食品微生物實(shí)驗(yàn)室的

基本要求與管理GB4789.1總則：3.1環(huán)境3.1.1實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)不影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.1.2實(shí)驗(yàn)室的工作區(qū)域應(yīng)與辦公室區(qū)域明顯分開(kāi)。3.1.3實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢測(cè)工作需求，實(shí)驗(yàn)室布局應(yīng)采用單方向工作流程，避免交叉污染。3.1.4實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求。3.1.5一般樣品檢測(cè)應(yīng)在潔凈區(qū)域(包括超凈工作臺(tái)或潔凈實(shí)驗(yàn)室)進(jìn)行，潔凈區(qū)域的應(yīng)有明顯標(biāo)示。3.1.6病原微生物分離鑒定工作應(yīng)在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室(Biosafetylevel2BSL-2)進(jìn)行。潔凈實(shí)驗(yàn)室與BSL-2實(shí)驗(yàn)室的區(qū)別百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室只針對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境提出潔凈要求，不提供對(duì)人員或環(huán)境的生物安全保護(hù)。(超凈工作臺(tái)不能替代生物安全柜)。普通的食品微生物實(shí)驗(yàn)(不進(jìn)行病原微生物分離與鑒定)只要求在潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。進(jìn)行病原微生物分離與鑒定必須在BLS-2實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。什么是生物安全實(shí)驗(yàn)室？是通過(guò)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造、實(shí)驗(yàn)設(shè)備的配置、個(gè)人防護(hù)裝備的使用（硬件）、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和管理規(guī)程等（軟件）：確保操作生物危險(xiǎn)因子的工作人員不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象的傷害；確保周圍環(huán)境不受其污染；確保實(shí)驗(yàn)因子保持原有本性所采取綜合措施的實(shí)驗(yàn)室。生物安全防護(hù)的基本原則(三要素)安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)裝置和措施。實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)和建設(shè)要求。嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序和規(guī)程目標(biāo)確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染的目的。生物安全實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的基本要求必須為實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行、清潔和維護(hù)提供足夠的空間。實(shí)驗(yàn)室的墻壁、天花板和地面應(yīng)光整、易清潔、防滲漏并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地板應(yīng)防滑。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面應(yīng)防水，并可耐消毒劑、酸、堿、有機(jī)溶劑和中等熱度的作用。應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有活動(dòng)的照明，避免不必要的反光和閃光。實(shí)驗(yàn)室器具應(yīng)堅(jiān)實(shí)耐用，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)、生物安全柜和其它設(shè)備之間及其下面要保證有足夠的空間以便進(jìn)行清潔。應(yīng)當(dāng)有足夠的儲(chǔ)存空間。應(yīng)當(dāng)有足夠的儲(chǔ)存空間擺放隨時(shí)使用的物品(試劑、氣體等)。在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)外應(yīng)當(dāng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施。還應(yīng)當(dāng)有供長(zhǎng)期使用的存儲(chǔ)空間。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)有洗手池，并最好安裝在出口處，盡可能用自來(lái)水(要有防止嚼齒動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物侵?jǐn)_的裝置)。實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)有可視窗，并達(dá)到適當(dāng)?shù)姆阑鸬燃?jí)，最好能自動(dòng)關(guān)閉。二級(jí)生物安全水平時(shí)，應(yīng)在靠近實(shí)驗(yàn)室的位置配備高壓滅菌器或其它清除污染的工具。安全系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)包括消防、應(yīng)急供電、應(yīng)急淋浴及洗眼設(shè)施。應(yīng)當(dāng)考慮設(shè)置機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，以使空氣向內(nèi)單向流動(dòng)。如果沒(méi)有機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室窗戶應(yīng)當(dāng)能夠打開(kāi)，同時(shí)安裝防蟲(chóng)紗窗。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)有基本生物安全設(shè)備：生物安全柜(一級(jí)或二級(jí)）、移液助器、乳膠手套等百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室與BSL-2實(shí)驗(yàn)室的區(qū)別百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室的潔凈度要求：空氣潔凈等級(jí)含塵濃度含菌濃度塵粒粒徑

(μm)塵粒數(shù)

