生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例生化藥物所謂生化藥物是指以天然的動物、植物、微生物等生物體組織和器官為原料，通過化學(xué)方法進行提取、精制或者用化工合成方法制成的內(nèi)源性生理生化物質(zhì)，用于預(yù)防、治療、診斷疾病。包括由上述這些已知藥物加以結(jié)構(gòu)改造或人工合成創(chuàng)造出的自然界所沒有的新藥物。由于約定俗成，生化藥物不包括抗生素（抗生素早已自成體系）；也不包括用微生物(細菌，病毒，主克次體)、微生物和動物毒素、人和動物的血液及組織等制成的供預(yù)防、治療和診斷特定傳染病或其它有關(guān)疾病的生物制品；習慣上也不包括中藥制成的中藥制劑。生物化學(xué)制藥主要采用化學(xué)提取法。2生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例

3.中國的三大藥源化學(xué)藥物生物藥物中草藥生化藥品生物制品現(xiàn)代生物技術(shù)藥物中國藥典2005年分為1部、2部和3部藥典1部收載藥材及飲片，植物油脂和提取物、成方制劑和單方制劑等；藥典2部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及藥物輔料等；藥典3部收載生物制品，首次將《生物制品規(guī)程》并入藥典3生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例生化藥物的分類（一）：按藥物的化學(xué)本質(zhì)來分類（二）：按藥物的來源來分類

4生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（一）：按藥物的化學(xué)本質(zhì)來分類1：氨基酸及其衍生物類藥物2：多肽和蛋白質(zhì)類藥物-----蛋白質(zhì)類藥物有白蛋白、丙種球蛋白、胰島素，多肽類有催產(chǎn)素、降鈣素、胰高血糖素。3：酶與輔酶類藥物----消化酶、氧化還原酶、抗腫瘤酶。4：核酸及其衍生物類藥物----DNA、RNA、單核苷酸、堿基。5：糖類藥物----以粘多糖為主6：脂類藥物---脂肪酸類、磷脂類、膽酸類、固醇類、卟啉類。5生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例國內(nèi)主要的生化藥品種類和廠家一覽表

藥物類別主要常用品種主要生產(chǎn)廠家氨基酸類賴氨酸沖劑、組氨酸、半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸及其鹽類；L－半胱氨酸；水解蛋白；思美泰；阿波莫斯以及氨基酸大輸液湖北省八峰藥業(yè)、上海味之素氨基酸有限公司、武漢久安藥業(yè)（武漢第二制藥廠）、廣州僑光藥廠、深圳萬和制藥、華瑞制藥酶類鏈激酶、尿激酶、凝血酶、降纖酶、抑肽酶、胰激肽釋放酶、彈性酶、立止血、糜蛋白酶、菠蘿酶、沙雷肽酶、門冬酰胺酶、透明質(zhì)酸酶、細胞色素C、達吉、得每通上海生物化學(xué)制藥廠、廣東天普藥業(yè)公司、南京大學(xué)制藥廠

核酸類聚肌胞、阿昔洛韋、病毒唑、萬乃洛韋、泛昔洛韋、更昔洛韋、胞二磷膽堿、硫唑嘌呤、甲基硫氧嘧啶、阿糖胞苷、ATP、CTP、CAMP、轉(zhuǎn)移因子麗珠醫(yī)藥集團股份有限公司、岳陽生化制藥廠、金花企業(yè)（集團）股份有限公司6生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例藥物類別主要常用品種主要生產(chǎn)廠家糖類甘露醇、葡萄糖、肌醇、右旋糖酐、豬苓多糖、透明質(zhì)酸、肝素、低分子肝素、果糖、乳果糖、甘油果糖等珠海生化、杭州賽諾菲民生制藥有限公司、蘇威制藥有限公司脂質(zhì)類角鯊烯、膽固醇類激素、輔酶Q10、脈適寶、熊去氧膽酸、前列腺素、神經(jīng)節(jié)苷脂等廣州明興制藥廠、廣州星群藥業(yè)（股份）有限公司、佛山康寶順藥業(yè)有限公司多肽及蛋白質(zhì)類加壓素及其衍生物、催產(chǎn)素及其衍生物、促皮質(zhì)素及其衍生物、下丘腦垂體肽激素、消化道激素、胸腺素、降鈣素、谷胱甘肽、施他寧、蛋白質(zhì)激素

7生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（二）：按藥物的來源來分類1：人體來源的生物藥物----人血液制品、胎盤制品、尿制品。

2：動物來源的生物藥物----蛇毒、蜂毒。

3：植物來源的生物藥物----是中草藥的主要成份。

4：微生物來源的生物藥物------氨基酸、維生素、酶。

5：海洋生物來源的生物藥物------種類繁多、成份復(fù)雜。8生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人體來源的藥物人體來源藥物的特點人體來源藥物的種類人體來源藥物的前景和問題

9生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人體來源藥物的特點1：安全性好，藥物與人體具有同源性，不會發(fā)生排斥反應(yīng)2：效價高、療效可靠。純化的血漿因子制劑，要比原血漿高出10-1000倍。3：穩(wěn)定性好，提純產(chǎn)品均可制成凍干制劑，有利于貯存、運輸、使用。10生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人體來源藥物的種類人血液制品人細胞因子人體來源的其它原料物質(zhì)人體激素

11生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例血液成份制品又可為：（1）紅細胞(RBC)

（2）白細胞(WBC)

（3）血小板

（4）血漿在使有輸入全血的治療措施中，有50%以上的患者只要輸入紅細胞就已經(jīng)足夠了，另30%則只須輸入血液中的其它成份就能達到滿意的療效，因此，利用血液的單一成份進行治療，已經(jīng)成為目前的一個趨勢。分離血液成份的技術(shù)有--離心法、過濾法。12生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人血液制品全血制品血細胞制品血漿制品13生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例紅細胞制劑用紅細胞代替全血，在國內(nèi)已經(jīng)逐漸推廣應(yīng)用。是心臟病、慢性腎病、肝病患者補充血紅蛋白的首選品種。全血和紅細胞保存于4±2℃內(nèi)可保存35天冰凍貯藏紅細胞，是長期保存紅細胞的有效方法，是指地-80℃到-196℃之間的低溫進行保存，其優(yōu)點是可以貯備多年，重融之后性能很好。缺點是貯藏費用太高。14生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例白細胞濃縮液白細胞是生產(chǎn)干擾素（INFa）的重要原料。所采集到的人體白細胞具有組織相容的HLA位點。不同人體之間的白細胞存在著抗原—抗體凝聚反應(yīng)、和細胞毒性作用。這是制約白細胞制劑應(yīng)用的原因之一。另外，目前白細胞的體外保存技術(shù)尚未解決，這是制約白細胞制劑應(yīng)用的原因之二。15生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例100,000-300,000/mm34-6million/mm316生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例嗜中性粒細胞Neutrophil嗜中性粒細胞Neutrophil嗜中性粒細胞Neutrophil嗜中性粒細胞Neutrophil嗜中性粒細胞Neutrophil嗜酸性粒細胞Eosinophil嗜酸性粒細胞Eosinophil嗜酸性粒細胞Eosinophil嗜酸性粒細胞Eosinophil嗜堿性粒細胞Eosinophil嗜堿性粒細胞Eosinophil嗜堿性粒細胞Eosinophil單核細胞Monocyte嗜堿性粒細胞Eosinophil嗜堿性粒細胞Eosinophil淋巴細胞Lymphocyte17生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例血小板制劑血小板制劑的分離和使用在國外已經(jīng)比較普遍，而在國內(nèi)尚未推廣應(yīng)用。血小板制劑的適應(yīng)癥為白血病、淋巴瘤、再生障礙性貧血等等疾病。血小板保存于特制的袋內(nèi)，在22±2℃內(nèi)并不斷振蕩，可保存5天血小板制劑輸入人體之后，常常很快會產(chǎn)生抗體，從而使輸入的血小板制劑遭到破壞。因此，最好輸入那種HLA相容的血小板制劑。18生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例新鮮冰凍血漿（FFP）新鮮冰凍血漿是指剛采集到的新鮮血液，在-30℃的溫度下，保存時間不超過1年的血漿。新鮮冰凍血漿能夠有效地保存血漿中各種生物活性成份的功能。可在許多臨床疾病的治療中使用。19生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例組成人體血漿的成份血漿占人體體重的量=8%

