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文檔簡介
1、生物制品的純化分離法的普通程序?1)根據產品的分子構造和理化性質制訂出可行的分離純化辦法,然后破碎生物材料的組織細胞,提取生化產品的混合物,運用鹽析法,有機溶劑沉淀及其它沉淀劑等辦法對應的生化產品進行粗提,2)再運用電泳技術,色譜技術和膜分離等技術對粗體產品進一步分離化,3)最后可對純化產品進行鑒定并制成制劑,即完畢了對生化產品的制備2、免疫反映的基本過程?免疫反映從功效上能夠分為3個互有關聯的過程:1起始階段,免疫活性細胞識別抗原或抗原多肽與MHC復合物2激活階段:又稱增殖分化階段,淋巴細胞被激活,大量復制、分裂、增值,分泌多個細胞因子3反映階段,激活后的免疫細胞與感染的細胞互相作用將它們從人體內去除3、腫瘤壞死因子的生物學特性?1)抗腫瘤活性2)免疫調節作用3)炎癥活性4)促凝血活性5)抗病毒、抗細菌、抗真菌的作用6)熱原質活性7)參加骨質的吸取4、普通生物制品的制備辦法?1)原料的選擇、預解決和保存2)提取目的產物3)分離純化目的產物5、蛋白類制品分離純化辦法?根據蛋白質分子大小、形狀和密度差別進行分離純化:1)過濾盒超出濾技術2)離心和超離心技術3)凝膠過濾層析技術4)透析運用蛋白質的電性進行分離純化1)等電點沉淀2)離子交換層析3)電泳和等電聚焦電泳運用蛋白質的親水性和疏水性分離:1)鹽析法2)乙醇和聚乙二醇沉淀法3)疏水層析法運用蛋白質的化學性質分離純化:1)辛酸沉淀法2)利凡諾沉淀3)固相化染料柱層析4)螯合柱層析運用蛋白質的生物學活性分離純化重要有親和層析法運用蛋白質多個結合能力,用羥基磷灰石層析分離純化6、工程菌的構成及保存辦法?構成:目的基因、載體、受體細胞保存辦法:普通采用將工程菌種凍干后封存于菌種管內再作低溫保存的辦法7、血清學實驗的辦法和原理?所謂血清學實驗是指體外抗原抗體反映實驗,抗原抗體反映含有高度的特異性,用已知的一方檢測另一方,抗原抗體在體外結合時,可因抗原的物理性狀不同或參加反映的成分不同出現多個類型的反映8簡述生物反映器的基本類型和特點1攪拌式生物反映器合用于大多數的生物過程,即用于微生物的發酵,也廣泛用于動植物細胞的大量培養2氣升式生物反映器氣體通過裝在罐低的噴管進入生物反映器的導流管致使該部分液體的密度不大于導流管外部區域的液體密度,從而使液體循環流動3中空纖維式生物反映器既可適于貼壁細胞培養,也合用于懸浮細胞培養4透析袋或膜式生物反映器可將有害代謝產物透析或過濾掉,從而使細胞生長更高密度,同時可根據需要選用不同相對分子質量的膜,使產物保存在膜內或與細胞分開5固定床或流化床式生物反映器能夠重復運用生物催化劑,便于講生物催化劑與反映產物分開9疫苗的第二次革命重要是那些背面?1重組DNA技術2蛋白質化學3單克隆抗體技術10疫苗的基本成分有哪些?1抗原2佐劑3防腐劑4穩定劑5反活劑及其它有關成分11疫苗的基本性質1免疫原性2安全性3穩定性12疫苗的種類有哪些?1傳統疫苗:a滅火疫苗b減毒c亞單位或成分2新型育苗a基因工程b遺傳重組c合成肽d抗獨特型抗體e微膠囊13聯合疫苗中各抗原的互相作用重要指那些?1加強反映2克制反映3機體已有的免疫力對新抗原應答的干擾14常見免疫佐劑的類型1鋁佐劑2礦物油乳劑3植物油佐劑4植物來源佐劑5細菌來源佐劑6人合成佐劑7細胞因子佐劑15免疫系統涉及那兩個部分?