實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱：__病原與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)_________指導(dǎo)老師：_________成績(jī)：__________________實(shí)驗(yàn)名稱：__細(xì)菌分離培養(yǎng)與生化鑒定___實(shí)驗(yàn)類型：___觀察與操作____實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)菌生長(zhǎng)條件，細(xì)菌在液體、固體斜面、半固體、平板的生長(zhǎng)狀態(tài)。掌握細(xì)菌生化鑒定反應(yīng)（培養(yǎng)基、原理、結(jié)果）。熟悉掌握細(xì)菌的分離接種方法，分區(qū)劃線法。實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)材料：普通瓊脂平板2塊，咽拭子、血平板，接種環(huán)，酒精燈，培養(yǎng)有相應(yīng)細(xì)菌的各培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)方法：參見(jiàn)教材第15-21頁(yè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沉淀菌膜沉淀菌膜圖1：細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)左一是谷草芽孢桿菌，為專性需氧菌，一般呈表面生長(zhǎng)，形成菌膜，但是由于拿試管時(shí)有震蕩改變了表面張力，菌膜便沉至試管底部，但依舊可見(jiàn)菌膜。左二是乙型鏈球菌，試管底部有沉淀，細(xì)菌呈現(xiàn)沉淀生長(zhǎng)右一是大腸桿菌，均勻混濁生長(zhǎng)穿刺線BA穿刺線BA圖2.細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)半固體培養(yǎng)基接種法——穿刺接種法。在半固體培養(yǎng)基中，有鞭毛菌能運(yùn)動(dòng)，而無(wú)鞭毛菌則不能運(yùn)動(dòng)A：大腸桿菌半固體培養(yǎng)基渾濁，細(xì)菌接種線消失，此培養(yǎng)基接種有菌毛菌即大腸桿菌具有鞭毛B：痢疾桿菌半固體培養(yǎng)基僅有穿刺線變粗，周圍培養(yǎng)基仍為原來(lái)透明度，此培養(yǎng)基接種無(wú)鞭毛菌即痢疾桿菌無(wú)菌毛圖3平板分離劃線接種法（白色葡萄球菌）注意觀察平板表面單個(gè)菌落生長(zhǎng)情況（菌落呈白色，較大，圓形，較密）A：⊕B：A：⊕B：+C：—圖4糖發(fā)酵試驗(yàn)（指示劑：溴甲酚紫指示劑，變色pH范圍5.2~6.8，顏色由黃變紫）A：培養(yǎng)基變黃說(shuō)明產(chǎn)酸，里面小管中有氣泡說(shuō)明產(chǎn)氣，所以大腸桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。B：培養(yǎng)基變黃說(shuō)明產(chǎn)酸，里面小管中無(wú)氣泡說(shuō)明不產(chǎn)氣，故傷寒沙門菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。C：培養(yǎng)基不變黃且無(wú)氣泡產(chǎn)生，故產(chǎn)堿桿菌不能分解葡萄糖。+紅色玫瑰吲哚—+紅色玫瑰吲哚—圖5吲哚試驗(yàn)右試管：液面表面形成了紅色的玫瑰吲哚，為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。說(shuō)明大腸桿菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成物色的吲哚與吲哚試劑形成紅色的玫瑰吲哚左試管：培養(yǎng)基無(wú)任何明顯變化，為吲哚試驗(yàn)陰性，說(shuō)明肖式沙門菌中沒(méi)有色氨酸酶?！?—+圖6硫化氫試驗(yàn)左試管：培養(yǎng)基穿刺部位變黑，硫化氫試驗(yàn)為陽(yáng)性，說(shuō)明變形桿菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽形成黑褐色的硫化鉛或者硫化亞鐵沉淀物右試管：培養(yǎng)基不變色僅變渾濁，硫化氫試驗(yàn)為陰性。說(shuō)明大腸桿菌無(wú)法分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸?！?—+圖7尿素分解試驗(yàn)（酚紅指示劑，遇堿變紅色）右試管：培養(yǎng)基顏色變?yōu)榧t色，呈陽(yáng)性，說(shuō)明培養(yǎng)基呈堿性，則變形桿菌具有尿素分解酶，能分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基呈堿性。左試管：培養(yǎng)基不變色，為尿素分解試驗(yàn)陰性，說(shuō)明志賀菌不具有尿素分解酶圖8空氣中的細(xì)菌培養(yǎng)（將普通培養(yǎng)基放在實(shí)驗(yàn)桌上的玻璃器皿上方暴露在空氣中10min，適宜環(huán)境中培養(yǎng)1天）培養(yǎng)基中的菌落較小且數(shù)目較少，呈白色。說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室的空氣中細(xì)菌較少，較干凈。BABA圖9手指皮膚的細(xì)菌檢測(cè)（試驗(yàn)者：組員顏承曦）A洗手前：菌落大小不一，數(shù)目多且較密集，呈白色。B用藍(lán)月亮洗手液洗手后：菌落數(shù)目明顯減少，但是仍較多，菌落大小比A中大，呈白色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明使用藍(lán)月亮洗手液洗手減少，但細(xì)菌仍有殘留，可能原因：1、洗手時(shí)沒(méi)有搓洗干凈，沒(méi)有按洗手步驟搓洗手；2、洗手液的并不能完全除去手指表面細(xì)菌；3、洗完手后按培養(yǎng)基前不慎又觸碰到表面有菌的物品。圖10健康人咽喉部細(xì)菌的分離（分區(qū)劃線分離法）分離后大致可看出至少3種菌落：其一顯示淺黃色菌落，菌落較大，圓形（黃色箭頭所指）；其二為白色菌落，菌落較大，圓形（白色箭頭所指），其三為草綠色溶血環(huán)，較小，不是很明顯（綠色箭頭所指）背景顏色加深，發(fā)生α溶血。分析討論裝訂線劃線分離時(shí),使接種環(huán)環(huán)面與平板表面約成30°，以腕力在平板表面行輕快的滑移動(dòng)作，注意勿使培養(yǎng)基表面劃破。劃線前須燒灼接種環(huán)以殺死環(huán)上剩余細(xì)菌，冷卻后再劃線2區(qū)，劃畢，再通過(guò)