(shí)驗(yàn)方法3.1預(yù)聚合體系研究3.1.1篩選最優(yōu)功能單體溶液的配置1mM7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取7-GTDF4.42mg于10mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。4mM4-乙烯基苯甲酸(4-vp)：取4-VP43微升于100mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。4mM丙烯酰胺(AM)：精密稱取AM28.43mg于100mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。4mM丙烯酸(AA)：取丙烯酸27.4微升于100mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。4mM甲基丙烯酸(MAA)：取MAA34微升于100mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。4mM2-乙烯基苯甲酸(2-vp)：取2-vp43微升于100mL量瓶中，加入乙腈溶解并稀釋至刻度。測定法取1mM7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)液0.5mL于10mL量瓶中，依次加入上述4mM的不同單體溶液0.5mL，定容，震蕩30min，4℃下預(yù)聚合12小時(shí)，通過紫外分光光度法，分別測定7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)溶液，各單體溶液，以及混合溶液的全波長掃描圖(200-800nm)，并以單體溶液為空白，繪制差示紫外光譜曲線[15]。3.1.2篩選最優(yōu)功能單體比例根據(jù)吸附量和印跡因子來篩選最優(yōu)功能單體，參考文獻(xiàn)設(shè)置以下比例：取1mM7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)液0.5mL，依次加入4mM最佳單體0.25mL（1:2），0.5mL（1:4），0.75（1:6），1mL(1：8)，1.5mL（1:12）,2mL（1:16），120r/min搖勻10分鐘，4℃下預(yù)聚合12h。通過紫外分光光度計(jì)在200-800nm分別測定7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)溶液，不同比例的單體溶液，以及混合溶液的全波長掃描圖，并以不同比例的單體溶液為空白，繪制差示紫外光譜曲線。3.27-GTDFMIP制備本實(shí)驗(yàn)采用沉淀聚合法合成分子印跡聚合物。操作方法如下：精密稱取0.05mM7-GTDF于西林瓶中，加入10mL乙腈超聲溶解，加入0.2mmol4-VP后，于4℃下預(yù)聚合12h，加入1mMEGDMA、5mgAIBN，通入氮?dú)獬酰掷m(xù)10分鐘后轉(zhuǎn)至70℃水浴下反應(yīng)24h。聚合結(jié)束后，放入離心機(jī)中于5000r/min下離心5min，將溶液過濾，適當(dāng)烘干后轉(zhuǎn)移至濾紙，裝入索氏提取器，用甲醇-冰醋酸(9：1，v/v)以0.3mL/min的速率洗滌48h，每12h更換一次洗滌劑，通過紫外分光光度計(jì)對洗脫出的模板分子進(jìn)行分析，確定模板完全去除。然后分別用甲醇以相同的速度洗滌8h，從而確保模板分子和殘留單體完全去除。得到的聚合物在60℃下干燥24h。同法制備不加7-GTDF的空白分子印跡ADDINEN.CITE[16,17]。具體流程如圖1所示。圖1采用4-VP為功能單體的7-GTDF分子印跡制備流程圖Fig.1Preparationprogressof7-GTDFmolecularimprintedmaterialsusing4-VPasfunctionalmonomer.3.3制備條件優(yōu)化3.3.1色譜條件色譜柱：ECOSILC18(250×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相A：甲醇，流動(dòng)相B：0.2%磷酸。流速：1mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量為10.0μL；色譜條件：30–30%B,0–5min;30%–45%B,5?15min;45%–50%B,15?20min;50%–55%B,20?30min;55%–30%B,30?32min。3.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取7-GTDF適量于試管中，加入乙腈溶解，12000r/min超速離心，取上清液，即得。3.3.3交聯(lián)劑用量采用“3.2”項(xiàng)下的制備方法，其他條件不變的情況下，分別加入不同劑量的交聯(lián)劑EGDMA113.2L、151.0L、188.7L、226.4L，制備出相應(yīng)的印跡材料。取印跡材料5mg，加入1mL7-GTDF標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照公式（1）和公式（2）計(jì)算其吸附量及印跡因子。Q=v(c1-c2)/m(1)IF=QMIPS/QNIP(2)其中，v為吸附溶液體積，c1,c2為吸附前后濃度，m為樣品質(zhì)量；QMIPS為分子印跡材料吸附量（mg/g）;Qnip為空白印跡材料吸附量。3.3.4致孔劑用量采用“3.2”項(xiàng)下的制備方法，其他條件不變的情況下，分別加入不同劑量的乙腈致孔劑5mL、10mL、15mL、20mL，按照公式（1）和公式（2）計(jì)算其吸附量及印跡因子。3.3.5引發(fā)劑用量采用“3.2”項(xiàng)下的制備方法，其他條件不變的情況下，分別加入模板分子，交聯(lián)劑用量的2%、4%、6%及8%的引發(fā)劑AIBN，按照公式（1）和公式（2）計(jì)算其吸附量及印跡因子。3.4表征分別稱取7-GTDF分子印跡聚合物（MIPs），空白分子印跡聚合物（NIPs），以及未洗脫的7-GTDF分子印跡聚合物5mg，采用傅里葉紅外光譜儀在4000~400cm-1掃描檢測，得到聚合物的FTIR光譜圖，鑒定MIPs和NIPs的分子結(jié)構(gòu)。分別取少量MIPs、NIPs，加入無水乙醇中，待無水乙醇揮發(fā)后，進(jìn)行掃描電鏡測定，觀察粉末的孔穴分布和粒徑大小。3.5吸附性能分析3.5.1等溫靜態(tài)吸附稱取7-GTDF適量，加乙腈溶解成濃度1mg/mL母液。