涉及先天性的非特異免疫系統和后天性的特異性免疫系統。先天性免疫系統由一系列物理屏障、細胞、細胞因子和蛋白質構成。獲得性免疫系統則重要由T淋巴細胞、B淋巴細胞和抗原提呈細胞,以及它們分泌的多個細胞因子所構成。16常見的免疫活性細胞及類型?1)淋巴細胞:B淋巴細胞、T淋巴細胞、自然殺傷細胞2)抗原提呈細胞:單核-巨噬細胞、樹突狀細胞、APC3)粒細胞:嗜中性粒細胞、嗜堿性粒細胞及肥大細胞、嗜酸性粒細胞17傳統疫苗和新型疫苗有何不同?傳統疫苗是采用病原微生物及其代謝產物經人工減毒,脫毒,滅活等辦法制成的疫苗。新型疫苗則是通過基因工程技術和生物化學合成技術生產的疫苗。18基因工程亞單位疫苗的體現系統用于亞單位疫苗生產的體現系統重要有大腸桿菌,枯草桿菌,酵母,昆蟲細胞,哺乳動物細胞,轉基因植物,轉基因動物等。體現系統的選擇重要考慮其體現抗原的免疫原性,體現效率及產物純化的難易程度。19構建核酸疫苗的基本操作流程核酸疫苗由編碼目的抗原的的基因和質粒體現載體兩部分構成,因此首先要明確目的基因幾對目的基因的提取,然后就是DNA疫苗載體的選用。核酸疫苗的特點(1)誘導機體產生全方面的免疫應答,其保護免疫應答對不同亞型的病原體含有交叉抵抗作用(2)無病毒,滅活疫苗引發的致病作用,含有可靠的安全性(3)能體現經修飾的天然抗原(4)與亞單位疫苗同樣含有高產性(5)可將編碼不同抗原的基因構建在同一種質粒中(6)DNA含有防止作用,也有治療作用(7)生產簡便,成本低廉,穩定性好,儲運方便(8)易于快速篩選含有免疫作用的基因(9)能定向誘導以Th1和為Th2主導的免疫應答20基因工程疫苗的發展重點(1)重要研究常規技術不能解決或很難解決的新疫苗(2)主動進行傳統疫苗的改造(3)加強治療性疫苗的研究(4)發展多價疫苗21細菌類疫苗的種類和制備辦法種類:減毒疫苗,滅活疫苗,亞單位疫苗或成分疫苗制備辦法:(1)用人工誘變的辦法哺育出弱毒菌株或無毒菌株而制成的(2)將自然強毒株或原則菌株人工大量哺育后,經加熱解決或福爾馬林,戊二醛,B-丙內酯等化學解決制成(3)細菌培養液中提取、用化學辦法、脫毒22細菌外毒素的基本特性和簡樸生產流程特性:1毒性強2含有親組織性3具抗原性4是一種雙組分構造蛋白質生產流程:1產毒2脫毒3精制23病毒類疫苗的培養辦法1細胞培養2雞胚培養法3動物培養法24血漿的生物學功效1運輸功效2維持內環境的穩態3參加凝血-纖溶等生理性止血功效和營養功效4參加體液調節和防衛功效25簡述白細胞的種類和各自的作用1嗜中性粒細胞:炎癥時進入組織,吞噬作用與巨噬細胞相似,無抗原提呈和免疫調節作用2嗜堿粒細胞及肥大細胞:含有組織胺,嗜堿性粒細胞表面體現IgE受體,可誘發I型細胞過敏反映3嗜酸性粒細胞:表面含有Ig受體,能吞噬與銷毀組胺顆粒與抗原體復合物,引發Ig免疫應答反映,但不能吞噬病原異物26簡述RH血型系統RH抗原只存在于紅細胞膜上,不存在與其它組織細胞和體液中。RH血型系統是紅細胞血型中最復雜的一種系統,現在已發現46個RH抗原,與臨床關系親密的是D、C、E、C、e五種抗原。其中,D抗原的抗原性最強。