血漿占全血的量=50%

血漿中的水分占血漿的量=92%

血漿中的蛋白質(zhì)占血漿的量=6--7%白蛋白（Alb）+免疫球蛋白（IgG）=65%免疫球蛋白（IgG+IgM）+纖維蛋白原（Fg）+補體（C3）+轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tr）+巨球蛋白（a2M）+觸珠蛋白（Hp）+a1抗胰蛋白酶（a1AT）+血色素結(jié)合蛋白（Hpx）+a1-酸性糖蛋白G（a1AG）=25%其它百作種微量蛋白質(zhì)和多肽成份=10%20生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例血漿成分制品轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最惷庖咔虻鞍啄到y(tǒng)蛋白補體系統(tǒng)蛋白蛋白酶抑制物類21生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例轉(zhuǎn)輸?shù)鞍最愞D(zhuǎn)輸?shù)鞍资侵改軌驅(qū)C體的營養(yǎng)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、激素、藥物進行轉(zhuǎn)輸?shù)难獫{蛋白。具體有：（1）白蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂肪酸、色素、陽離子、藥物、VC（2）前白蛋白---轉(zhuǎn)輸甲狀腺素結(jié)合蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白（3）α-類脂蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂質(zhì)、膽固醇、激素（4）β-類脂蛋白-----轉(zhuǎn)輸脂質(zhì)、膽固醇、激素（5）觸珠蛋白------轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白（6）血紅蛋白結(jié)合蛋白------轉(zhuǎn)輸游離血紅蛋白（7）轉(zhuǎn)鐵蛋白------將鐵轉(zhuǎn)輸給網(wǎng)織紅細胞和其它組織（8）銅藍蛋白-----轉(zhuǎn)輸銅，調(diào)節(jié)銅吸收形成酶（9）轉(zhuǎn)鈷胺蛋白-----轉(zhuǎn)輸VB12（10）GC球蛋白------轉(zhuǎn)輸維生素B族22生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例免疫球蛋白免疫球蛋白構(gòu)成機體防御感染的體液免疫系統(tǒng)。免疫球蛋白種類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。23生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例凝血系統(tǒng)蛋白凝血系統(tǒng)蛋白維持機體的正常凝血機制。分為：（1）凝血因子。凝血系統(tǒng)共有13種凝血因子（2）抗凝血因子。抗凝血因子有纖溶酶原（Pg），當它被尿激酶激活之后，就具有溶解血栓的作用。

24生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例內(nèi)源性凝血外源性凝血接觸異面組織損傷ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨaⅧCa2+血小板磷脂

ⅩⅩaⅤCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

ⅩaⅩⅤCa2+血小板磷脂Ⅲ凝血酶原(Ⅱ)凝血酶(Ⅱa)

纖維蛋白原(Ⅰ)

纖維蛋白單體纖維蛋白多聚體ⅩⅢaⅩⅢCa2+(接觸因子)ⅦCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

Ca2+在凝血過程中的作用血小板磷脂的作用血凝過程的正反饋纖維蛋白對血小板的聚集凝血酶對血小板聚集的促進作用凝血酶對自身形成的促進作用25生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例13種凝血因子因子1-----纖維蛋白原（Fg）

因子2-----凝血酶原（FII）

因子3-----組織因子（FIII）

因子4-----鈣離子

因子5-----前加速素，易變因子（FV）

因子6-----

因子7-----前轉(zhuǎn)化素，穩(wěn)定因子（FVII）

因子8-----抗血友病因子（AHF）

因子9-----血漿凝血激酶成份（PTC）

因子10----Stuart因子（FX）

因子11----血漿凝血激酶前質(zhì)

因子12----接觸因子（FXII）

因子13----纖維蛋白穩(wěn)定因子（FSF）、激肽酶原（pK）、高分子量激肽酶原（HMW）、纖溶酶原（Pg）、蛋白C（PC）。26生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例纖溶酶原纖溶酶血管內(nèi)皮纖維溶酶原激活物組織纖維溶酶原激活物血漿纖維溶酶原激活物血漿纖維溶酶原激活物原Ⅻa纖維蛋白降解物血漿中的抗纖溶酶(-)27生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例補體系統(tǒng)蛋白補體系統(tǒng)是機體的主要防御系統(tǒng)之一。（1）補體系統(tǒng)在細胞吞噬、調(diào)理、趨化性、細胞凋亡過程中起重要作用。（2）補體系統(tǒng)在自身性免疫疾病中，起著損傷機體的作用。28生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例補體的作用方式分為三種途徑（1）補體傳統(tǒng)活化途徑------9種補體成份（C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9）。其中C1q、C1r、C1s為識別單位，C2、C3、C4為活性單位，C5、C6、C7、C8、C9為膜攻擊單位。（2）補體旁路活化途徑------B因子、D因子、P因子。（3）補體旁路活化過程中的調(diào)節(jié)因子-----C36-INA、βIH。29生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例蛋白酶抑制物類a1-抗胰蛋白酶（a1-AT）-----能夠保護機體的正常細胞不受蛋白酶的破壞和損傷，能協(xié)助控制感染和炎癥。a1抗糜蛋白酶（a1X）-----能夠保護機體的正常細胞不受蛋白酶的破壞和損傷，維持機體內(nèi)環(huán)境恒定。a間胰酶抑制劑（IaI）----具有制約、中和、清除某些蛋白酶的作用，能防止凝血系統(tǒng)蛋白酶的自身消化。抗凝血酶III（ATIII）------在肝素的促進下，與凝血酶形成復(fù)合物，使得凝血酶失活，防止血栓形成。Ci脂酶抑制劑（Ci-INH）------a2巨球蛋白（a2M）----具有制約、中和、清除某些蛋白酶的作用，能防止凝血系統(tǒng)蛋白酶的自身消化。a2抗纖溶酶（a2AP）--------30生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人細胞因子（1）骨骼生長因子（BGF）-------來源于人骨。

（2）骨形成蛋白（BMP）-------來源于人骨

（3）干擾素（IFN）

IFN-α---來源于白細胞----調(diào)節(jié)免疫活性

IFN-β---來源于成纖維細胞----調(diào)節(jié)免疫活性

IFN-γ---來源于淋巴細胞----調(diào)節(jié)免疫活性。

（4）血小板衍化生長因子（PDGF）----來源于血小板

（5）結(jié)締組織活性肽-III（CATP-III）----來源于血小板

（6）白細胞介素-1（IL-1）-------來源于人血、巨噬細胞

（7）白細胞介素-2（IL-2）-------來源于人T淋巴細胞

（8）B細胞生長因子（BCGF）----來源于人末梢血管淋巴細胞（9）骨肉瘤衍化生長因子（ODGF）------來源于人骨肉瘤細胞株

（10）紅細胞生長因子（EPO）-------來源于胎兒腎（11）集落刺激因子（CSF）-------來源于人組織、血、尿

（12）促生長因子，生長調(diào)節(jié)素（SM）-------來源于人血漿

（13）巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）-------來源于人巨噬細胞人細胞因子由于數(shù)量十分稀少，目前已經(jīng)被基因工程產(chǎn)品所代替，如干擾素a、白細胞介素-2（IL-2）的生產(chǎn)31生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人體來源的其它原料物質(zhì)1、人胎盤2、人尿底蛻膜叢密絨毛膜絨毛膜32生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人胎盤從人的胎盤中提取的蛋白主要有：

（1）人胎盤丙種球蛋白，

（2）人胎盤白蛋白，

（3）人胎盤RNA抑制劑。從人的胎盤中提取的激素有：

（1）絨毛膜促性腺激素（HCG），

（2）絨毛膜促乳激素（HCS）。33生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人尿從健康的男性人尿可以制備：

（1）尿激酶

（2）激肽釋放酶

（3）尿抑胃素

（4）蛋白酶抑制劑

（5）睡眠因子

（6）集落刺激因子（CSF）

（7）表皮生長因子（EGF）從妊娠婦女和絕經(jīng)期婦女尿液中可以提取：

（1）絨毛膜促性腺激素（HCG）34生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例人體激素人體激素主要有：

