單增李斯特菌ΔinlABJ缺失株構建及炎性因子對小鼠血腦屏障損傷作用研究單增李斯特菌ΔinlABJ缺失株構建及炎性因子對小鼠血腦屏障損傷作用研究

引言：

李斯特菌（Listeriamonocytogenes）是一種革蘭氏陽性桿菌，廣泛存在于環境中，并可引起人和動物的嚴重感染。雖然菌株多樣性很大，但其中一些菌株中帶有銀鏈孢素（inlABJ）基因，這些基因的表達被認為促進了李斯特菌對宿主細胞的侵襲和生存。然而，單增李斯特菌ΔinlABJ缺失株的構建及其對小鼠血腦屏障損傷的影響目前尚未研究。

材料與方法：

1.實驗動物：使用C57BL/6小鼠作為實驗動物，雄性小鼠6-8周齡，體重20-25g。

2.構建ΔinlABJ缺失株：選擇帶有inlABJ基因的李斯特菌菌株作為實驗材料。首先，通過PCR擴增目標基因，并純化擴增的產物。然后，將基因敲除構建載體與擴增產物進行連接，轉化到適當的細菌中進行擴增。最后，通過選擇性培養和PCR驗證，獲得inlABJ基因敲除成功的李斯特菌。

3.小鼠血腦屏障模型：使用腹腔注射的方式建立小鼠血腦屏障模型。將小鼠隨機分為對照組和實驗組，每組10只。實驗組小鼠腹腔注射ΔinlABJ缺失株，對照組小鼠腹腔注射正常李斯特菌。注射后24小時，觀察小鼠行為變化，并進行樣本采集。

4.組織標本采集和處理：小鼠經過麻醉后，取血樣本，并收集大腦組織。血樣本用于測定炎性因子水平，大腦組織進行組織病理學和免疫組化分析。

結果：

1.ΔinlABJ缺失株的構建成功：通過PCR和選擇性培養，成功獲得ΔinlABJ缺失株，驗證其inlABJ基因敲除成功。

2.ΔinlABJ缺失株對小鼠血腦屏障的損傷：與對照組相比，實驗組小鼠在注射ΔinlABJ缺失株后表現出明顯的行為異常，包括活動力減退、食欲下降等。在血樣中檢測到實驗組小鼠炎性因子（如IL-1β、IL-6和TNF-α）水平顯著升高，說明ΔinlABJ缺失株對血腦屏障有損傷作用。

3.組織病理學和免疫組化分析：實驗組小鼠大腦組織的病理學觀察顯示明顯的炎癥反應和細胞損傷。免疫組化分析結果證實炎性因子的過度表達，進一步支持ΔinlABJ缺失株對小鼠血腦屏障的損傷作用。

討論與結論：

本研究成功構建了ΔinlABJ缺失株，并發現該菌株對小鼠血腦屏障具有損傷作用。ΔinlABJ缺失株的使用可以幫助我們更好地理解inlABJ基因在李斯特菌對宿主細胞侵襲和生存中的作用。此外，我們的研究還揭示了炎性因子在ΔinlABJ缺失株感染后對小鼠血腦屏障的影響，為進一步研究炎性因子在炎癥性疾病中的作用提供了重要線索。然而，需要進一步研究探索ΔinlABJ缺失株如何影響小鼠的免疫反應和細胞信號傳導機制。

總結：

本研究構建了ΔinlABJ缺失株，發現該菌株對小鼠血腦屏障具有損傷作用，并引起炎性因子的過度表達。這些發現有助于加深對李斯特菌侵襲機制和炎性因子作用的理解，為探索炎癥性疾病的治療策略提供了重要線索。未來的研究應進一步探討ΔinlABJ缺失株對小鼠免疫反應的影響，并研究其對細胞信號傳導的影響機制綜上所述，本研究成功構建了ΔinlABJ缺失株，并發現該菌株對小鼠血腦屏障具有損傷作用。病理學觀察和免疫組化分析結果支持了炎性因子的過度表達，進一步證實了ΔinlABJ缺失株對血腦屏障的損傷作用。這些發現有助于深入了解李斯特菌的侵襲機