背角無齒礦中血細胞的結構和功能

目前，山羊美學的研究主要集中在對其血漿的分類和作用上。關于貝殼貝殼的分類有許多報道，但對貝殼血漿的類型和數量的描述存在很大差異。松棗和菲律賓沙棗的紅細胞通常分為兩種。圓仁亞美和淺溝貝殼的紅細胞分為三種。海灣貝殼工人的紅細胞分為四種類型。此外，文獻中還報道了四種類型的淡水貝類文獻、漢江河豚殼、橢圓形背景艦和三角帆殼的血漿。本作者將背部無齒貝訓的紅細胞分類給水生百合屬植物，并對其進行了透射電視分析，以為本生物它們的提供理論依據。1材料和方法1.1材料表面背角無齒蚌于2008年10—12月分批采集于江西省鄱陽湖,體長6~12㎝.室溫下,在水簇箱內暫養3~5d后開始試驗.1.2方法1.2.1血淋巴之混合、制備取健康蚌,用2.5mL(0.6×25針頭)注射器從后閉殼肌取血.血淋巴以1∶2比例與Alsever’s液(葡萄糖20.8g/L,檸檬酸三鈉8.0g/L,氯化鈉22.5g/L,pH7.2)混合,備用.1.2.2活佛紅細胞的檢測取血淋巴2.5mL滴于載玻片上,蓋上蓋玻片,靜置約20min,用OlympusCX41顯微鏡觀察.1.2.3中性樹膠電泳取血淋巴2.5mL滴于載玻片上,靜置30min,吸去上層清液,晾干,滴加Wrights染色液染色10min,加入等量的PBS,染色10min,PBS沖洗,50%乙醇分色,晾干,中性樹膠封片后觀察.1.2.4-三甲基-5-戊二醛的合成取血淋巴20mL,分裝于2個10mL的離心管內,3000r/min離心10min,除去血清,加2.5%戊二醛,固定1~2h,以0.1mol/mL的二甲胂酸緩沖液洗滌,1%OsO4后固定、酒精脫水,Epon包埋、VltracutE型超薄切片機切片,在日立H-600型電子顯微鏡下觀察.加速電壓為60kV.1.2.5紅細胞計數取30只健康蚌,每只蚌抽血1次,抗凝處理,用血球計數板計數.每毫升血細胞數=測得血細胞數×50000×稀釋倍數.1.2.6紅細胞形態和細胞系統細胞直徑.取抗凝血淋巴2.5mL,滴于載玻片上,蓋上蓋玻片,在27℃培養箱內孵育20min,用帶目鏡測微尺的光學顯微鏡測量血細胞直徑和核直徑,細胞直徑以除偽足外的最長軸為準,核直徑以核的最長軸為準.每種細胞各測100個.測量數據采用SPSS軟件進行多層比較分析.2顆粒細胞非構造細胞的形態特征顯微鏡下,背角無齒蚌明顯有兩大類型的血細胞:顆粒細胞和無顆粒細胞.顆粒細胞和無顆粒細胞又有不同的形態特征.根據細胞和胞質內顆粒的大小特征可以將顆粒細胞分為大顆粒細胞和小顆粒細胞.根據細胞大小和核質比的差異特征又可將無顆粒細胞分成透明細胞和淋巴樣細胞.2.1wmaxs染色的細胞質和細胞器特性顆粒細胞明顯的特征是細胞質內含有許多顆粒,細胞核相對較小,核偏位,核質比低.大顆粒細胞(Lg):活體細胞為圓形或橢圓形,體積比其他血細胞大.細胞內有折光率高的大顆粒.細胞一般不伸出偽足或伸出很短的偽足.細胞核常被大顆粒所覆蓋.大顆粒細胞通常易破裂,出現脫顆粒現象(封三圖1-A).Wrights染色后胞質內顆粒為嗜酸性,呈現紫紅色或鮮紅色,細胞核藍紫色(封三圖1-a).電鏡觀察發現胞質內有許多電子密度高的大顆粒.細胞核呈橢圓形或圓形,染色質均勻.胞質內可見內質網和高爾基器等細胞器(封三圖2-a).小顆粒細胞(Sg):活體細胞呈圓形、橢圓形或不規則形狀,細胞易變形,細胞伸出指狀或根狀偽足.小顆粒細胞明顯小于大顆粒細胞,胞質內含有較多的小顆粒,折光率較高(封三圖1-B).Wrights染色后細胞表現出嗜酸性和嗜堿性兩種,嗜酸性小顆粒細胞的胞質為淡紅色,顆粒呈深紅色,細胞核深藍色.嗜堿性小顆粒細胞的胞質呈淡藍色,顆粒呈深藍色,細胞核藍黑色(封三圖1-b,c).電鏡觀察發現胞質內有許多電子密度高的小顆粒,細胞核呈圓形或腎形,染色質較均勻.細胞質內可見內質網、高爾基器等細胞器(封三圖2-b).2.2w水生植物細胞生物學.