（個(gè)／m3

）沉降菌

(Φcm碟0.5h）浮游菌

(個(gè)／m3)100級(jí)≥0.5≤3,500≤1≤5≥5010000級(jí)≥0.5≤350,000≤3≤100≥5≤2,000100000級(jí)≥0.5≤3,500,000≤10≤500≥5≤20,000大于100000

(相當(dāng)于300000級(jí))≥0.5≤10000000

≥5≤61800BSL-2實(shí)驗(yàn)室的主要技術(shù)指標(biāo)級(jí)別潔凈度級(jí)別最小換氣次數(shù)(次/h)與室外方向上相鄰相通房間的最小負(fù)壓差(Pa)溫度℃相對(duì)濕度%噪聲dB(A)最低照度lx一級(jí)_可開(kāi)窗_18~28≤70≤60200二級(jí)_可開(kāi)窗_18~2730~70≤60300三級(jí)7或815或12-1015~2530~60≤60350四級(jí)7或815或12-1018~2430~60≤60350二級(jí)生物安全防護(hù)水平(BSL－2）二級(jí)生物安全防護(hù)水平是指實(shí)驗(yàn)室的操作、安全設(shè)備、和設(shè)施適用于操作我國(guó)的第三類（少量二類）危害的致病微生物。二級(jí)生物安全防護(hù)水平適合于從未知病原的人身上取血、體液和組織的檢測(cè)和研究（可能含有高致病微生物）。BSL－2：實(shí)驗(yàn)室設(shè)施(二級(jí)屏障)BSL-2實(shí)驗(yàn)室生物安全標(biāo)識(shí)生物安全柜注意乳膠手套的使用風(fēng)淋室食品微生物無(wú)菌室的基本要求及管理無(wú)菌室的基本建設(shè)要求根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室所涉及的生物安全等級(jí)，無(wú)菌室的設(shè)計(jì)應(yīng)符合GB50364(生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù))和GB19489(生物安全通用要求)的相關(guān)要求。無(wú)菌室大小應(yīng)滿足檢驗(yàn)工作的需要。內(nèi)墻為淺色，墻面和地面應(yīng)光滑，墻面與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無(wú)縫隙，無(wú)死角，易于清潔與消毒。無(wú)菌入口處應(yīng)開(kāi)設(shè)緩沖間，緩沖間內(nèi)應(yīng)安裝非手動(dòng)式形關(guān)的洗手盆，并可有毛巾。緩沖間應(yīng)有足夠的面積以保證操作人員更換工作服和鞋帽。無(wú)菌室內(nèi)工作臺(tái)的高度約80cm，工作臺(tái)應(yīng)保持水平。工作臺(tái)面應(yīng)無(wú)滲漏，耐腐蝕，易于清潔、消毒。無(wú)菌室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，工作臺(tái)面的光照度應(yīng)不低于540lx。無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)具備適當(dāng)?shù)耐L(fēng)和溫度調(diào)節(jié)條件。無(wú)菌室的推薦溫度為20℃，相對(duì)濕度為40%~60%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其它適宜的消毒裝置。無(wú)菌室的管理無(wú)菌室在使用前和使用后應(yīng)進(jìn)行有效的消毒，消毒方法參見(jiàn)附錄D。無(wú)菌室的消毒效果應(yīng)至少每?jī)芍茯?yàn)證一次。應(yīng)制定清潔、消毒、滅菌、使用和應(yīng)急處理程序。應(yīng)建立環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果，并歸檔保存。不符合規(guī)定時(shí)應(yīng)立即停止使用。微生物實(shí)驗(yàn)室消毒處理方法無(wú)菌室紫外線消毒在室溫20℃~25℃時(shí)，220V30W紫外燈垂直1.0m處的253.7nm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70μW/cm2，低于此值時(shí)應(yīng)更換。紫外線消毒時(shí)，無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。在無(wú)人條件下，可采取紫外線消毒，作用時(shí)間應(yīng)≥30min，室內(nèi)濕度＜20℃或＞40℃、相對(duì)濕度＞60%時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)照射時(shí)間。用紫外線消毒物品表面時(shí)，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。人員在關(guān)閉紫外燈后至少30min方可入內(nèi)操作。按照ISO18953的規(guī)定，評(píng)價(jià)紫外線的消毒與殺菌效果。無(wú)菌室臭氧消毒封閉無(wú)菌室內(nèi)，無(wú)人條件下，采用20mg/m3濃度的臭氧，作用時(shí)間應(yīng)≥30min。消毒后臭氧濃度≤0.2mg/m3時(shí)方可入內(nèi)操作。按照GB/T18202的規(guī)定，檢測(cè)室內(nèi)臭氧濃度。無(wú)菌室空氣滅菌效果驗(yàn)證方法(沉降法)在消毒處理后與開(kāi)展檢驗(yàn)活動(dòng)之前期間采樣。取樣位點(diǎn)的選擇應(yīng)基于人員流量情況和做試驗(yàn)的頻率。一般情況下，無(wú)菌室面積≤30m2時(shí)，從所設(shè)定的一條對(duì)角線上選取3點(diǎn)，即中心1點(diǎn)，兩端各距墻1m處各取1點(diǎn)；無(wú)菌室面積≥30m2時(shí)，選取東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東點(diǎn)、西點(diǎn)、南點(diǎn)、北點(diǎn)均距墻1m。無(wú)菌室(≤30m2)無(wú)菌室(≤30m2)無(wú)菌室(≥30m2)采樣點(diǎn)設(shè)置圖