（1）蛋白質(zhì)類激素

（2）多肽類激素

（3）氨基酸衍生物類激素

（4）脂類激素人體激素很少是大分子蛋白質(zhì)，因此很少出現(xiàn)免疫反應(yīng)。35生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、血液的進一步開發(fā)血漿蛋白質(zhì)總共可以分為五個組分。目前僅僅利用了其中的第1組分（纖維蛋白原）、第2組分（免疫球蛋白）、第5組分（白蛋白），而對于第3組分和第4組分中所含有的大量血漿蛋白成份，基本上沒有加以利用。其原因是由于這些物質(zhì)含量較低，提純難度較大。第3組分中含有IgA、IgM，凝血因子II、VII、IX、X，蛋白C，纖溶酶原、α2-巨球蛋白，β-微球蛋白，補體成份C3、C4、C5、C8，α-球蛋白，β-球蛋白。第4組分中含有抗凝血酶III，α1抗胰蛋白酶、銅藍蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白，觸珠蛋白，補體Ci脂酶抑制物，前白蛋白。人體來源藥物的前景和問題36生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：其它原料的進一步開發(fā)----對于胎盤、尿液的提取技術(shù)也在不斷發(fā)展之中。3：現(xiàn)代生物技術(shù)的進一步應(yīng)用----基因工程，蛋白質(zhì)工程，細胞工程，酶工程在血液制品的生產(chǎn)中有了較大的發(fā)展和應(yīng)用。4：人體組織器管制藥的法律問題和倫理問題----國際上禁止利用人的器官和組織來生產(chǎn)藥物。37生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例動物來源的藥物利用動物的組織器官生產(chǎn)藥物。在我國于1950年代開始生產(chǎn)，當時被稱為“臟器制藥”。1980年之后被稱為“生化藥物”。目前我國國內(nèi)已經(jīng)能夠生產(chǎn)200多種來源于動物機體的生化藥物動物來源藥物的種類和用途動物來源藥物的前景和問題38生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例動物來源藥物的種類和用途1：動物多肽類藥物

2：動物蛋白質(zhì)類藥物

3：動物酶與輔酶類藥物

4：動物核苷酸類藥物

5：動物糖類藥物

6：動物脂類藥物

7：動物細胞因子乳汁中分泌人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因山羊39生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：動物多肽類藥物（1）多肽激素（2）多肽類細胞因子40生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）多肽激素下丘腦激素----促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、生長激素抑制激素（GRIF）、促性腺激素釋放激素（LHRH）。垂體多肽激素----促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、促黑激素（MSH）、脂肪水解激素（LPH）、催產(chǎn)素（OT）、加壓素（AVP）。甲狀腺所分泌的激素----甲狀腺素（T4）、甲狀旁腺素（PTH）、降鈣素（CT）。胰腺所分泌的激素----胰島素、胰高血糖素、胰解痙多肽。胃腸道激素----胃泌素、膽囊收縮—促胰酶素（CCK--PZ）、腸泌素、腸血管活性肽（VIP）、抑胃肽（GIP）、緩激肽、P物質(zhì)。胸腺所分泌的激素----胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子。41生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）多肽類細胞因子腦氨肽蛇毒胎盤提取物脾水解物肝水解物心臟激素轉(zhuǎn)移因子抗癌肽42生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：動物蛋白質(zhì)類藥物（1）蛋白質(zhì)類激素-------生長素（GH）、催乳激素（PRL）、促甲狀腺素（TSH）、促黃體生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）。人絨毛膜促性腺激素（HCG）、絕經(jīng)尿促性腺激素（HMG）、血清性促性腺激素（SGH）。胰島素、胰抗脂肝素、松馳素、尿抑胃素。（2）血漿蛋白質(zhì)-------動物血漿蛋白質(zhì)與人體的血漿蛋白質(zhì)有差異，動物血漿蛋白質(zhì)制品不能直接應(yīng)用于人體。（3）蛋白質(zhì)類細胞因子--------（4）粘蛋白-------胃膜素、硫酸糖肽、內(nèi)在因子、血型物質(zhì)A、血型物質(zhì)B。（5）膠原蛋白-------明膠、阿膠、氧化聚合明膠。（6）其它蛋白-------硫酸魚精蛋白、胰蛋白酶抑制劑43生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例3：動物酶與輔酶類藥物（1）促消化酶類-------胰酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纖維素酶、木瓜蛋白酶、黑曲霉的酶、胃蛋白酶。（2）消炎酶類-------蛋白酶、溶菌酶、菠蘿蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、明膠肽酶、酶RNA酶。（3）治療心血管疾病的相關(guān)酶------纖溶酶、尿激酶、蚓激酶、鏈激酶、凝血酶。激肽釋放酶、彈性蛋白酶。（4）抗腫瘤的酶-----L-門冬氨酸酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、組氨酸酶、酪氨酸氧化酶。（5）與生物氧化過程電子傳遞有關(guān)的治療酶-------細胞色素C、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶。（6）其它藥用酶----有機磷解毒酶、青霉素酶。透明質(zhì)酸酶。（7）動物輔酶類藥物-------輔酶Q10、輔酶A。44生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例4：動物核苷酸類藥物（1）核糖核酸（RNA）----用于治療精神遲緩、記憶衰退、動脈硬化性疾呆。靜注治療慢性肝炎、肝硬化、初期肝癌。（2）脫氧核糖核酸（DNA）----具有抗放射性作用，能夠改善機體虛弱疲勞。（3）免疫核糖核酸（iRNA）----可用于治療乙肝、肺癌。（4）轉(zhuǎn)移因子（TF）----治療惡性腫瘤。（5）聚肌胞苷酸（聚肌胞、poly：C）----是干擾素的誘導(dǎo)物，具有廣譜抗病毒作用。45生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（6）核酸-氨基酸混合物---用于氣管炎、神經(jīng)衰弱。（7）輔酶A（CoA）---用于動脈硬化、白細胞減少、血小板減少、肝病、腎病。（8）脫氧核苷酸鈉---用于放療化療引起的急性白細胞減少癥。（9）一磷酸腺苷（AMP）---對外周血管具有擴張作用，治療靜脈曲張性潰瘍。（10）三磷酸鳥苷（GTP）---用于慢性肝炎、進行性肌肉萎縮。（11）輔酶I（NAD）---用于白細胞減少、冠狀動脈硬化。（12）輔酶II（NADP）---促進體內(nèi)物質(zhì)生物氧化。46生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例5：動物糖類藥物動物糖類藥物以粘多糖為主。（1）粘多糖的種類（2）粘多糖的藥用價值（3）粘多糖的制備方法

47生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）粘多糖的種類廣義的粘多糖包括----（1）粘多糖、（2）粘蛋白、（3）糖蛋白、（4）糖脂。

粘多糖主要分布于動物的骨、軟骨、皮、角、血管、腸、滑膜液、腦、角膜、肺、肝、心、尿等等原料之中。48生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）粘多糖的藥用價值甲殼質(zhì)（幾丁質(zhì)）----用作人造皮膚、人造血管、手術(shù)線。具有消炎、止酸作用。硫酸軟骨素（CS）----治療關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、腰痛、眼病。具有抗血栓作用，用于治療多種心臟疾病。肝素----抗凝血藥物，治療血栓疾病。透明質(zhì)酸（HA）----用于眼科手術(shù)、燒傷、化妝品49生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（3）粘多糖的制備方法（1）原料處理（2）提取（3）去除非粘多糖（4）脫色（5）脫蛋白（6）純化（7）乙醇分級沉淀（8）季銨鹽絡(luò)合沉淀（9）離子交換柱層析分離（10）分子篩分離（11）親和層析50生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例6：動物脂類藥物動物脂類藥物主要包括----（1）脂肪酸及其衍生物，（2）磷脂類，（3）膽酸類，（4）固醇類，（5）卟啉及其衍生物類。動物脂類藥物主要分布在脂肪組織、肝臟，磷脂類物質(zhì)主要分布在腦、脊髓之中。（1）動物脂類藥物的種類和分布（2）動物脂類藥物的制備方法51生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）動物脂類藥物的種類和分布腦磷脂----分布在腦、酵母之中----用于止血，防止動脈硬化以及神經(jīng)衰弱。磷脂酰膽堿（卵磷脂）----分布于腦、大豆、卵黃之中----防止動脈硬化以及神經(jīng)衰弱、肝病。花生四烯酸----分布于動物的腎上腺----降血脂，用于合成前列腺素E2。魚肝油脂肪酸鈉----分布在魚肝油中----止血、治療靜脈曲張。前列腺素E1、E2----分布于羊精囊之中----降血壓、中期引產(chǎn)、催產(chǎn)。52生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例原卟啉----分布于動物血紅蛋白之中----治療急、慢性肝炎。血卟啉衍生物----腫瘤放療輔助劑。膽紅素----從膽汁中來----消炎、抗氧化膽酸鈉----從膽汁中來----治療膽酸缺乏癥。膽酸----從膽汁中來----合成人工牛黃的原料。豬去氧膽酸--從膽汁中---降膽固醇、治療氣管炎。人工牛黃----配制----消炎、解毒。膽固醇----于腦、脊髓----合成人工牛黃的原料。輔酶Q10---分布心肌----治療高血壓、急性肝壞死。53生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）動物脂類藥物的制備方法提取法（索氏提取法）----可用于提取腦磷脂、）磷脂酰膽堿（卵磷脂）、脂肪酸。水解法----通過水解血紅素，可以制得原卟啉。生物轉(zhuǎn)化法----花生四烯酸通過生物轉(zhuǎn)化，可變成前列腺素E1、E2。化學(xué)合成和半合成法-----不常用。54生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例7：動物細胞因子（1）骨髓生長因子（BGF）（2）骨髓衍化生長因子（BDGF）（3）軟骨衍化生長因子（CDGF）（4）軟骨衍化因子（CDF）（5）骨形成蛋白（BMP）（6）細胞分裂因子（CDF）（7）內(nèi)皮細胞衍化生長因子（ECDGF）（8）內(nèi)皮細胞生長因子（ECGF）55生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（9）表皮生長因子（EGF）（10）成纖維細胞生長因子（FGF）（11）酸性成纖維細胞生長因子（AFGF）（12）腦成纖維細胞生長因子（BFGF）（13）胰島素樣生長因子（IGF）（14）神經(jīng)生長因子（NGF）（15）多功能集落刺激因子（Multi-CSF）（16）乳腺刺激因子（MSF）（17）睪丸衍化生長因子56生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例動物來源藥物的前景和所要注意的問題1：發(fā)展前景2：問題

