關于抗生素類藥物分析PPT第1頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類氨基糖苷類四環素類大環內酯類多烯大環類多肽類1.抗生素（antibiotics）2.分類中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述第2頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三

化學純度較低活性組分易發生變異穩定性差3.來源4.抗生素的特點化學合成半合成生物合成（發酵）生產工藝復雜發酵過程不易控制，易受污染原因中國藥科大學藥學院藥分教研室一、概述第3頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三采用生物學法與物理化學法鑒別：理化方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內毒素、降壓物質等含量/效價測定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時；

理化方法：

準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質量分析一、概述中國藥科大學藥學院藥分教研室第4頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三1.

化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第5頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三酸性較強（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個手性碳旋光性青霉素類：苯環取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構UV（共軛）干燥條件較穩定，溶液不穩定穩定性(內酰胺)2、主要理化性質降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第6頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三

2、主要理化性質中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第7頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三1）羥肟酸鐵反應：

β–內酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應

α-氨基藍紫色3）雙縮脲反應

β–內酰胺類紫色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應3、鑒別中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第8頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三3、鑒別-------------頭孢利定的NMR鑒別法(JP14)

NMR鑒別法單峰信號取本品50mg溶于0.5ml重水中，測定NMR光譜時，應顯示多重峰信號多重峰信號δ=3.8附近

δ=6.9～7.5δ=7.9～9.0235強度比中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第9頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三3、鑒別-------------頭孢氨芐鑒別的TLC條件

CHP（2000）5mg/ml2μl硅膠G

0.1mol/L枸櫞酸液-0.2mol/LNa2HPO4-丙酮(120:80:3)0.1%茚三酮溶液顯色USP（24）25mg/ml5μl硅膠

醋酸乙酯-水-乙腈-冰HAc(48:18:14:14)短波長UV光檢出BP（1999）0.4%(W/V)1μl

硅烷化硅膠HF25415.4%NH4Ac(pH6.2)-丙酮(85:15)254nm檢出中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第10頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三4、特殊雜質檢查--------------聚合物、有關物質、異構體等色譜條件與系統適用性試驗測定法頭孢他啶中聚合物測定頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查色譜條件與系統適用性試驗異構體和有關物質舉例：中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類第11頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三頭孢他啶中聚合物測定-----------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10理論板數應不低于900，拖尾因子在0.75～1.5254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液藍色葡聚糖2000中國藥科大學藥學院藥分教研室第12頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三

頭孢他啶中聚合物測定-----------色譜條件與系統適用性試驗葡聚糖凝膠G-10峰面積的RSD應小于5.0%254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液中國藥科大學藥學院藥分教研室第13頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三

頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相A：含3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液頭孢他啶樣品（20mg/ml）外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%AS中國藥科大學藥學院藥分教研室第14頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三

頭孢他啶中聚合物測定-----------測定法葡聚糖凝膠G-10254nm檢測流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液頭孢他啶對照品溶液AR外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過0.3%中國藥科大學藥學院藥分教研室第15頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查頭孢呋辛酯A，B異構體之間、頭孢呋辛酯A異構體與頭孢呋辛酯△2-異構體之間的分離度應大于1.5；色譜條件：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）為流動相；流速1ml/min；檢測波長278nm。系統適用性試驗：理論板數按頭孢呋辛酯A異構體峰計算，應不低于1500。中國藥科大學藥學院藥分教研室第16頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三40020600302010時間(min)峰高(mAU)654A異構體B異構體113.95411.9192.401B異構體峰的相對保留時間約為0.85，A異構體峰的相對保留時間為1.0。供試品色譜圖中,A異構體峰的面積與A、B異構體峰的面積和之比應為0.48～0.55。頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查中國藥科大學藥學院藥分教研室異構體第17頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三供試品溶液：0.2mg/ml(流動相溶）對照溶液:供試品溶液，加流動相稀釋成6g/ml

對照溶液進樣20l，調節儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍供試品溶液如顯雜質峰，量取各雜質峰面積的和，不得大于對照溶液主峰的面積中國藥科大學藥學院藥分教研室頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查有關物質第18頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內酰胺類中國藥科大學藥學院藥分教研室原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余第19頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室反應分兩步進行：水解反應(按化學計算量進行)氧化-還原反應(無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定)第20頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗:空白試驗與經典空白試驗不同：第21頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室試驗條件:（I2氧化）弱酸性（pH4.5）20分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小堿↑I2→IO3-+I-酸↑某些藥物與碘生成復鹽沉淀溫度（24～26℃）溫度＞38℃時未水解的供試品亦消耗碘反應時間：（20分鐘）第22頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）中國藥科大學藥學院藥分教研室含量％＝×

×

對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應條件、實驗操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應時間、滴定速度相同特點：第23頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------電位配位滴定法（汞量法）中國藥科大學藥學院藥分教研室原理：青霉素不與汞鹽反應，其堿性降解產物可與Hg2+絡和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗第24頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

-----------其他常用方法中國藥科大學藥學院藥分教研室酸堿滴定法：應用廣泛硫醇汞鹽法羥肟酸比色法HPLC法：應用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽NH2OHH+Fe3+β–內酰胺類紅色第25頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

（例）-----------阿莫西林克拉維酸鉀片中國藥科大學藥學院藥分教研室填充劑流動相檢測波長峰形阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應大于3.5色譜條件與系統適用性試驗十八烷基硅烷鍵合硅膠磷酸鹽緩沖液-甲醇(95:5)流速為0.7ml/min；檢測波長為220nm第26頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三5、含量測定

（例）-----------阿莫西林克拉維酸鉀片中國藥科大學藥學院藥分教研室取本品10片，置1000ml量瓶中，加水適量，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對照品與克拉維酸對照品各適量，加水溶解，制成每1ml中含阿莫西林0.5mg和克拉維酸0.25mg的混合溶液，同法測定。按外標法以峰面積分別計算供試品中C16H19N3O5S和C8H9NO5的含量。測定法：第27頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室1.

化學結構三、氨基糖苷類都是以氨基環醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結構中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素第28頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室臨床應用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強酸、堿條件均可水解穩定性(苷)2、主要理化性質三、氨基糖苷類第29頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應：具羥基胺類，α-氨基酸性質鏈霉素+

水和茚三酮藍紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應：紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-第30頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍

橙紅硫酸鹽反應或α-萘酚第31頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室4、檢查-------------來源：發酵中產生BP:薄層色譜法（雜質對照品法）要求：NC2≥2000，C2a峰和C2峰的分離度應符合要求，重復進樣RSD<2.0%三、氨基糖苷類鏈霉素中鏈霉素B的檢查慶大霉素C組分測定（系統適用性試驗）色譜柱：ODS流動相：

H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時調節甲醇的含量。檢測波長：

330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）第32頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法、HPLC法等中國藥科大學藥學院藥分教研室第33頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室四、四環素類1.

化學結構第34頁，講稿共40頁，2023年5月2日，星期三中國藥科大學藥學院藥分教研室四、四環素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽臨床多用鹽酸鹽