在所選位點(diǎn)，將平板計(jì)數(shù)瓊脂平板(90mm)或置于距地面80cm，開(kāi)蓋暴露15min，然后，置36℃±1℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h±1h。如果檢測(cè)某目標(biāo)霉菌或細(xì)菌，則可用選擇性瓊脂平板(如PDA、PALCAM等)。確定平板上的菌落數(shù)，如大于所設(shè)定的風(fēng)險(xiǎn)值，應(yīng)分析原因，并采取適當(dāng)措施。培養(yǎng)基與試劑的消毒與滅菌培養(yǎng)基通常應(yīng)采用高壓溫?zé)釡缇ǎ?21℃滅菌15min，特殊培養(yǎng)基按使用者的特殊要求進(jìn)行滅菌(如含糖培養(yǎng)基，115℃滅菌20min)。部分培養(yǎng)基(如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、膽硫乳培養(yǎng)基等)，只能煮沸滅菌。對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基或添加物質(zhì)，應(yīng)采用膜過(guò)濾的方法過(guò)濾除菌。即用型培養(yǎng)基不需滅菌，應(yīng)參見(jiàn)相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說(shuō)明書(shū)，直接使用。器具與設(shè)備的消毒滅菌溫?zé)釡缇翰捎酶邏簻缇鳎?21℃滅菌20min，適用于玻璃器皿、移液器吸頭、塑料瓶等。按照GB15981的規(guī)定，評(píng)價(jià)高壓滅菌器的殺菌效果。干燥滅菌：采用干燥箱滅菌，160℃，滅菌2h，適用于玻璃器皿和不銹鋼器具等。液體消毒劑消毒：使用適當(dāng)濃度自配或商業(yè)液體消毒劑對(duì)工作臺(tái)面、器具或設(shè)備表面進(jìn)行消毒。可按照GB15981的規(guī)定，評(píng)價(jià)自配或商業(yè)液體消毒劑的消毒效果。可按照ISO18953的規(guī)定，監(jiān)測(cè)工作臺(tái)面、器具或設(shè)備表面的消毒效果。實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理對(duì)于培養(yǎng)物及其污染的物品(如培養(yǎng)基、測(cè)試條、生物鑒定管、血清學(xué)鑒定用玻片、用過(guò)的移液器吸頭、細(xì)菌培養(yǎng)皿、注射器等)，應(yīng)使用適當(dāng)濃度的自配或商業(yè)液體消毒劑對(duì)其處理一定時(shí)間，或121℃高壓滅菌至少30min，或其他有效處理措施。將處理物倒入特殊標(biāo)志的垃圾袋內(nèi)，直接送到指定地點(diǎn)。部分消毒劑的特性消毒劑抗活性被滅活毒性真菌細(xì)菌分枝桿菌孢子親脂病毒非親脂病毒蛋白質(zhì)天然物質(zhì)合成物質(zhì)硬水去垢劑皮膚眼睛肺G+G_次氯酸鹽+++++++++++++++++++C+++乙醇-+++++++++-+V++++-+甲醛++++++++++++++