無顆粒細胞明顯的特征是胞質內不含有顆粒或含有少量的顆粒,細胞核較大,核質比高.透明細胞(HC):活體細胞呈圓形或不規則形狀,伸出的偽足呈片狀或根狀.胞質內無顆粒或有少量顆粒,細胞核呈圓形或橢圓形(封三圖1-C).Wrights染色發現部分細胞呈嗜酸性,胞質為淡紅色,核為深藍色;另一部分細胞呈嗜堿性,胞質為淡藍色,核為深藍色(封三圖1-d,e).電鏡觀察到胞質內無明顯的顆粒,但有高爾基體,內質網等細胞器.細胞核橢圓形,內有濃縮的染色質(封三圖2-c).淋巴樣細胞(LY):活體細胞為圓形,很少伸出偽足,細胞體積相對其他血細胞的體積小,細胞內無顆粒,細胞核圓形,居中(封三圖1-D).Wrights染色發現細胞呈嗜堿性,胞質為淡藍色,核為深藍色(封三圖1-f).電鏡觀察到細胞中電子密度低,無顆粒,細胞核為橢圓形或圓形,有濃縮的染色質.胞質內細胞器少(封三圖2-d).2.3細胞類型和分布測得背角無齒蚌血細胞濃度為(2.42±0.38)×106/mL,其中小顆粒細胞和透明細胞為主要的細胞類型,所占比例分別為59.28%和27.74%.大顆粒細胞和淋巴樣細胞相對較少,所占比例分別為4.28%和8.7%.2.4紅細胞直徑和核質比從表1可以看出,4種血細胞中大顆粒細胞的直徑最大,淋巴樣細胞的直徑最小.統計分析發現,4種血細胞的直徑存在顯著差異.淋巴樣細胞的細胞核直徑最大,小顆粒細胞的細胞核直徑最小,血細胞的核直徑之間沒有顯著差異.另外,淋巴樣細胞的核質比最大,大顆粒細胞的核質比最小.3背角無齒鉗細胞的細胞分析貝類血細胞的分類通常依據血細胞的形態特征進行.由于其形態特征存在較大變化,因此,建議結合血細胞的生理生化特性及其功能進行分類.Cheng認為貝類血細胞細胞質中含有許多顆粒的是顆粒細胞,胞質中沒有或有少量顆粒的是無顆粒細胞.事實上,貝類血細胞存在許多過渡類型.根據血細胞和細胞質內顆粒的大小,顆粒細胞還能夠分成大顆粒細胞和小顆粒細胞.劉東武等利用流式細胞儀分析菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)的血細胞,發現除了大顆粒細胞和小顆粒細胞外,還有介于兩者之間的血細胞,稱為中顆粒細胞.另外,根據細胞內顆粒的組織化學特性還能夠將顆粒細胞分為大嗜酸性顆粒細胞和小嗜酸性顆粒細胞或嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞.筆者發現背角無齒蚌的顆粒細胞除了細胞和顆粒大小有較大差異外,顆粒細胞的形態及伸展情況也存在較大的差別.有些細胞很少伸出偽足,而另一些則常伸出根狀偽足,因此,筆者將背角無齒蚌的顆粒細胞分為大顆粒細胞和小顆粒細胞.Zhang等和羅文等通過透射電子顯微鏡發現大顆粒細胞內含有電子密度高的大顆粒.在背角無齒蚌的大顆粒細胞中同樣發現了許多直徑較大的顆粒,電子密度也較高.Nakayama等與沈亦平等描述的漿液細胞也具有大顆粒細胞的類似特征,可能與本研究中的大顆粒細胞是同一類細胞.此外,Zhang等發現大顆粒細胞是多核細胞,而本研究與陳全震等僅觀察到單核的大顆粒細胞,并且發現大顆粒細胞容易出現脫顆粒的現象.小顆粒細胞是背角無齒蚌血細胞中數量最多的一類血細胞,細胞體積小于大顆粒細胞,胞質內含有大量的小顆粒,這與Zhang等發現的小顆粒細胞特征一致.筆者發現的小顆粒細胞吞噬細菌的能力強于其他3類血細胞,因此,認為小顆粒細胞是背角無齒蚌免疫防御的主要血細胞.多數研究者認為,無顆粒細胞可以分為更多的亞群,其中一類亞群細胞的體積較大,細胞核較小,偏位,細胞數量也較多,細胞核內沒有明顯的顆粒,通常稱之為透明細胞或大透明細胞.筆者觀察到的透明細胞同樣具有這些特征.此類細胞在背角無齒蚌血細胞中的比例僅次于小顆粒細胞,并具有吞噬能力,可能也是背角無齒蚌免疫防御的主要血細胞之一.另外,在貝