依次取一定量母液，并加乙腈溶劑補(bǔ)足至總量為1mL，分別得到濃度為0.8mg/mL，0.6mg/mL，0.4mg/mL，0.2mg/mL，0.1mg/mL，0.05mg/mL的樣品稀釋液。取各個(gè)濃度的7-GTDF稀釋液0.25mL，加入裝有5mg材料的離心管，渦旋約5秒混勻，恒溫震蕩（25℃，100r/min）2h，12000r/min離心10min，進(jìn)樣。每個(gè)濃度平行測定三次ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Amatatongchai</Author><Year>2018</Year><RecNum>2052</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[88]</style></DisplayText><record><rec-number>2052</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1655476553">2052</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Amatatongchai,Maliwan</author><author>Sroysee,Wongduan</author><author>Jarujamrus,Purim</author><author>Nacapricha,Duangjai</author><author>Lieberzeit,PeterA.</author></authors></contributors><titles><title>Selectiveamperometricflow-injectionanalysisofcarbofuranusingamolecularly-imprintedpolymerandgold-coated-magnetitemodifiedcarbonnanotube-pasteelectrode</title><secondary-title>Talanta</secondary-title></titles><periodical><full-title>Talanta</full-title></periodical><pages>700-709</pages><volume>179</volume><dates><year>2018</year><pub-dates><date>Mar1</date></pub-dates></dates><isbn>0039-9140</isbn><accession-num>WOS:000424178000095</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:000424178000095</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.talanta.2017.11.064</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[18]。3.5.2等溫動(dòng)態(tài)吸附稱取7-GTDF適量，加乙腈溶解成濃度約0.4mg/mL的溶液。依次取0.25mL溶液加入5mg樣品中，渦旋約5秒混勻，恒溫震蕩（25℃，100r/min），分別于第20min，40min，60min，80min和100min取出空白和樣品。12000r/min離心5min，取上清液進(jìn)樣。每個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)平行測定三次ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Bakkour</Author><Year>2018</Year><RecNum>2050</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[89]</style></DisplayText><record><rec-number>2050</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1655476553">2050</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Bakkour,Rani</author><author>Bolotin,Jakov</author><author>Sellergren,Borje</author><author>Hofstetter,ThomasB.</author></authors></contributors><titles><title>MolecularlyImprintedPolymersforCompound-SpecificIsotopeAnalysisofPolarOrganicMicropollutantsinAquaticEnvironments</title><secondary-title>AnalyticalChemistry</secondary-title></titles><periodical><full-title>AnalyticalChemistry</full-title></periodical><pages>7292-7301</pages><volume>90</volume><number>12</number><dates><year>2018</year><pub-dates><date>Jun19</date></pub-dates></dates><isbn>0003-2700</isbn><accession-num>WOS:000436028800030</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:000436028800030</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1021/acs.analchem.8b00493</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[19]。3.6選擇性能研究考察7-GTDFMIPs對結(jié)構(gòu)類似物表沒食子兒茶素沒食子酸酯(ECCG)、表沒食子兒茶素（ECG）、楊梅苷以及槲皮苷的吸附能力。將1mM上述摩爾濃度相同的結(jié)構(gòu)類似物1mL分別放入離心管中，加入5.00mg的聚合物，25℃恒溫?fù)u床震蕩2h。12000r/min離心5min后，取上清液進(jìn)樣注入HPLC系統(tǒng)，以估算相同濃度下材料對不同物質(zhì)的吸附量。