益康藥酒質量標準的研究

益康注射液由羊茅、巴戟天、地黃等24種貴重中藥組成。具有補腎陽性、抗衰老的功效。本實驗遵照處方的傳統工藝進行制備,對制劑質量標準做了系統研究,為進一步保證該制劑的臨床療效提供實驗依據。1藥品制品檢定所Waters600E高效液相色譜儀,電子分析天平(1/106),益康藥酒(自制);對照品淫羊藿苷(110737-200312)、熊果酸(110742-200415)、補骨脂素(739-8802)購自中國藥品生物制品檢定所;硅膠G,GF254;甲醇為色譜純;水為二次重蒸水;其他試劑均為分析純。2方法和結果2.1斷裂2.2tlc識別2.2.1淫羊茯苓苷對照品溶液的制備取本品50mL,放于蒸發皿中,置水浴上蒸發,待液體揮發至10mL左右時,停止蒸發,加水適量,稀釋為20mL溶液;以水飽和的正丁醇萃取3次,20mL/次,合并正丁醇液,回收正丁醇;殘渣加水20mL使溶解,放冷,通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑為1.3cm,長12mL),以水50mL洗脫,棄去水液,再用30%乙醇液50mL洗脫,棄去30%乙醇洗脫液,繼用70%乙醇液50mL洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為供試品溶液。另取淫羊藿對照藥材0.5g,加乙醇10mL,溫浸30min,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇1mL使溶解,作為對照藥材溶液。取淫羊藿苷對照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作為淫羊藿苷對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照品溶液、對照藥材溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液,再置紫外光(365nm)下檢測,在供試品色譜中,與對照品色譜相應的位置上,顯相同的熒光斑點(圖1)。2.2.2對照藥材試驗取本品50mL,加乙醇25mL,加熱回流1h,放冷,濾過,濾液濃縮至1mL,作為供試品溶液。另取巴戟天對照藥材2.5g,同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.1)為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外光(254nm)下檢測,在供試品色譜中,與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的熒光斑點(圖2)。2.2.3對照藥材試驗取本品10mL,加乙醚20mL,超聲處理10min,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇1mL使溶解,作為供試品溶液。另取當歸對照藥材0.5g,同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外光(365nm)下檢測,在供試品色譜中,與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同的熒光斑點(圖3)。2.2.4供試品及對照品溶液取本品50mL,加20%鹽酸乙醇溶液10mL,三氯甲烷60mL,加熱回流提取40min,濾過,濾液濃縮至1mL,作為供試品溶液。另取補骨脂素對照品,加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液,作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯(8∶2)為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外光(254nm)下檢測,在供試品色譜中,與對照品色譜相應的位置上,顯相同的斑點(圖4)。2.2.5熊羧酸的提取取本品50mL,加乙醚40mL,加熱回流提取4h,提取液回收乙醚;蒸干,殘渣加石油醚(30～60℃)浸泡2次,每次15mL,約2min,傾去石油醚,殘渣加無水乙醇-三氯甲烷(3∶2)混合液,微熱溶解,移至5mL量瓶,作為供試品溶液。另取熊果酸對照品,加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液,作為對照品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.2)為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外光(365nm)下檢測,在供試品色譜中,與對照品色譜相應的位置上,顯相同的斑點(圖5)。噴以1%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,顯相同顏色斑點(圖5)。2.3重量測定2.3.1流動相-水/水色譜柱DescriptionC18柱(4.6mm×200mm,5μm);流動相甲醇-水(52∶48);流速1.0mL·min-1;柱溫25℃;檢測波長270nm;理論塔板數按淫羊藿苷峰計算不低于1500。見圖6。2.3.2對照溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品4.10mg,置100mL量瓶中,用甲醇溶解,定容,配置成每1mL甲醇中含淫羊藿苷0.041mg,即得。2.3.3試驗溶液的制備同淫羊藿TLC鑒別中供試品溶液的制備。2.3.4淫羊氧化-乙酸酯峰面積的線性關系精密吸取對照品溶液,以6,8,10,12,14μL分別進樣,按上述色譜條件測定淫羊藿苷峰面積,以對照品進樣量(μg)為橫坐標X,峰面積為縱坐標Y,進行線性回歸,得回歸方程為:Y=2114693.9024X-84313.7000(r=0.9999),在0.246～0.574μg與峰面積呈良好線性關系。2.3.5精密度測試精密吸取淫羊藿苷對照品溶液10μL,連續進樣5次,峰面積的RSD0.34%,說明精密度較高,測定可靠。2.3.6液制備方法的確定精密量取供試品50mL,按含量測定項下供試品溶液制備方法進行制備。精密吸取20μL,在0,4,8,12,24h測定淫羊藿苷峰面積,計算RSD0.41%,表明供試品溶液在24h內基本穩定。2.3.7重復性試驗精密量取同一批號供試品50mL,按含量測定項下供試品溶液制備方法制備5份,分別進樣20μL,淫羊藿苷平均質量濃度為0.290mg·L-1,峰面積RSD0.45%,表明該分析方法有良好的重復性。2.3.8淫羊w苷對照品溶液精密量取已知含量的益康藥酒5份,分別精密加入一定量的淫羊藿苷對照品溶液。按供試品溶液制備方法進行制備,并按上述色譜條件進行測定,計算平均回收率99.71%,RSD0.47%,表明回收率較高,方法可靠。2.3.9質量濃度測定取本品3批,按含量測定項下方法進行測定,平均質量濃度0.291mg·L-1,3批樣品測定平均值按降幅20%計為本品含量限定值,則其質量濃度應不低于0.233mg·L-1。3使用樣品處理方法對淫羊藿進行薄層鑒別時,開始采用藥典方法處理樣品,效果不理想,查閱文獻后采用現在的處理方法進行鑒別,效果較好,同時采用這種樣品處理方法對淫羊藿苷進行含量測定。淫羊藿為方中君藥,用HPLC測定淫羊藿的主要活性成分淫羊藿苷含量時,流動相先后選擇了乙腈-水(30∶70)、乙腈-水(20∶80),分離效果不好,后又用甲醇-水(55∶45,53∶47,52∶48)分離情況改善,比較之下甲醇-水(52∶48)分離效