57生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：發(fā)展前景（1）動物來源藥物的原料十分豐富，可以從中制備出人體所需要的各種生物活性物質(zhì)。（2）動物來源藥物的活性成份的深入研究，尤其是動物毒素的研究。（3）利用生物技術(shù)+化學(xué)技術(shù)進行合成和半合成。（4）現(xiàn)代生物技術(shù)在動物來源藥物制造上的應(yīng)用。58生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：所應(yīng)該注意的問題組織相容性問題----是動物來源藥物的核心難題，動物來源藥物的蛋白質(zhì)注射到人體內(nèi)，會產(chǎn)生抗原反應(yīng)，嚴重者會危及生命。59生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例植物來源的藥物植物來源的藥物的種類和用途植物來源的藥物的研究前景

60生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例植物來源的藥物的種類和用途植物來源的藥物是我國中草藥的主要來源，經(jīng)過詳細記載的就有5000種。分類1：根據(jù)藥用價值來分類2：根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來分類種類1：植物蛋白質(zhì)、多肽、酶類以及藥理作用2：植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用3：植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用

61生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：根據(jù)藥用價值來分（1）抗腫瘤藥物----喜樹堿、秋水仙堿、硫酸長春堿、硫酸長春新堿、靛玉紅。

（2）強心藥----鈴蘭毒苷、去乙酰毛花洋地黃苷、洋地黃毒苷、地高辛。

（3）抗菌消炎藥----魚腥草素、秦皮乙素、黃苓苷、穿心蓮內(nèi)脂，鹽酸小檗堿。

（4）抗凝血藥----雙豆香素。

（5）鎮(zhèn)痛藥----鹽酸嗎啡、顱痛定、延胡索已素、桉油。

（6）作用于神經(jīng)系統(tǒng)的藥物----咖啡因、鹽酸可卡因，刺烏頭堿、天麻素。

（7）搞瘧藥物----鹽酯奎寧、青蒿素。

（8）止咳平喘藥物----磷酸可待因、茶堿、艾葉油、牡荊油、蕓香草油，滿山紅油。62生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)來分（1）：糖和糖苷類（2）：苯丙素類----苯丙烯、苯丙酸、香豆素（3）：醌類----輔酶Q10、紫草素。（4）：黃酮類----黃酮醇、花色素、黃苓苷（5）：鞣質(zhì)----奎寧酸、槲皮素（6）：萜類物質(zhì)----青蒿素、齊墩果酸（7）：甾體類物質(zhì)----烏沙苷原、毛地黃毒苷（8）：生物堿----咖啡因、喜樹堿63生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：植物蛋白質(zhì)、多肽、酶類以及藥理作用（1）天花粉蛋白----用于引產(chǎn)，能夠水解糖苷鍵。

（2）蓖麻毒蛋白----抗癌。

（3）植物凝集素（PHA）----凝集紅細胞、白細胞。

（4）胰蛋白酶抑制劑---抑制胰蛋白酶、治療胰腺炎、燒傷。

（5）相思豆毒蛋白----抗癌。

（6）苦瓜胰蛋白----降血糖。

（7）菠蘿蛋白酶----消炎、水解蛋白質(zhì)、促消化。

（8）木瓜蛋白酶----促消化、消炎。

（9）無花果蛋白酶----驅(qū)蟲劑。

（10）木瓜凝乳蛋白酶----促消腫、消炎。

（11）辣根過氧化物酶（HRP）----診斷試劑。

（12）麥芽淀粉酶----助消化。

（13）脲酶----分解尿素。（14）植物SOD酶----抗氧化。（15）辣根過氧化物酶的提取64生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：植物糖類生物活性物質(zhì)以及藥理作用（1）單糖類----葡萄糖、果糖、核糖、脫氧核糖、木糖、（2）單糖酸類----維生素C。（3）單糖醇類----木糖醇、山梨醇、肌醇、甘露醇。（4）低聚糖類----蔗糖、麥芽糖、棉籽糖。（5）多聚糖類----淀粉、纖維素、人參多糖、黃芪多糖、海藻酸。（6）糖的衍生物類----葡萄糖—6—磷酸、果糖—1，6—二磷酸，磷酸肌醇，氨基葡萄糖。65生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例植物糖類藥用成份舉例植酸鈣----是營養(yǎng)劑，具有促進生長發(fā)育的作用。肌醇----治療肝硬化、血管硬化、降血脂。葡萄糖----大輸液，補充營養(yǎng)。葡萄糖醛酸內(nèi)酯----治療肝炎、肝中毒、風濕性關(guān)節(jié)炎。葡萄糖酸鈣----補鈣劑。甘露醇----抗腦水腫、降顱壓。山梨醇----抗腦水腫、降顱壓。海藻酸----增加血容量，抗休克。人參多糖----增強免疫機能。66生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例5：植物脂類生物活性物質(zhì)以及藥理作用天然藥物化學(xué)中的（1）醌類，（2）黃酮類，（3）萜類，（4）甾體類，（5）苯丙酸類，（6）鞣質(zhì)，等等均屬于植物脂類藥物。（1）脂肪和脂肪酸類----亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸等不飽和脂肪酸。（2）磷脂類----大豆磷脂（含卵磷脂）。（3）固醇類----β-谷甾醇，大豆固醇。（4）黃酮類----茶葉中提取茶多酚67生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例植物來源的藥物的研究前景1：植物細胞培養(yǎng)技術(shù)

由于植物細胞體型大、接種量大、培養(yǎng)周期長、易污染雜菌等等缺陷，目前仍存在著較大的困難。尤其是沒有理想的培養(yǎng)設(shè)備和裝置。2：植物組織培養(yǎng)技術(shù)

通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)植物藥有效成份，有利于解決生藥資源斷缺的難題，如從紅豆杉中提取紫杉醇，已經(jīng)給紅豆杉這一珍稀樹種帶來了滅頂之災(zāi)。3：天然植物來源藥物分離純化、功能結(jié)構(gòu)測定68生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例微生物來源的藥物1：細菌----抗生素、氨基酸、維生素、酶制劑2：真菌類

（1）冬蟲夏草 （2）靈芝多糖

（3）藻類多糖 （4）香菇多糖69生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例海洋生物技術(shù)海洋生物技術(shù)是指以海洋生物為對象，綜合應(yīng)用基因工程、細胞操作技術(shù)和細胞培養(yǎng)技術(shù)等手段，提取海洋生物中的天然藥物由于海洋藥物中的天然活性成份含量低、分離提純的生產(chǎn)成本較高。因此，人們研究了海洋微生物的培養(yǎng)和發(fā)酵技術(shù)，以期提高產(chǎn)量。近10年中，已經(jīng)有5000種新的海洋天然藥物被發(fā)現(xiàn)。70生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例海洋生物來源的藥物海洋生物藥物的種類和用途