用選擇因子來評(píng)價(jià)MIPS對類似物的吸附能力和選擇性。平行測定三次ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Bezdekova</Author><Year>2020</Year><RecNum>1885</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[90]</style></DisplayText><record><rec-number>1885</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1655476553">1885</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Bezdekova,Jaroslava</author><author>Vlcnovska,Marcela</author><author>Zemankova,Kristyna</author><author>Bacova,Romana</author><author>Kolackova,Martina</author><author>Lednicky,Tomas</author><author>Pribyl,Jan</author><author>Richtera,Lukas</author><author>Vanickova,Lucie</author><author>Adam,Vojtech</author><author>Vaculovicova,Marketa</author></authors></contributors><titles><title>Molecularlyimprintedpolymersandcapillaryelectrophoresisforsensingphytoestrogensinmilk</title><secondary-title>JournalofDairyScience</secondary-title></titles><periodical><full-title>JournalofDairyScience</full-title></periodical><pages>4941-4950</pages><volume>103</volume><number>6</number><dates><year>2020</year><pub-dates><date>Jun</date></pub-dates></dates><isbn>0022-0302</isbn><accession-num>WOS:000536903900006</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:000536903900006</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.3168/jds.2019-17367</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[20]。=IF1/IF2(3)其中IF1為印跡聚合物的對目標(biāo)分子的印跡因子，IF2為印跡聚合物對結(jié)構(gòu)類似物的印跡因子。3.7猴耳環(huán)醇提取液中7-GTDF的分離3.7.1HPLC色譜條件采用“3.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析。3.7.2分離方法樣品溶液的制備：取猴耳環(huán)70%醇提物10mg，用4mL70%乙醇溶解，離心取上清液（樣品液）。分別取7-GTDFMIPs和7-GTDFNIPs50mg于2mL離心管中，加入醇提物樣品溶液2mL，恒溫震蕩（100r/min，25℃）10min后，于離心機(jī)中12000r/min離心5min，棄去上清液，沉淀物加入20%乙醇2mL恒溫振搖10min，離心后取上清液（淋洗液），沉淀物繼續(xù)加入乙醇-醋酸（9:1）2mL振搖10min，離心后取上清液（洗脫液）。考察MIPs對猴耳環(huán)實(shí)際醇提物樣品中的7-GTDF的提取分離能力，采用外標(biāo)法計(jì)算吸附前后的回收率，并按上述色譜條件以面積歸一法測定純度。

4結(jié)果4.1最佳功能單體及其比例本實(shí)驗(yàn)通過差示紫外光法來篩選聚合物功能單體的種類。根據(jù)袁波ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>袁波</Author><Year>2017</Year><RecNum>2594</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[85]</style></DisplayText><record><rec-number>2594</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1679223759">2594</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>袁波</author></authors><tertiary-authors><author>闞春,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>姜黃素分子印跡聚合物的制備及吸附性能研究</title></titles><keywords><keyword>姜黃素</keyword><keyword>分子印跡</keyword><keyword>本體聚合</keyword><keyword>沉淀聚合</keyword><keyword>選擇性吸附</keyword></keywords><dates><year>2017</year></dates><publisher>南京林業(yè)大學(xué)</publisher><work-type>碩士</work-type><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[21]等人的研究報(bào)道，模板分子與功能單體之間進(jìn)行預(yù)聚合的方式為非共價(jià)鍵形式的結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)采用了傳統(tǒng)的四種功能單體，在乙腈條件下與7-GTDF進(jìn)行預(yù)聚合研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，當(dāng)7-GTDF與酸性單體AA、MAA進(jìn)行預(yù)聚合反應(yīng)時(shí)，模板分子與功能單體之間的差示光譜圖僅在最大吸收波長處(274nm)發(fā)生輕微的紅移，其余部分線性重合度較高，無明顯變化；在與堿性功能單體AM結(jié)合時(shí)，在7-GTDF的最大吸收波長處發(fā)生輕微的藍(lán)移，變化程度小，其余部分線性重合度依舊較高；而與堿性功能單體4-VP結(jié)合時(shí)，模板分子與功能單體之間的差示光譜圖在250~300nm段發(fā)生藍(lán)移，且變化幅度較其它三種單體更大，這說明4-VP與7-GTDF之間可以發(fā)生結(jié)合作用，從而達(dá)到分離提取的目的。