普通將紅細胞上含有D抗原者稱為RH陽性,缺少者稱為RH陰性27細胞因子的種類及其作用1干擾素除含有抗病毒作用外,尚有抗腫瘤、免疫調節、控制細胞增殖、引發發熱等2集落刺激因子有集落刺激活化,不同的CSF對不同發育階段的造血干細胞和造血細胞起促增殖化分作用,是血細胞發生不可少的刺激因子3白細胞介素有重要的介導作用4腫瘤壞死因子除含有殺腫瘤外,TNF還可引發炎癥反映5趨化因子調節淋巴細胞和巨噬細胞的趨化性,激活巨嗜/單核細胞,增進定向造血干細胞的增殖,增進內皮細胞的某些轉化細胞的功效。在體炎癥反映和抗感染及創傷愈合中起作用6生長因子對機體不同細胞有增進生長作用28簡述細胞因子的特性1來源的多樣性:一種因子源于多個細胞或同種刺激物可誘發同種細胞產生多個細胞因子2多效性:一種細胞因子能夠有多個生物學活性3高效性:有微量,高效的特性4快速反映性5兩面性:含有生理和病理性6理化性質:絕大多數的細胞因子為小分子的分泌性多肽或蛋白質,多數細胞因子為單鏈構造,部分為同源雙體構造,不同的細胞因子的氨基酸序列有很大差別,某些細胞因子的基因是連鎖的1、聯合免疫:采用多個含有免疫原性的抗原聯合制成多聯或多價疫苗,注射這種疫苗克防止多個傳染病或相似疾病的不同亞型,也可將多個疫苗同時進行免疫接種,已達成防止多個傳染病的目的。2、免疫佐劑:凡非特異地通過物理或化學的方式與抗原結合而增強其特異免疫性的物質3、先天性免疫系統:是人體天生含有的免疫保護系統,涉及四道重要防線,即物理防線、生理防線、吞噬細胞防線和感染反映防線。4、基因工程亞單位疫苗:又稱生物合成亞單位疫苗或重組亞單位疫苗,重要是指將病原微生物的抗原基因用分子生物學的辦法分離,然后與載體DNA相連接,再經載體將抗原基因帶進受體進行復制與體現,最后將基因工程體現的蛋白質抗原分離純化后制成的疫苗。5、腫瘤壞死因子:是一類含有廣泛生物學活性的細胞因子,能引發腫瘤出血性壞死。對多個正常細胞含有廣泛的免疫生物學活性。6、單克隆抗體:是將抗體產生細胞與含有無限增值能力的骨髓瘤細胞相融合,通過有限稀釋法及克隆花使雜交瘤細胞成為純的單克隆細胞系而產生。7、抗原:指能夠刺激機體產生免疫應答,并能與免疫應答產生抗體和致敏淋巴細胞在體內外結合,發生免疫效應的物質。8、轉基因植物疫苗:通過介導特定的外源基因來獲得轉基因植物,以改良植物、研究植物功效,生產含有重要經濟價值的蛋白質。9、細胞因子:是人類或動物的各類細胞分泌的含有多樣性生物活性的因子,是一組可溶性的不均一的蛋白質分子,能夠調節細胞的生長與分化10、類毒素:是一種主動免疫制劑,用于細菌毒素性疾病的防止,涉及白喉、破傷風等類毒素。11、滅火疫苗:是將自然強毒株或原則菌株人工大量培養后,經加熱解決或福爾馬林、戊二醛、B-丙內酯等化學解決制成的。滅火疫苗需加工佐劑以提高其免疫效果。12、集落刺激因子:是一類能參加造血調節過程的酸性糖蛋白分子,在體外培養中能刺激骨髓造血細胞分化增值為細胞集落,又稱造血刺激因子或造血調節因子。13、疫苗:是一種特殊的藥品,一類由免疫學的經驗、理論和生物技術共同發展而產生的生物制品,它與普通藥品含有明顯的不同,重要用于健康人群,通過免疫機制防止疾病發生。14、離子交換層析:是以離子交換劑為固定相,根據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析辦法。15、蛋白質等電點沉淀:當蛋白質溶液的PH=pI時,蛋白質的凈電荷為0,因而失去了水化和分子間相斥的作用,疏水性氨基酸殘基暴露,蛋白質分子互相靠攏、聚集,最后形成沉淀析出,即等電點沉淀。