海洋生物藥物的研究前景

71生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例海洋生物藥物的種類和用途1：海藻類------分為綠藻門、褐藻門、藍藻門、紅藻門等10個門類。目前已經(jīng)生產(chǎn)出褐藻酸鈉、煙酸甘露醇脂，用于抗腫瘤和治療心血管疾病。2：腔腸動物類------從柳珊瑚中提取出前裂腺素A2、萜類藥物用于抗菌。從海葵中已經(jīng)分離出具有抗癌作用的Polytoxin。3：軟體動物類-------軟體動物有8萬種，如螺類、蛤類、烏賊。從軟體動物中分離出的物質(zhì)有多糖、多肽、毒素、酶、凝聚素等等物質(zhì)，具有抗病毒、抗菌、抗腫瘤、降血壓、止血、平喘等作用。4：節(jié)肢動物類-------從蝦、蟹殼中提取出甲殼素，可以用作丸片賦形劑、緩釋藥物載體、醫(yī)用膜材料、此外，甲殼素還具有抗血栓的功能。72生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例5：棘皮動物類------有6000多種，包括海星、海膽、海參等。海膽的毒至少具有溶血作用，海膽中還含有二十碳五烯酸（EPA），用于防治冠心病。海參素具有抗癌作用。6：魚類--------有20000多種，用于制造藥物的有：魚肝油、魚軟骨素、魚細胞色素C、卵磷脂、腦磷脂。魚類中的抗癌藥物有：（1）鯊魚抗問號蛋白、（2）河豚魚肝油等。7：海洋爬行動物類------主要有蛇毒，蛇毒中含有蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、轉(zhuǎn)氨酶、膽堿脂酶、RNA酶、DNA酶、磷脂酰膽堿酶等等，具有鎮(zhèn)痛作用。8：海洋哺乳動物類-------海洋哺乳動物的臟器和腺體已經(jīng)制成了多種藥物，如鯨魚肝臟抗貧血劑、海狗骨骼肌17肽具有擴張血管、降低血壓等作用。9：其它海洋動物-------有海綿動物、環(huán)節(jié)動物、兩棲動物等等。73生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例具有藥用價值的海洋藥物（1）鯊魚抗癌蛋白-----抗Lewis肺癌（2）棘皮動物抗癌肽------抗白血病（3）軟體動物抗癌肽（蛤素）------抑制非病毒性腫瘤（4）海扇抗癌糖蛋白-------抑制肉瘤P180結(jié)節(jié)性腫瘤（5）海兔卵抗癌肽------抑制P180淋巴白血病細胞（6）沙群海葵素-------抑制P388淋巴白血病細胞和K細胞、B細胞生長（7）降鈣素-------降低血鈣、血磷、抑制骨鈣流失（8）海蛇毒素-------鎮(zhèn)痛（9）海葵毒素-------強心作用74生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（10）海綿抗生肽------抗真菌、抗細菌（11）軟體動物抗生肽-------抗病毒、抗細菌（12）抗炎肽-------風濕性關(guān)節(jié)炎（13）硫酸軟骨素-------降血脂、抗動脈硬化、抗凝血、治療冠心病（14）刺參酸性粘多糖-------廣譜抗腫瘤、抗凝血（15）甲殼質(zhì)------藥用賦形劑（16）海參苷--------抗腫瘤、抗真菌、抗輻射（17）海星皂苷-------抗腫瘤、抗真菌、抗輻射（18）海綿毒素-------溶血活性75生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（19）肽類藥物-------具有免疫、抗腫瘤、抗病毒作用（20）鮑魚多糖-------具有抗腫瘤生長作用。（21）紫菜多糖-------具有抗腫瘤、防止心血管疾病的作用。（22）芋螺毒素-------是理想的不會成癮的麻醉鎮(zhèn)痛劑。（23）由海綿中分離出的多環(huán)胍生物堿--------具有抗病毒、抗癌、抗真菌作用。（24）膜海鞘素--------具有抗病毒、抗癌、免疫抑制作用。（25）從紅海海綿中分離的AvaroneAvarol--------對艾滋病病毒有抑制作用。（26）從海洋細菌中分離出的大環(huán)內(nèi)酯化合物------具有抗病毒、抗癌、抗菌作用。76生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例海洋生物藥物的研究前景1：目前已經(jīng)取得進展的相關(guān)領(lǐng)域2：海洋藥物研究的主攻方向77生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：目前已經(jīng)取得進展的相關(guān)領(lǐng)域（1）具有抗癌活性的海洋藥物----目前進入臨床的有：從群體海葵中取處的didemnin，從截尾海兔中提取的dolastatin10，從多室草苔蟲中提取的bryostatin1，bryostatin4，從海洋細菌中提取的marinactan，從海綿中提取的manoalide。（2）具有抗菌活性的海洋藥物----日本從海洋細菌中提取出廣譜抗菌素----伊他霉素。（3）具有抗心血管疾病活性的海洋藥物----從海洋藥物中提取的喹啉酮類具有增強心肌收縮力、抗心率失常的作用。78生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（4）具有抗放射性活性的海洋藥物----日本已經(jīng)從海洋藻類中提取出SOD。（5）海洋前列腺素----從珊瑚中提取前列腺素。（6）從海洋生物中提取的保健品----這類產(chǎn)品有螺旋藻、藍藻、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）。（7）從海洋生物中提取的醫(yī)用生物材料----鱟試劑、河豚毒素試劑、甲殼素、珊瑚骨科材料。79生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：海洋藥物研究的主攻方向（1）海洋生物活性物質(zhì)的研究（2）促進生物技術(shù)在海洋藥物研究上的應(yīng)用（3）開發(fā)海洋中成藥制劑和新的劑型（4）開發(fā)海洋生物，生產(chǎn)營養(yǎng)保健品（5）從海洋生物中開發(fā)新的醫(yī)用生物材料----如利用甲殼質(zhì)生產(chǎn)創(chuàng)可貼、手術(shù)縫合線。利用海洋生物多糖類產(chǎn)品生產(chǎn)膠囊輔料。利用海洋藻類生產(chǎn)SOD。80生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例二：生化藥物的制備技術(shù)（一）：原料的選擇、預(yù)處理、保存（二）：提取（三）：分離純化81生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（一）：原料的選擇、預(yù)處理、保存1：原料選擇2：原料預(yù)處理3：原料保存82生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：原料選擇（1）有效成份含量高，

（2）原料豐富易得，

（3）雜質(zhì)含量少，

（4）原料成本低。植物原料應(yīng)注意采收的時期，以免有效成份積累不足。

動物原料要注意動物的年齡和性別。

微生物原料應(yīng)注意其對數(shù)生長期。

83生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：原料預(yù)處理動物原料采集后應(yīng)立即去除結(jié)締組織、脂肪組織，并就地冷凍。植物原料采集后就地除去不用的部分。微生物材料采集后應(yīng)將細菌細胞和培養(yǎng)液分開，并進行保鮮處理。84生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例3：原料保存方法（1）冷凍法----常用-40℃進行速凍。（2）有機溶劑脫水法----常用的有機溶劑是丙酮，因為它對于沒有破壞作用，如用它來保存腦垂體。（3）防腐劑保鮮----如用乙醇、苯酚，該方法適用于液體原料，如發(fā)酵液、提取液。85生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（二）：生物藥物的提取1：生物組織破碎2：有效成份的提取86生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：生物組織破碎（1）磨切法----組織搗碎機、膠體磨、勻漿器、勻質(zhì)機、球磨機、乳缽。（2）壓力法----加壓破碎、減壓破碎（3）反復(fù)凍融法----（4）超聲波震蕩破碎法（5）自溶法----（6）酶解法----87生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：有效成份的提取（1）提取試劑-------水、緩沖溶液、鹽溶液、乙醇、氯仿、丙酮。（2）提取方法-------鹽析、萃取、滲透、過濾。88生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（三）：生物藥物的分離純化方法1：蛋白質(zhì)藥物2：核酸類藥物3：糖類藥物4：脂類藥物5：氨基酸藥物89生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1：蛋白質(zhì)藥物的分離純化方法（1）沉淀法（2）按分子大小分離（3）按分子所帶電荷進行分離（4）層析法分離90生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）沉淀法鹽析法有機溶劑沉淀法等電點沉淀法與靶物質(zhì)特異性結(jié)合沉淀法91生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）按分子大小分離超濾法透析法凝膠層析法超速離心法92生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（3）按分子所帶電荷進行分離離子交換術(shù)層析法電泳法等電點聚焦法93生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（4）層析法親和層析法----與靶物質(zhì)特異性結(jié)合，再進行層析的方法。疏水層析法----用于分離非極性藥物。