酸性模板分子與堿性的功能單體之間有較強(qiáng)的非共價(jià)結(jié)合作用，而堿性的模板分子與酸性的功單體的結(jié)合作用更強(qiáng)。7-GTDF為酸性物質(zhì)，與堿性的4-VP結(jié)合更為穩(wěn)定，因此采用4-VP作為功能單體并進(jìn)行功能單體比例的篩選。 a b c d圖2不同功能單體（a）AA；（b）MAA；（c）AM;（d）4-VP與7-GTDF作用差示紫外光譜圖Fig.2TheUVspectraofdifferentfunctionalmonomersand7-GTDFinteraction(a)AA;(b)MAA;(c)AM;(d)4-VP通過不同比例的4-VP功能單體與模板分子7-GTDF的反應(yīng)，探究兩者最佳的結(jié)合比例。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如圖3顯示，隨著4-VP用量的增加，7-GTDF的最大吸收波長逐漸增大，并且逐步發(fā)生藍(lán)移。在兩者比例從1：2加至1：4時(shí)，曲線的吸光度出現(xiàn)飛躍性增加。采用肖榕ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>肖榕</Author><Year>2016</Year><RecNum>2586</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[84]</style></DisplayText><record><rec-number>2586</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1679223575">2586</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>肖榕</author></authors><tertiary-authors><author>吳學(xué)文,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>RAFT沉淀聚合制備馬兜鈴酸分子印跡聚合物及吸附性能研究</title></titles><keywords><keyword>馬兜鈴酸</keyword><keyword>分子印跡</keyword><keyword>RAFT聚合</keyword><keyword>關(guān)木通</keyword><keyword>MaterialStudio軟件模擬</keyword></keywords><dates><year>2016</year></dates><publisher>湘潭大學(xué)</publisher><work-type>碩士</work-type><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[22]的分析分法，進(jìn)一步計(jì)算不同比例的7-VP和7-GTDF的線性方程及結(jié)合常數(shù)，具體結(jié)果如表所示，當(dāng)n=4時(shí)，R2=0.9057，最接近1，此時(shí)的紫外光譜的線性關(guān)系最好，說明7-GTDF主要與4個(gè)4-VP分子形成預(yù)聚合物，對應(yīng)的結(jié)合常數(shù)K值為3.08×1015L4/mol2，大于105，表明7-GTDF可與4-VP形成較穩(wěn)定的預(yù)聚合體。圖3不同比例的4-VP與7-GTDF作用差示紫外光譜圖 Fig.3TheUVspectraofdifferentratiosof4-VPand7-GTDFinteraction.表1不同比例4-VP線性擬合結(jié)果Tab.1-1Resultsoflinearfittingwithdifferentratiosof4-VP.n△A/b0n=-K△A+K△∑laR22y=-23.216x+1.76270.69784y=-3078.2x+172.180.90576y=-314127x+169050.87298y=-3×107x+2×1060.859810y=-3×109x+2×1080.85624.2單因素優(yōu)化結(jié)果通過對分子印跡聚合物反應(yīng)所需的交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑用量進(jìn)行考察，計(jì)算相應(yīng)的吸附性能和印跡因子，研究其最佳用量。如圖1-4所示，當(dāng)交聯(lián)劑用量較低時(shí)，聚合物在模板分子周圍無法充分形成有效的印跡膜，因此對7-GTDF的特異性吸附效果較差，印跡因子較小，當(dāng)交聯(lián)劑用量過高時(shí)，7-GTDF的有效吸附位點(diǎn)較少，從而導(dǎo)致7-GTDF難以被有效洗脫，同時(shí)兼顧材料分子印跡與空白分子印跡吸附量差異，在比例為1：16時(shí)兩者差異較大，材料印跡分子的選擇性較其他比例更好，且印跡因子更大，故最佳交聯(lián)劑用量為單體：交聯(lián)劑=1：16；隨著致孔劑用量的增加，空白印跡聚合物（NIPs）吸附量逐漸上升，材料的特異性與選擇性逐步降低，當(dāng)致孔劑(溶劑)用量較小時(shí)，聚合物粘連嚴(yán)重，導(dǎo)致形成不規(guī)則聚合物，因此，確定最佳溶劑用量為10mL。