16、免疫原性:指疫苗接種進入機體產生免疫應答的強度和持續時間,影響因素涉及:1,抗原的強弱、大小和隱定性2,抗原的理化性質17、獲得性免疫系統:是在抗原誘導下形成的,它涉及中樞免疫系統、外周免疫器官及多個組織中的免疫細胞、多個免疫活性介質等18、亞單位疫苗:是運用單一蛋白質抗原分子來誘導免疫反映的填空題:基因工程技術是生物技術的核心技術。當代生物技術是以20世紀70年代DNA重組技術的建立為標志。PCR涉及三個環節_變性,退火,延伸基因工程的實施涉及四個必要條件:工具酶、基因、載體和受體細胞。限制性內切酶酶切DNA片斷后普通有兩類末端:平末端、黏性末端。基因組文庫中涉及有內含子和外顯子,而cDNA文庫中則不含內含子生物技術重要是指基因工程、細胞工程、酶工程、發酵工程、蛋白質工程。基因工程操作流程重要涉及目的基因分離、與克隆載體重組、轉入受體細胞、篩選和鑒定克隆子。細胞工程涉及植物細胞的體外培養技術、細胞融合技術、細胞器移植技術、克隆技術、干細胞技術。酶工程涉及酶的固定化技術、細胞的固定化技術、酶的修飾改造技術、酶反映器的設計等技術。酶的生產辦法有提取法,發酵法和化學合成法。酶分子修飾的重要目的是改善酶的性能,即提高酶的活力、減少抗原性,增加穩定性。蛋白質工程的目的是根據對蛋白質功效的特定需求,對蛋白質構造進行分子設計,根據中心法則便能夠改造天然蛋白質。簡答題基因工程操作過程的重要環節有哪些?①分離或合成基因;②通過體外重組將基因插入載體;③將重組DNA導入細胞;④擴增克隆的基因;⑤篩選重組體克隆;⑥對克隆的基因進行鑒定或測序;⑦控制外源基因的體現;⑧得到基因產物或轉基因動物、轉基因植物一種抱負的用作克隆載體的質粒必須滿足的條件是什么?(1)含有轉錄復制起始點。(2)含有抗菌素抗性基因。(3)含有若干限制酶切單一識別位點。(4)含有較小的分子量和較高的拷貝數。基因工程研究的理論根據是什么?(1)不同基因含有相似的物質基礎。(2)基因是可切割的(3)基因是能夠轉移的(4)多肽與基因之間存在對應關系(5)遺傳密碼是通用的(6)基因能夠通過復制把遺傳信息傳遞給下一代分離目的基因的途徑有哪些?(1)酶切法(2)PCR法(3)化學合成法(4)基因組或cDNA文庫法目的基因克隆的基本辦法有哪些?(1)直接從染色體DNA中分離:僅合用于原核生物、葉綠體和線粒體基因的分離,較少采用。(2)人工合成:根據已知多肽鏈的氨基酸次序,運用遺傳密碼表推定其核苷酸次序再進行人工合成。適應于編碼小分子多肽的基因。(3)從mRNA合成cDNA:采用一定的辦法釣取特定基因的mRNA,再通過逆轉錄酶催化合成其互補DNA(cDNA),除去RNA鏈后,再用DNA聚合酶合成其互補DNA鏈,從而得到雙鏈DNA。這一辦法普通可得到可體現的完整基因。(4)運用PCR合成:如已知目的基因兩端的序列,則可采用聚合酶鏈反映(polymerasechainreaction,PCR)技術,在體外合成目的基因。(5)從基因文庫中篩選:首先建立基因組或cDNA文庫,運用探針從文庫中篩選目的克隆。cDNA文庫和基因組文庫的重要差別有哪些?(1)基因組文庫克隆的是任何基因,涉及未知功效的DNA序列;cDNA文庫克隆的是含有蛋白質產物的構造基因,涉及調節基因。