94生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2：核酸類藥物的分離純化方法（1）提取法生產(chǎn)方法----先得取核酸與蛋白質(zhì)的復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離RNA與DNA。95生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例3：糖類藥物的分離純化方法（1）提取方法（2）分離方法96生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）提取方法非降解法----主要用于提取動物組織中的粘多糖，提取所采用的溶劑是水、鹽溶液。降解法----主要用于提取結(jié)合牢固的粘多糖，如從軟骨中提取硫酸軟骨素就是采用堿降解法，提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖則常常采用酶解法。97生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）分離方法沉淀法----乙醇沉淀是最常用的方法，4-5倍量的乙醇能使任何組織中的粘多糖完全沉淀。離子交換層析法----采用陰離子交換劑，如Dowex-I-X2離子交換樹脂、DEAE-離子交換纖維素等。洗脫液用氯化鈉溶液進行梯度洗脫。98生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例4：脂類藥物的分離純化方法提取方法----常用的溶劑有氯仿、甲醇。純化方法（1）沉淀法，利用脂質(zhì)在丙酮中溶解度不同而將其沉淀。（2）吸附層析法，常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁。洗脫常常采用逐漸增大極性的洗脫液來進行洗脫，非極性的脂肪先流出，極性的脂肪后流出。（3）離子交換層析法，如TEAE-纖維素對于分離脂肪酸和膽汁酸特別有效。99生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例5：氨基酸藥物的分離純化方法（1）氨基酸的生產(chǎn)方法（2）氨基酸的分離方法100生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（1）氨基酸的生產(chǎn)方法蛋白質(zhì)水解法----有酸水解、堿水解、酶水解三種方法，其中以鹽酸水解最為常用。鹽酸水解的優(yōu)點是水解迅速、完全、產(chǎn)物全部是L-型氨基酸、鹽酸水解的缺點是色氨酸全部被破壞、絲氨酸部份被破壞。堿水解易產(chǎn)生消旋作用，故較少使用。酶水解常常不夠完全徹底。101生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（2）氨基酸的分離方法沉淀法----依據(jù)不同氨基酸的溶解度差異進行沉淀分離。吸附法----利用活性炭對其進行吸附。離子交換法----常用離子交換劑為強酸性陽離子交換樹脂，洗脫方法主要采用PH梯度洗脫。102生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例生物化學(xué)制藥實例一：人體來源的生物藥物

二：動物來源的生物藥物三：植物來源的生物藥物

四：海洋生物來源的生物藥物103生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例一、人體來源藥物的制備實例（一）人血白蛋白（Alb）制劑的制備（二）尿激酶（URK）的制備（三）絨毛膜促性腺激素（HCG）的制備（四）白細胞介素-2（IL-2）的制備104生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（一）人血白蛋白（Alb）制劑的制備白蛋白又稱清蛋白，約占血漿總蛋白的65%。同種白蛋白制品無抗原性。白蛋白為單鏈分子，由548個氨基酸組成。白蛋白的制備方法有二種：

（1）從健康人體的血漿中分離制取

（2）從健康產(chǎn)婦的胎盤中分離制取白蛋白的制備工藝分為6步（1）絡(luò)合 （2）解離 （3）濃縮（4）熱處理 （5）除菌 （6）干燥。105生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝人血漿在攪拌下用NaHCO3調(diào)節(jié)PH=6.8，加入等體積的2%利凡諾溶液。

↓

充分攪拌后，靜置2-4小時，分離出上清液+絡(luò)合物沉淀。

↓

在絡(luò)合物沉淀中加入滅菌蒸餾水，用0.5mol/L的HCl調(diào)節(jié)PH值至弱酸性，加入NaCl量為0.15%--0.2%，充分攪拌。

↓

65℃恒溫加熱1小時，離心除去雜蛋白，分離出上清液。

↓

上清液進行超濾濃縮。

↓

60℃恒溫熱處理10小時，滅活病毒。

↓

除菌過濾

↓

白蛋白溶液，進行冷凍干燥

↓

白蛋白產(chǎn)品106生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2、人血白蛋白產(chǎn)品的檢驗方法（1）外觀為白色疏松物體。

（2）白蛋白的含量>95%以上。

（3）水分<1%

（4）水溶后PH=6.6--7.2

（5）硫酸銨殘留量<0.01%

（6）細菌學(xué)檢驗合格

（7）熱原檢測合格

107生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（二）尿激酶（URK）的制備尿激酶有多種分子形式，主要有分子量為31.3KD、54.7KD二種。屬絲氨酸蛋白酶。底物：血纖溶酶原，作用其Arg-Val鍵，使纖溶酶原轉(zhuǎn)為纖溶酶。尿激酶用于治療各種血栓和血栓性梗塞。108生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝尿激酶的生產(chǎn)工藝分為10步：（1）沉淀 （2）酸化（3）吸附 （4）洗滌（5）洗脫 （6）除去熱原和色素（7）濃縮 （8）洗脫（9）透析 （10）凍干109生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例⑵工藝路線110生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝流程框圖所收集到的男性應(yīng)該在8小時之間進行處理收集流出的活性部分，用1mol/L的Hac調(diào)節(jié)PH=4.2，用蒸餾水調(diào)節(jié)電導(dǎo)率至16--17M/歐姆。裝入羧甲基纖維素柱（CM-C），用10倍體積的、PH=4.2的Hac-NaAc緩沖液洗滌柱床，促進吸附。酸化以后的尿加入1%的硅藻土，在5℃下攪拌1小時。在溫度10℃以下操作，尿液的原始PH=8.5透析液進行冷凍干燥，得尿激酶產(chǎn)品。上述收集液用飽和的NaH2PO4調(diào)節(jié)PH=8.0，加入NaCl，調(diào)節(jié)電導(dǎo)率為22M/歐姆。通過DEAE-Sephadex-A-50層析柱，除去熱原和色素。用0.1%氨水+0.1mol/L的NaCl（PH=11.5-11.8）的洗脫液進行洗脫。用0.02%氨水+0.1mol/L的NaCl的洗脫液進行洗脫，當流出的洗脫液從澄清開始變混濁時，加以收集。將硅藻土的吸附物用5℃的冷水洗滌，裝入層析柱。用鹽酸調(diào)節(jié)尿液的PH=6.5以下，電導(dǎo)率為20—30M/歐姆，細菌數(shù)量在1000個/毫升以下收集洗脫液中的活性成份（雜質(zhì)被吸附在層析柱中），在4℃的蒸餾水中進行透析。111生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2、尿激酶產(chǎn)品的質(zhì)量標準（1）外觀為白色凍干粉末。（2）酶活力≥15000IU/mg蛋白質(zhì)。112生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（三）絨毛膜促性腺激素（HCG）的制備絨毛膜促性腺激素是一種糖蛋白，由α、β兩個亞基組成。絨毛膜促性腺激素由胎盤滋養(yǎng)層合體細胞分泌，婦女妊娠45—70天，尿中HCG的含量達30000-50000IU/24小時。絨毛膜促性腺激素主要用于治療女性不育癥、由于黃體功能不全引起的子宮出血、習慣性流產(chǎn)。113生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝絨毛膜促性腺激素的生產(chǎn)工藝包括12步：（1）粗制 （2）提取（3）透析 （4）吸附（5）洗滌 （6）洗脫（7）干燥 （8）精制溶解（9）精制透析 （10）精制吸附（11）精制解吸 （12）精制干燥114生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例孕婦尿，用HCl調(diào)節(jié)PH=4-5，加入苯甲酸-乙醇飽和液（孕婦尿：苯甲酸乙醇飽和液：乙醇=1：0.075：5），攪拌1小時，靜置2-3小時。上清液1+上清液2合并，在5℃以下，用蒸餾水進行透析。取透析內(nèi)液進行離子交換層析。先將CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液進行平衡，將樣品加到層析柱上。HCG粗品中加入10倍量的4℃、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸鹽緩沖液，攪拌提取4小時，離心，取上清液1。離心后的沉淀物再用10倍量的4℃、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸鹽緩沖液提取，取上清液2。過濾，棄濾液，得沉淀吸附物。攪拌下加入95%乙醇，直到苯甲酸全部溶解為止，即有絮狀沉淀物產(chǎn)生。靜置過夜，離心，沉淀物用95%的乙醇和丙酮洗滌，干燥，得HCG粗品。先用0.01mol/L、PH=4.8的醋酸鹽緩沖液洗出洗脫峰-1再用0.01mol/L、PH=5.9的磷酸鹽緩沖液沖出洗脫峰-2再用0.2mol/L、PH=8.5的醋酸鹽緩沖液沖出洗脫峰-3從洗脫峰-3上得到的就是HCG。-30℃以下冷凍干燥，得HCG精品HCG精品在10℃以下的蒸餾水中溶解，溶解液用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸鹽緩沖液進行透析。透析內(nèi)液進行羥基磷灰石柱層析。步驟：（1）安裝羥基磷灰石柱層析柱。