在對引發(fā)劑用量進(jìn)行篩選的過程中，發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，引發(fā)劑對印跡聚合物吸附量和印跡因子的影響較小，為避免過高劑量的引發(fā)劑對模板分子和功能單體之間的結(jié)合造成干擾，確保聚合反應(yīng)的順利進(jìn)行，選擇引發(fā)劑用量模板分子和交聯(lián)劑用量的4%ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>金晶</Author><Year>2020</Year><RecNum>2592</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[91]</style></DisplayText><record><rec-number>2592</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1679223759">2592</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>金晶</author></authors><tertiary-authors><author>袁傳勛,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>新型生育酚分子印跡聚合材料的制備與應(yīng)用研究</title></titles><keywords><keyword>生育酚</keyword><keyword>山茶油脫臭餾出物</keyword><keyword>分子印跡技術(shù)</keyword><keyword>陽離子液體</keyword><keyword>甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨</keyword></keywords><dates><year>2020</year></dates><publisher>合肥工業(yè)大學(xué)</publisher><work-type>碩士</work-type><urls></urls><electronic-resource-num>10.27101/ki.ghfgu.2020.000061</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[23]。 a a* b b* c c*圖4交聯(lián)劑（a、a*）；致孔劑（b、b*）及引發(fā)劑（c、c*）的單因素優(yōu)化結(jié)果Fig.4Single-factoroptimizationresultsofcrosslinker(a),porogenicagent(b)andinitiator(c).4.3分子印跡聚合物結(jié)構(gòu)表征4.3.1掃描電鏡分析利用透射電鏡對于制備所得的7-GTDF-MIPs和NIPs的SEM結(jié)果如圖1-5所示。AAI-MIPs圖（a）顯示，功能單體與交聯(lián)劑成功結(jié)合，彼此之間相互粘連，形成的立體球聚合物形狀規(guī)則，并且聚合物的內(nèi)部有空隙出現(xiàn)，這表明7-GTDF被成功洗脫，印跡聚合物的制備去的成功，具有分離富集的效果ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Tamayo</Author><Year>2005</Year><RecNum>113</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[92]</style></DisplayText><record><rec-number>113</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1638348839">113</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Tamayo,F.G.</author><author>Casillas,J.L.</author><author>Martin-Esteban,A.</author></authors></contributors><auth-address>INIA,DeptMedioAmbiente,E-28040Madrid,Spain UnivEuropeaMadrid,DeptQuim&Mat,E-28670Madrid,Spain</auth-address><titles><title>Evaluationofnewselectivemolecularlyimprintedpolymerspreparedbyprecipitationpolymerisationfortheextractionofphenylureaherbicides</title><secondary-title>JournalofChromatographyA</secondary-title><alt-title>JChromatogrA</alt-title></titles><periodical><full-title>JournalofChromatographyA</full-title></periodical><pages>173-181</pages><volume>1069</volume><number>2</number><section>173</section><keywords><keyword>imprintedpolymers</keyword><keyword>precipitationpolymerisation</keyword><keyword>isotherms</keyword><keyword>bindingsites</keyword><keyword>phenylureaherbicides</keyword><keyword>solid-phaseextraction</keyword><keyword>stationaryphases</keyword><keyword>recognition</keyword></keywords><dates><year>2005</year><pub-dates><date>Apr1</date></pub-dates></dates><isbn>0021-9673</isbn><accession-num>WOS:000227995500004</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:000227995500004</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.chroma.2005.02.029</electronic-resource-num><language>English</language></record></Cite></EndNote>[24]；在觀察NIPs的結(jié)果圖（b）發(fā)現(xiàn)，上述三種物質(zhì)也能夠相互粘連成立體聚合物，不同的是在相同的放大倍數(shù)下，NIPs觀察到所形成的聚合物分子較為疏松，且聚合物粒徑較小，這可能是在MIPs中制備過程中，功能單體與模板分子之間的作用力相互影響，使得功能單體在模板分子周圍聚集環(huán)繞在模板分子周圍排列，最終制備出的更加緊密的聚合物。