(2)基因組文庫克隆的是全部遺傳信息,不受時空影響;cDNA文庫克隆的是不完全的編碼DNA序列,因它受發育和調控因子的影響。(3)基因組文庫中的編碼基因是真實基因,含有內含子和外顯子,而cDNA文庫克隆的是不含內含子的功效基因。重組DNA導入受體細胞辦法有哪些?(1)化合物誘導法(2)電穿孔法(3)農桿菌介導基因轉化法(葉盤法)(4)微彈轟擊法(5)超聲波解決法(6)脂質體介導法(7)體內注射轉化法(8)精子介導法工業化菌種的規定是什么?(1)原料便宜、生長快速、繁殖能力強、目的產物產量高。(2)發酵中產生的泡沫少,易于控制培養條件,酶活性高,發酵周期短。(3)抗雜菌和噬菌體的能力強。(4)不產生或少產生與目的產物相近的幅產物。(5)菌種遺傳性穩定,不易變異和退化(6)不產生任何有害的生物活性物質和毒素,確保安全生產。什么是種子的擴大培養?種子擴大培養是發酵生產的第一道工序。就是將保存在砂土管、冷凍干燥管中處在休眠狀態的生產菌種接種到試管斜面活化后,再通過搖瓶及種子罐逐級擴大培養而獲得一定數量和質量的純種過程。34、什么是蛋白質工程?是以對蛋白質構造和功效關系的認識為根據,借助基因工程技術和X-射線衍射分析技術,從基因入手,通過定點突變變化核苷酸次序,以達成改造現有蛋白質分子、或發明新的蛋白質分子目的的技術學科。何謂固定化酶?固定化酶的特性與游離酶的比較有哪些變化?固定化酶是指固定在一定載體上并在一定的空間范疇內進行催化反映的酶。固定化酶既保持了酶的催化功效,又克服了游離酶的局限性之處,含有提高酶的催化效率,增強穩定性,可重復或持續使用以及易于和反映產物分開等明顯優點。固定化酶與游離酶比較,其催化特性重要有下列變化:(1)固定化酶的穩定性普通比游離酶的穩定性好,重要體現在:對熱穩定性提高,能夠耐受較高的溫度;保存穩定性好,能夠在一定條件下保存較長時間;對蛋白酶的抵抗性增強,不易被蛋白酶水解;對變性劑耐受性提高,在尿素、有機溶劑和鹽酸胍等蛋白質變性劑的作用下,仍可保存較高的酶活力等。(2)固定化酶的最適作用溫度普通與游離酶差不多,活化能也變化不大,但也有些固定化酶的最適溫度與游離酶比較會有較明顯的變化。(3)酶通過固定化后,其作用的最適pH往往會發生某些變化。(4)固定化酶的底物特異性與游離酶比較可能有些不同,其變化與底物相對分子質量的大小有一定關系。對于那些作用于低分子底物的酶,固定化前后的底物特異性沒有明顯變化。而對于那些可作用于大分子底物,又可作用于小分子底物的酶而言,固定化酶的底物特異性往往會發生變化。轉基因食品的優點有哪些?(1)可延長蔬菜的貨架期及感官特性。(2)提高食品的品質。(3)提高食品的營養。(4)提高肉、奶和畜類產品的數量和質量。(5)增加農作物抗逆能力,增加農業產量。(6)生產可食性疫苗或藥品(7)生物功效性食品什么是生物農藥?生物農藥是“可用來防治病、蟲、草等有害生物的生物體本身或源于生物,并可作為‘農藥’的多個生理活性物質”。生物農藥可分為生物體農藥和生物化學農藥。生物農藥本身含有的對人畜毒性小,只殺害蟲,與環境相容性好以及病蟲害相對不易產生抗性等優點。簡述疫苗的概念,并簡述三代疫苗的特點?疫苗:廣義的疫苗是指將病原微生物(如細菌、立克次氏體、病毒等)及其代謝產物,通過人工減毒、滅活或運用基因工程等辦法制成的用于防止傳染病的自動免疫制劑。其中,由細菌制成的稱為菌苗;由病毒、立克次體、螺旋體等制成的稱為疫苗。