（2）用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸鹽緩沖液平衡。

（3）樣品上柱先用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸鹽緩沖液洗脫，得峰-1再用1.0mol/L、PH=6.8的磷酸鹽緩沖液洗脫，得峰-2從洗脫峰-2上得到的就是HCG純品。-30℃以下冷凍干燥，得HCG產(chǎn)品。115生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（四）白細胞介素-2（IL-2）的制備白細胞介素-2是由活化的淋巴細胞所產(chǎn)生的，含有133個氨基酸的糖蛋白。116生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝白細胞介素-2的生產(chǎn)工藝分為10步：（1）誘生 （2）病毒滅活（3）硫酸銨分級 （4）硫酸銨沉淀（5）除鹽 （6）親和層析（7）洗滌 （8）解吸（9）凝膠層析 （10）洗脫117生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝流程圖示取上清液，加入飽和硫酸銨溶液至0.35飽和度，4℃靜置24小時，離心，棄去沉淀。用雞瘟病毒和絲裂原培養(yǎng)液聯(lián)合刺激人外周血白細胞，37℃，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，形成誘生白細胞培養(yǎng)液。得到白細胞介素-2（IL-2）組分透析內(nèi)液裝入Sepharose-4B層析柱，用200ml、PH=6.5的平衡柱緩沖液洗去不吸附的蛋白質(zhì)。用含有0.4mol/L的NaCl的、PH=6.5的磷酸鈉緩沖液（PBS）洗滌親和柱。用含有1.0mol/L的NaCl的、PH=6.5的磷酸鈉緩沖液（PBS）進行解析。將沉淀物溶解于10mol/L、PH=6.5的磷酸鈉緩沖液（PBS），緩沖液含2%（g/ml）的正丁醇+0.15mol/L的NaCl。然后裝入透析袋中，用10mol/L、PH=6.5的磷酸鈉緩沖液透析24小時，期間更換5次透析外液取上清液，補充加入飽和硫酸銨溶液至0.85飽和度4℃靜置24小時，離心，收集沉淀。進行病毒滅活和固-液分離：

（1）用6mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)PH=2.0-2.5。

（2）用6mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH=7.2-7.4。

（3）離心除去變性沉淀的雜蛋白。對組分進行超濾濃縮，裝入到UltrogelACA44層析柱進行凝膠層析，要求PH=7.6。用0.2mol/L的Tris-HCl+0.5mol/L的甘氨酸+0.1%的聚乙二醇（PEG、Mr=6000）+2%的正丁醇所構(gòu)成的洗脫劑進行洗脫。得白細胞介素-2（IL-2）純品。118生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例二、動物來源藥物的制備實例（一）胰島素的制備（二）超氧化物歧化酶（SOD）的制備（三）核糖核酸（RNA）的制備（四）透明質(zhì)酸的制備（五）肝素的制備（六）冠心舒的制備（七）硫酸軟骨素的制備119生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（一）胰島素的制備胰島素由二條鏈組成，A鏈21個氨基酸、B鏈30個氨基酸。胰島素是所有蛋白質(zhì)中研究得最清楚的一個蛋白。120生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝胰島素的生產(chǎn)工藝分為10步：（1）提取 （2）堿化（3）酸化 （4）濃縮（5）去脂 （6）鹽析（7）除去酸性蛋白 （8）鋅沉淀（9）結(jié)晶除去堿性蛋白 （10）洗滌（11）干燥121生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝流程圖示取上清液進行鋅沉淀上清液用氨水調(diào)節(jié)PH=6.2-6.4加入3.6%的醋酸鋅溶液，加入量為溶液量的20%再用氨水調(diào)節(jié)PH=6.04℃下，放置過夜收集沉淀，用冷丙酮洗滌洗滌后的沉淀物進行干燥，得胰島素粗品。鹽析物除酸性蛋白操作鹽析物加入7倍量的蒸餾水進行溶解再加入3倍量的冷丙酮，用氨水調(diào)節(jié)PH=4.2-4.3補加丙酮。使得丙酮：水=3：7攪拌后過夜，離心，除去酸性蛋白質(zhì)沉淀濃縮液迅速升溫，然后迅速降溫，除去脂肪。去脂液用NaCl溶液進行鹽析，鹽析外液PH控制在PH=2.0-2.5之間。提取液用PH=8.0-8.4的氨水堿化4小時，除去沉淀。堿化液用PH=3.6-3.8的硫酸，在5℃時酸化4小時，除去沉淀。酸化液，在30℃下進行減壓濃縮至比重為1.04-1.06。豬胰臟絞成碎末，加入2.3-2.6倍的86%-88%的乙醇+5%的草酸，10℃-15℃之間提取3小時。胰島素粗品除堿性蛋白質(zhì)，每克粗品加入2%的檸檬酸溶液50ml+6.5%的醋酸鋅溶液2ml+丙酮16ml然后再用冰水稀釋至100ml，使樣品充分溶解。冷卻至5℃以下，用氨水調(diào)節(jié)PH=8.0，過濾，除去堿性蛋白質(zhì)沉淀。濾液進行結(jié)晶操作濾液用10%的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)PH=6.0補加丙酮，使得溶液中的丙酮含量達到16%慢速攪拌3-5小時，使結(jié)晶析出再在5℃左右放置3—4天，使結(jié)晶完全析出收集結(jié)晶，用丙酮、乙醚反復(fù)脫水，真空干燥，得結(jié)晶胰島素純品。122生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（二）超氧化物歧化酶（SOD）的制備超氧化物歧化酶存在于動物、植物、微生物之中，有Gu-Zn-SOD，Mn-SOD，F(xiàn)e-SOD等等類別，目前，美國、德國、澳大利亞等國都有產(chǎn)品生產(chǎn)。超氧化物歧化酶在抗衰老、抗輻射、消炎方面具有顯著的療效，主要用于炎癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、放射治療之后的炎癥。123生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝超氧化物歧化酶的生產(chǎn)工藝分為12步：（1）收集 （2）浮洗（3）溶血 （4）去血紅蛋白（5）沉淀 （6）熱處理（7）沉淀 （8）透析（9）層析 （10）超濾（11）濃縮 （12）干燥124生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝流程圖示超濾濃縮，冷凍干燥，得超氧化物歧化酶（SOD）純品透析液進行層析操作（1）采用DEAE-Sephadex-A50層析柱，（2）層析柱先用2.5mmol/L、PH=7.6的磷酸緩沖液進行平衡，（3）樣品上柱，用緩沖液進行吸附，（4）用2.5-5.0mmol/L、PH=7.6的磷酸鉀緩沖液進行梯度洗脫，（5）收集SOD的活力洗脫峰。上清液放入透析袋中，在0℃的條件下透析6-8小時。沉淀物加入適量的去離子水進行溶解，然后離心，除去水不溶性蛋白，收集上清液在0℃的條件下，澄清液中加入適量丙酮，使其產(chǎn)生大量絮狀沉淀，離心除去上清液，收集沉淀物。上清液于55℃-65℃熱處理10-15分鐘，然后離心，除去熱變性蛋白，收集黃綠色澄清液。沉淀物加入適量的去離子水進行溶解，然后離心，除去水不溶性蛋白，收集上清液。在0℃的條件下，上清液中加入1.2-1.5倍體積的丙酮，產(chǎn)生絮狀沉淀，離心除去上清液，收集沉淀物。加入0.25倍體積的95%乙醇+0.15倍體積的氯仿，攪拌15分鐘，離心除去血紅蛋白沉淀，收集上清液。潔凈的紅細胞在5℃左右，加入去離子水，攪拌30分鐘。進行溶血。新鮮豬血離心去除血漿紅細胞用0.9%的NaCl溶液清洗3次125生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例2、超氧化物歧化酶（SOD）電泳鑒定方法0.5%瓊脂糖凝膠平板電泳法（或者采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法）：（1）緩沖液為PH=8.4的Tris-Gly，