顯然，前者更加致密的聚合結(jié)構(gòu)和空穴，為模板分子和印跡聚合物提供更加精確的“鎖”和“匙”結(jié)構(gòu)，更有利于兩者之間的結(jié)合ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Miura</Author><Year>2015</Year><RecNum>111</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[93]</style></DisplayText><record><rec-number>111</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1638348839">111</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Miura,C.</author><author>Li,H.</author><author>Matsunaga,H.</author><author>Haginaka,J.</author></authors></contributors><auth-address>MukogawaWomensUniv,SchPharm&PharmaceutSci,Nishinomiya,Hyogo6638179,Japan</auth-address><titles><title>MolecularlyimprintedpolymerforchlorogenicacidbymodifiedprecipitationpolymerizationanditsapplicationtoextractionofchlorogenicacidfromEucommiaulmodiesleaves</title><secondary-title>JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis</secondary-title><alt-title>JPharmaceutBiomed</alt-title></titles><periodical><full-title>JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis</full-title></periodical><pages>139-144</pages><volume>114</volume><section>139</section><keywords><keyword>molecularlyimprintedpolymer</keyword><keyword>modifiedprecipitationpolymerization</keyword><keyword>samplepreparation</keyword><keyword>chlorogenicacid</keyword><keyword>samplepreparation</keyword><keyword>drug-delivery</keyword><keyword>caffeicacid</keyword><keyword>separation</keyword><keyword>nanoparticles</keyword><keyword>technology</keyword><keyword>creatinine</keyword><keyword>media</keyword><keyword>rats</keyword></keywords><dates><year>2015</year><pub-dates><date>Oct10</date></pub-dates></dates><isbn>0731-7085</isbn><accession-num>WOS:000360780700021</accession-num><urls><related-urls><url><GotoISI>://WOS:000360780700021</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1016/j.jpba.2015.04.038</electronic-resource-num><language>English</language></record></Cite></EndNote>[25]。 a b圖54-VP為功能單體的7-GTDF印跡材料（a）和空白印跡材料（b）掃描電鏡圖Fig.5SEMof7-GTDFimprintedmaterial(a)andblankimprintedmaterial(b)using4-VPasfunctionalmonomer.4.3.2紅外光譜分析進(jìn)一步通過傅里葉紅外光譜對未洗脫完全的7-GTDF印跡材料、洗脫完全的印跡材料MIPs和空白印跡材料NIPs進(jìn)行分析。從圖6中可以看到，未洗脫的7-GTDF印跡材料中，存在模板分子中較為明顯的羥基峰，分別在波數(shù)為3445.67cm-1和3182.09cm-1處，且峰較寬；波數(shù)為1730.48cm-1和1738.79cm-1處，存在較強(qiáng)的苯環(huán)紅外吸收峰(分子結(jié)構(gòu)式如圖6-2)，進(jìn)一步證明未洗脫前7-GTDF與模板分子相互結(jié)合。比較洗脫后的7-GTDFMIPs和NIPs材料可知，兩者的紅外光譜曲線強(qiáng)度相似，說明在MIPs印跡材料中的7-GTDF分子成功被洗脫，兩者成分均為被交聯(lián)起來的4-VP，但兩者的空間結(jié)構(gòu)不同，故MIPs印跡材料對目標(biāo)分子具有選擇吸附性ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Chen</Author><Year>2020</Year><RecNum>2469</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[94]</style></DisplayText><record><rec-number>2469</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1655556733">2469</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Chen,Jingyu</author><author>Huang,Xin</author><author>Wang,Li</author><author>Ma,Chaoyang</author><author>Wu,Shijia</author><author>Wang