第一代疫苗:19世紀中葉,法國科學家Parsteur首先發明了減毒疫苗的制備技術。用病原體減毒或弱化制成疫苗,稱之為第一代疫苗。特點:以減毒、弱化或滅活的病原體做疫苗。第二代疫苗(基因工程疫苗):將病原體的抗原(某種蛋白質)基因克隆在細菌或真核細胞內,運用其生產的病原體抗原作為疫苗。特點:運用病原體的某些抗原成分作為疫苗。第三代疫苗(核酸疫苗):將含有編碼病原體抗原基因序列的質粒載體直接作為疫苗,經肌肉注射或微彈轟擊等辦法導入體內,通過宿主細胞體現系統體現抗原蛋白,誘導宿主產生對該抗原蛋白的免疫應答。特點:用含有病原體抗原基因序列的質粒載體直接作為疫苗。如何運用微生物勘探石油和提高采油量?微生物二次采油技術的基本原理:運用微生物能在油層中發酵并產生大量的酸性物質以及H2、CO2及甲烷等氣體的生理特點,產氣增加地層壓力、酸性物質減少原油黏度,發酵產物含有表面活性劑作用。采油量可提高20%-34%。微生物三次采油原理運用微生物分子生物學技術構建能產生大量CO2和甲烷等氣體的基因工程菌株或選育能提高產氣量的高活性菌株。讓這些工程菌能在油層中不僅產憤怒體增加井壓,并且還能分泌高聚物,糖酯等表面活性劑,減少油層表面張力,使原油從巖石中、沙土中松開,黏度減低,從而提高采油量。什么是生物修復技術?生物修復是運用生物,特別是微生物的代謝活動來減少或去除污染環境中的化學污染物的過程。這種技術涉及生物催化進行的降解、去毒或積累作用,并且可用于大面積污染環境的治理,又稱為生物改善、生物挽救、生物再建或生物解決等。生物修復的技術大致可分為原位生物修復和異位生物修復兩類。原位生物修復中的污染對象不需移動,解決費用低,但解決過程控制比較難。異位生物修復需要通過某種辦法將污染對象轉移到污染現場之外,再進行解決。生物技術領域的發明涉及哪些?①轉基因動物和植物品種發明;②微生物及遺傳物質發明;③生物制品發明;④獲得生物體的生物學辦法或遺傳工程學辦法發明;⑤微生物學辦法發明;⑥基因治療辦法發明等。生物技術專利保護的兩個核心問題是什么?①如何擬定生物技術領域中的科學發現和發明的界限,特別是有關基因的發明與發現問題。②如何界定一種符合專利申請的與生命物質有關的發明,以及對此項發明該予以多大范疇的保護。生物技術:也稱生物工程,是人們以當代生命科學為基礎,結合先進的工程技術手段和其它基礎科學的科學原理,按照預先的設計,改造生物體或加工生物原料,為人類生產出所需產品或達成某種目的的一門新興的、綜合性的學科。基因組DNA文庫:將某一種基因DNA用適宜的限制酶切斷后,與載體DNA重組,再全部轉化宿主細胞,得到含全部基因組DNA的種群,稱為基因組DNA文庫。或:把某種生物基因組的全部遺傳信息通過載體貯存在一種受體菌克隆子群體中,這個群體即為這種生物的基因組文庫。cDNA文庫:即由mRNA通過反轉錄成cDNA,然后來構建文庫,構建的文庫不包含內含子。基因和基因組DNA分子中含有特定生物學功效的片段稱為基因(gene)。一種生物體的全部DNA序列稱為基因組(genome)載體:把一種有用的目的DNA片段通過重組DNA技術,送進受體細胞中去進行繁殖或體現的工具稱為載體。轉化:外源DNA導入宿主細胞的過程稱之為轉化。細胞工程:以生物細胞
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