（2）電壓梯度22V/cm、

（3）電流3MA/cm、

（4）電泳時間35分鐘、

（5）染色液用0.5%氨基黑10B、

（6）7%的Hac進行褪色處理。126生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（三）核糖核酸（RNA）的制備采用動物的肝臟生產(chǎn)RNA，具有其它生物來源的RNA所不具備的藥物功能，缺點是肝臟組織中成份復(fù)雜，因此RNA的提純難度相當大。127生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例1、工藝用動物的肝臟生產(chǎn)RNA分為10步：（1）勻漿制備 （2）提取（3）除去雜蛋白 （4）沉淀（5）除去糖原 （6）精制（7）洗滌 （8）溶解（9）分裝 （10）凍干128生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例在0℃的條件下，攪拌加入等體積的0.2mol/L的醋酸鈉溶液，再加入1/4體積的1%的十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）。0℃的條件下放置30分鐘，離心得沉淀物。沉淀物除糖原操作（1）沉淀物溶解在含0.001mol/L的EDTA+0.01mol/L的醋酸鈉溶液中，加入等體積的2.5mol/L的K2HPO4，（2）不斷攪拌下再加入等體積的乙二醇甲醚，（3）在0℃的條件下，放置30分鐘，離心，得上清液。離心清液除蛋白質(zhì)操作（1）離心清液中加入等量氯仿，反復(fù)振蕩2—3次，直到中間界面無明顯蛋白質(zhì)層為止。

（2）向清液中加入1/10體積的20%的醋酸鉀、再加入2倍體積的-20℃的乙醇，（3）在0℃的條件下，放置1小時，離心，得白色沉淀物。離心清液進行提取---離心清液中，加入等體積的0.2mol/L的三乙醇胺，1%的十二烷基磺酸鈉（SDS）0.002mol/L的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA、PH=9.0），攪拌均勻。再加入等體積的90%的苯酚（苯酚中含0.2%的8-羥基喹啉）、再加入等體積的氯仿，室溫振蕩30分鐘，3500r/min離心20分鐘，除去沉淀物。健康的豬、牛肝臟用生理鹽水洗干凈，切成小塊，加入1-2倍量的0.1mol/L的NaCl-0.05mol/L的檸檬酸溶液，再加入0.001%聚乙烯硫酸脂（PVS）和0.1%的、PH=7.0的Triton溶液。用組織搗碎機搗成勻漿，3500r/min，然后離心20分鐘，除去沉淀物。沉淀物進行反復(fù)洗滌操作（1）沉淀物用0.1mol/L的醋酸鈉溶液（內(nèi)含0.001mol/L的EDTA）洗滌。（2）再用70%的乙醇溶液洗滌（3）重復(fù)3-5次洗滌，直到?jīng)]有泡沫。沉淀物進行過濾式除菌操作---沉淀物用（0.001mol/L的EDTA+0.14mol/L的醋酸鈉溶液）溶解，

過濾式除菌操作。得無菌RNA溶液。灌裝，凍干，得無菌RNA純品。129生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例（四）、透明質(zhì)酸（HA）的制備130生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例以雄雞冠為原料HA的生產(chǎn)工藝工藝路線131生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝過程1．提取凍雞冠解凍后，用絞肉機絞碎，加適量水用膠體磨磨成糊狀，按每1kg雞冠加水8L，加氯化鈉80g，攪拌加熱至90℃，保溫10min，冷卻至50℃，用1mol/L氫氧化鈉液調(diào)pH8.5~9.0,加入適量胰酶,45~50℃保溫酶解5~7h，酶解過程中維持pH8.5~9.0。2．過濾將酶解提取液用濾布加硅藻土加壓過濾，得澄清濾液。3.乙醇沉淀和粗品干燥取濾液,調(diào)pH6.0~6.5,將濾液加到3倍體積的95%乙醇中,反復(fù)傾倒3次,待纖維狀沉淀充分上浮后,取出沉淀,用適量乙醇脫水3~5次,放入有五氧化二磷的真空干燥器內(nèi)干燥,得透明質(zhì)酸中間品。4．氯仿處理將透明質(zhì)酸中間品溶于0.1mol/L氯化鈉溶液中,溶解濃度為0.3%,溶解過程中加少量氯仿防腐。溶解后，調(diào)pH4.5~5.0,加入等體積的氯仿攪拌處理2次,靜置分出水相。132生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例5．酶解將水相用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH7.5,加入適量鏈霉蛋白酶,37℃酶解24h。6．絡(luò)合沉淀酶解結(jié)束后，向酶解液中加入同體積的1%氯化十六烷基吡啶（CPC）溶液，靜置，收集HA-CPC絡(luò)合沉淀。7．解離將HA-CPC絡(luò)合沉淀加入0.4mol/L氯化鈉溶液中,攪拌解離5~10h。8．過濾解離液先用硅藻土過濾至清,再用0.2μm微孔濾膜精濾。9．純沉淀、真空干燥將濾液加至3倍體積的95%乙醇中，反復(fù)傾倒3次，取出纖維狀HA沉淀，脫水，五氧化二磷真空干燥，得HA精品。133生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例工藝說明與討論1．對原料的預(yù)處理，雞冠應(yīng)洗凈后冷凍儲藏。也可用丙酮脫水處理或儲存，這樣可除去大部分脂肪等雜質(zhì)，以利于后面的分離純化，但成本加大。2．雞冠絞碎后用膠體磨處理時，注意不要磨得太細，以減少機械剪切力對透明質(zhì)酸的降解。磨成糊狀后，可先用水提取，過濾除去雞冠殘渣得提取液，然后進行酶解除蛋白質(zhì)；也可將水提取和蛋白酶水解同時進行。后者的提取效率高，幾乎達到完全提取，但提取液中的雜質(zhì)含量也較高。提取時，可在水中加入1%的氯化鈉。加熱至90℃可對原料有一定滅菌作用，并使蛋白質(zhì)熱變性，易被蛋白酶水解。所用的蛋白水解酶為胰酶、木瓜蛋白酶、鏈霉蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶等，不可用胃蛋白酶，因胃蛋白酶的最適pH值太低，易導(dǎo)致透明質(zhì)酸的酸水解。公雞冠中的透明質(zhì)酸以與蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)存在，酶解的另一重要作用是切斷透明質(zhì)酸與蛋白質(zhì)分子的結(jié)合。提取和酶解時，應(yīng)注意防腐。3.透明質(zhì)酸的提取液粘度較大，過濾速度較慢，可采用先粗濾后精濾，并加紙漿、硅藻土或活性炭助濾。134生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例4．醇沉淀是分離提純透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素等粘多糖最常用的方法之一，在制備過程中，可多次重復(fù)使用，類似于重結(jié)晶的作用，每次醇沉淀操作，都使透明質(zhì)酸的純度有所提高。不同最終濃度的乙醇沉淀操作還可對不同Ｍr的透明質(zhì)酸進行分級分離，在較低乙醇濃度下，低Ｍr的透明質(zhì)酸不易被沉淀出來，Ｍr越高，越容易被沉淀。在從水溶液中用甲醇或乙醇沉淀透明質(zhì)酸或其它粘多糖時，必須有鹽的存在，一般為1%左右的氯化鈉。沉淀形態(tài)有纖維狀和無定型粉末狀兩種形態(tài),纖維狀透明質(zhì)酸容易制備,形態(tài)疏松,易于脫水和真空干燥,缺點是使用時，溶解速度慢，若在常溫下溶解成1%的水溶液，需要3~7d。制備無定型粉末狀沉淀，需控制料液的鹽濃度、料液和乙醇的混合速度及攪拌速度等諸多因素，工藝較復(fù)雜，但粉末狀透明質(zhì)酸溶解速度快，使用方便。5．第一次乙醇沉淀、脫水、真空干燥所得透明質(zhì)酸產(chǎn)品，可作為化妝品用保濕劑。135生物化學(xué)制藥概述生化藥物制備技術(shù)生化藥物制備實例6．上述產(chǎn)品透明質(zhì)酸進行進一步精制時，可以使用干燥的產(chǎn)品，也可使用乙醇沉淀后未干燥的產(chǎn)品，這樣可以縮短生產(chǎn)周期。7．氯仿可使蛋白變性沉淀，利用此作用可除去一部分蛋白質(zhì)雜質(zhì)。氯仿處理的另一個重要的作用，是除去致炎物質(zhì)。如細菌內(nèi)毒素是一種脂多糖（lipopolysaccharide），其分子兼具脂溶性和水溶性，在進行氯仿處理時，聚集在氯仿和水的界面，利用這一性質(zhì)可除去細菌內(nèi)毒素。