,Hongxin</author></authors></contributors><titles><title>Dummytemplatesurfacemolecularlyimprintedpolymersbasedonsilicagelforremovingimidaclopridandacetamipridinteapolyphenols</title><secondary-title>JournalofSeparationScience</secondary-title></titles><periodical><full-title>JournalofSeparationScience</full-title></periodical><pages>2467-2476</pages><volume>43</volume><number>12</number><dates><year>2020</year><pub-dates><date>Jun</date></pub-dates></dates><isbn>1615-9306</isbn><accession-num>WOS:000527927500001</accession-num><urls><related-urls><url><styleface="underline"font="default"size="100%"><GotoISI>://WOS:000527927500001</style></url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.1002/jssc.201901268</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[26]。cbacba圖67-GTDF印跡材料（a）；空白印跡材料（b）和未洗脫的印跡材料（c）紅外光譜圖Fig.6IRspectraof7-GTDFimprintedmaterial(a),blankmaterial(b)andunelutedimprintedmaterial(c).圖6-27-GTDF結(jié)構(gòu)式及官能團(tuán)標(biāo)注Figure6-27-GTDFstructureandfunctionalgrouplabeling4.4吸附性能本實(shí)驗(yàn)在室溫（25℃）下考察分子印跡材料對7-GTDF的吸附量，通過其等溫吸附能力判斷其吸附性能，結(jié)果如圖7所示。隨著濃度的逐漸增加，印跡材料對模板分子的平衡吸附量逐漸增大，由于印跡材料（7-GTDFMIPs）中存在非特異性吸附位點(diǎn)，因此空白印跡材料（7-GTDFNIPs）對模板分子的吸附量也在不斷增大。由于印跡材料中還存在著空白材料所沒有的對7-GTDF的特異性吸附位點(diǎn)。因此，印跡材料的吸附曲線始終在空白印跡材料曲線之上，表明了制得的印跡材料對7-GTDF具有較好的吸附能力。隨著結(jié)合位點(diǎn)的不斷減少，等溫吸附曲線逐漸變得平緩，7-GTDFMIPs的平衡吸附量約為34.02mg/g，7-GTDFNIPs的平衡吸附量約為29.42mg/g。進(jìn)一步考察印跡材料在150分鐘內(nèi)對7-GTDF的吸附動(dòng)力學(xué)曲線，結(jié)果如圖7所示。隨著時(shí)間的增加，印跡材料對模板分子的吸附量逐漸增大，在60min左右達(dá)到平衡，此時(shí)吸附量為30.62mg/g。 a b圖7等溫靜態(tài)吸附（a）和等溫動(dòng)態(tài)吸附（b）的吸附曲線變化圖Fig.7Variationofadsorptioncurvesforisothermalstaticadsorption(a)andisothermaldynamicadsorption(b).4.5選擇性通過對比計(jì)算四種與7-GTDF結(jié)構(gòu)相似且已報(bào)道存在于猴耳環(huán)中的化合物：表沒食子兒茶素沒食子酸酯（ECGC）、表沒食子兒茶素（ECG）、槲皮苷及楊梅苷的吸附量和選擇因子。結(jié)果如表2所示，印跡材料對四種黃酮黃烷類結(jié)構(gòu)類似物都有一定的特異吸附能力，印跡因子均大于1；且在同等濃度下，印跡材料對四種物質(zhì)的吸附能力大小依次是：ECGC>楊梅苷>槲皮苷>ECG；對四種物質(zhì)的選擇因子大小為：ECG>楊梅苷>槲皮苷>ECGC。其中，該材料對ECGC的選擇因子小于1，這可能是由于4-VP功能單體可與ECGC之間存在大量的非特異性結(jié)合作用，如苯環(huán)之間的π-π堆積力等的存在，成為材料與黃烷黃酮類物質(zhì)的主要結(jié)合因素，導(dǎo)致印跡材料中特異性吸附位點(diǎn)未能明顯區(qū)別7-GTDF與ECGC之間的結(jié)合ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>陳曉龍</Author><Year>2018</Year><RecNum>2602</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[95]</style></DisplayText><record><rec-number>2602</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1679224721">2602</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>陳曉龍</author></authors><tertiary-authors><author>闞建全,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>花椒麻味物質(zhì)分子印跡純化技術(shù)的研究及應(yīng)用</title></titles><keywords><keyword>花椒</keyword><keyword>分子印跡聚合物</keyword><keyword>計(jì)算機(jī)分子模擬</keyword><keyword>固相萃取柱</keyword></keywords><dates><year>2018</year></dates><publisher>西南大學(xué)</publisher><work-type>碩士</work-type><urls></urls><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[27]。 表2印跡材料對不同物質(zhì)的選擇性Tab.2Selectivityofimprintedmaterialsfordifferentsubstances.物質(zhì)吸附量（mg/g）印跡因子選擇因子MIPsNIPs7-GTDF30.4824.941.22-ECGC29.3223.361.260.97ECG17.5316.891.041.18Quercitrin21.941Myricitrin25.3821.351.191.034.6猴耳環(huán)醇提液樣品中應(yīng)用將所制備的分子印跡材料用于猴耳環(huán)醇提液中7-GTDF的提取分離，通過其回收率和制備所得的純度ADDINEN.CITE[28,29]判斷分子印跡材料是否具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果如圖8所示，其中a，b，c分別為猴耳環(huán)的上樣液、淋洗液及洗脫液。實(shí)驗(yàn)過程中，考察不同比例的淋洗液（10%乙醇、20%乙醇和30%乙醇）和不同體積（1mL、2mL、3mL）的洗脫溶液對回收率和純度的影響；若淋洗液極性過低，則7-GTDF會(huì)析出，使得回收率下降；若淋洗液極性過高，則無法將非目標(biāo)成分充分分離，導(dǎo)致7-GTDF的純度下降。因此，本實(shí)驗(yàn)采用20%乙醇作為淋洗液。為最大程度洗脫回收7-GTDF，并且提高7-GTDF的純度，采用甲醇-醋酸（9:1）作為洗脫溶劑，洗脫體積為1mL、2mL、3mL時(shí)，回收率分別為：31.85%，56.78%，63.70%，純度分別為：56.02%，53.67%，40.28%；故確定洗脫體積為2mL。由圖中標(biāo)出峰1、2、4三個(gè)峰可看出，上樣液中的雜質(zhì)成功被分離出來，洗脫液中的雜質(zhì)峰面積相較于上樣液顯著變小。峰3為目標(biāo)提取物7-GTDF，在印跡材料中保留較好。在最佳的淋洗、洗脫條件下，淋洗液中7-GTDF有部分損失，分子印跡材料對猴耳環(huán)醇提物回收率為：56.78%，純度（按峰面積歸一化法計(jì)算）由21.41%增加到53.67%，可對7-GTDF進(jìn)行富集和分離。3142cba3142cba圖8猴耳環(huán)醇提物實(shí)際樣品分析色譜圖:（a）猴耳環(huán)醇提物樣品；（b）淋洗液；（c）洗脫液Fig.8ChromatogramoftheactualsampleofA.clypeariaalcoholextract:(a)A.clypeariaalcoholextractsample;(b)Leachingsolution;(c)Elutionsolution.5討論本實(shí)驗(yàn)采用沉淀聚合法制備分子印跡材料，制得得聚合物大小顆粒均勻且后處理流程相對簡單。實(shí)驗(yàn)過程中采用了非極性的有機(jī)溶劑乙腈作為致孔劑來合成7-GTDF印跡聚合物以達(dá)到減少氫鍵等作用力對聚合物形成過程中的干擾；同時(shí)，實(shí)驗(yàn)制得的7-GTDF印跡聚合物的粒徑相比較于空白材料明顯更大，初步判斷為是由于印跡聚合物是通過與7-GTDF結(jié)合后洗脫得來，其中的功能單體4-VP空間排列方式與空白材料有顯著差異所導(dǎo)致，前者的空間結(jié)構(gòu)與目標(biāo)分子形成類似“凹”與“凸”的結(jié)構(gòu)，可以更加精確的選擇吸附7-GTDFADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Zeng</Author><Year>2020</Year><RecNum>119</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[98]</style></DisplayText><record><rec-number>119</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ztffw2epee9dpde5evapsd0dvwv90w0arva9"timestamp="1638348839">119</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Zeng,H.N.</author><author>Yu,X.</author><author>Wan,J.F.</author><author>Cao,X.J.</author></authors></contributors><auth-address>EastChinaUnivSci&Technol,DeptBioengn,StateKeyLabBioreactorEngn,130MeilongRd,Shanghai200237,PeoplesRChina</auth-address><titles><title>Rationaldesignandsynthesisofmolecularlyimprintedpolymers(MIP)forpurifyingtylosinbyseededprecipitationpolymerization</title><secondary-title>ProcessBiochemistry</secondary-title><alt-title>ProcessBiochem</alt-title></titles><periodical><full-title>ProcessBiochemistry</full-title></periodical><pages>329-339</pages><volume>94</volume><section>329</section><keywords><keyword>molecularlyimprintedpolymer</keyword><keyword>core-shellstructure</keyword><keyword>molecularsimulation</keyword><keyword>solidphaseextraction</keyword><keyword>tylosin</keyword><keyword>precipitationpolymerization</keyword><keyword>solid-phaseextraction</keyword><keyword>microextractionfiber</keyword><keyword>gas-chromatography</keyword><keyword>nanoparticles</keyword><keyword>microspheres</keyword><keyword>residues</keyword></keywords><dates><year>2020</year><pub-dates><date>Jul</date></pub-dates></dates><isbn>1359-5113</isbn><accession-n