第二講植物組培的培養基演示文稿當前1頁，總共58頁。（優選）第二講植物組培的培養基當前2頁，總共58頁。

第一節培養基的種類和成分

一、培養基種類▼二、培養基成分▼

第二節培養基制備

▼一、母液配制和保存二、培養基配制、分裝和滅菌▼第三節培養基的選擇▼一、單因子試驗二、多因子試驗三、逐步增減法四、廣譜實驗法當前3頁，總共58頁。一、培養基的種類

1、根據其態相不同分為固體培養基與液體培養基。

固體培養基是指加凝固劑的培養基。培養基中加入一定量的凝固劑，加熱溶解后，分別裝入常用的培養容器中冷卻后即得到固體培養基。液體培養基是指不加凝固劑的培養基。

當前4頁，總共58頁。

培養基種類

固體培養基

液體培養基▲營養分布均勻，生長整齊一致，但通氣性差。通氣性較好，便于操作，但營養分布不均，生長發育不整齊。二者比較當前5頁，總共58頁。2、根據培養物的培養過程培養基分為：

初代培養基和繼代培養基

外植體：從植物體上取出的用于無菌培養的植物材料。

植物材料：莖尖、莖段、花瓣、葉子、花藥等

當前6頁，總共58頁。初代培養：指用來第一次接種從植物體上分離下來的外植體過程。繼代培養：對培養物(包括細胞、組織或其切段)通過更換新鮮培養基及不斷切割或分離，進行連續多代的培養，就稱為繼代培養。當前7頁，總共58頁。

3、根據其作用不同，培養基分為：

誘導培養基

增殖培養基

生根培養基

4、根據其營養水平不同，培養基可分為基本培養基和完全培養基。

基本培養基（就是通常稱呼的培養基）主要有MS、White、N6、B5、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。

完全培養基就是基本培養基的基礎上，根據試驗的不同需要，附加一些物質，如生長調節物質和其他復雜有機物質等。當前8頁，總共58頁。

常用培養基種類

MS培養基

B5培養基White培養基

N6培養基KM-8P培養基當前9頁，總共58頁。

★有機成分復雜，它包括了所有的單糖和維生素

用于原生質體培養(包括原生質融合的培養)KM-8P培養基特點：當前10頁，總共58頁。N6培養基特點：1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養而設計成分簡單KNO3

和(NH4)2SO4含量高廣泛應用于小麥、水稻及其它植物的花藥培養等

當前11頁，總共58頁。White培養基特點：1943年由Ｗhite為培養番茄根尖而設計的。1963年又作了改良，稱作Ｗhite改良培養基。特點：無機鹽含量較低適用：生根培養。當前12頁，總共58頁。B5培養基特點：含較低的銨雙子葉植物尤其木本植物組培可選擇

當前13頁，總共58頁。MS培養基特點：無機鹽、離子濃度高，硝酸鹽含量較高。

▲MS培養基是目前應用最多最普遍的培養基。無機鹽的濃度較高，能保證組織培生長所需的礦物質營養。并且因為離子濃度高，在配制、貯存、消毒過程中，即使有些成分略有出入，也不致影響培養基中的離子平衡

當前14頁，總共58頁。

二、培養基成分

水

植物激素

無機鹽

有機物培養體支持材料

輔助性物質▲當前15頁，總共58頁。

一、無機鹽

▲

氮枝葉生長需要氮素，缺氮老葉先發黃；氮過量，枝葉過度茂盛。磷

缺磷，植株生長緩慢，老葉暗紫色。鉀

促進花卉生長健壯，增強抗性，莖稈挺拔。缺鉀，葉尖、葉緣枯焦，葉片呈皺曲狀，老葉發黃或火燒狀。鈷

缺鈷，葉片失綠而卷曲，整個葉片向上彎曲凋枯。當前16頁，總共58頁。二、有機物維生素肌醇氨基酸天然復合物椰子汁（CM）酵母浸出液（YE)水解酪蛋白（CH)碳水化合物馬鈴薯汁液其它▲當前17頁，總共58頁。碳水化合物選用種類：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖濃度：2%～3%，胚培養為4%～15%大生產時可用白糖▲當前18頁，總共58頁。

糖在培養基的作用：1）為細胞提供合成新物質的碳骨架2）為細胞的呼吸代謝提供底物和能量3）維持滲透壓當前19頁，總共58頁。種類：

VB1（鹽酸硫胺素）、VB6（鹽酸吡哆醇）、VB3（煙酸）、Vc（抗壞血酸濃度：0.1－1.0mg/L

作用：VB1促愈傷組織產生，提高活力

VB6促根生長

Vc防組織褐變

VB3

與植物代謝和胚的發育有關系

維生素▲當前20頁，總共58頁。

氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。因培養基的種類不同，其種類和濃度不同。肌醇：又稱環己六醇，在糖類的轉化中起作用

當前21頁，總共58頁。名稱分子量溶解性質性質蔗糖342.30溶于水、乙醇無變旋現象山梨糖180.16溶于水甜味與蔗糖相似葡萄糖180.16溶于水有變旋現象，以游離態或磷酯形式存在果糖180.16溶于水、乙醇有變旋現象，甜度高于蔗糖鹽酸硫胺素（VB1）337.28溶于水、乙醇、甘油受高溫影響小，可高溫消毒核黃素（VB2）376.37溶于無水乙醇、微溶于水等電點PH=6.0，堿性溶液中易變質，光能加速變質鹽酸吡哆素（VB6）205.64溶于水、乙醇對光、空氣、熱穩定是轉氨酶的輔酶鈷胺素（VB12）1355.42溶于水、乙醇受高溫影響小，可高溫消毒，參與絲氨酸轉變為甘氨酸過程煙酸（VPP）123.11極易溶于水、乙醇對空氣、光、熱、PH值穩定生物素（VH）244.31溶于水、乙醇對空氣溫度穩定葉酸（VM）441.40易溶于乙酸、NaOH、微溶于水參與生物甲基化作用抗壞血酸（VC）176.12極易溶于水有較強的還原能力，可做抗氧化劑用，參與酪氨酸代謝及色氨酸的羥基化作用肌醇180.16易溶于水植物中廣泛存在，可能與IAA的代謝有關常見糖和維生素及其主要性質當前22頁，總共58頁。椰乳：促愈傷組織和細胞培養，用量10－20%，使用注意莖尖大小香蕉泥：用量150－200ml/L，應用在蘭花組培馬鈴薯汁液：用量150－200g/L，使苗壯水解酪蛋白：濃度100－200mg/L，應用在微莖尖培養天然復合物▲當前23頁，總共58頁。

自然界中，植物激素是植物新陳代謝中產生的天然化合物，它能以極微小的量影響到植物的細胞分化、生長、發育，影響到植物的形態建成、開花、結實、成熟、脫落、衰老和休眠、萌發等許多生理生化活動。

在培養基中，其各種成分對培養物影響最大的最顯著的就是激素。激素的種類、濃度、以及配比都會顯著的影響愈傷組織的形成、不定根、不定芽的分化，胚狀體的形成等。通常，不同植物，或不同品種，甚至同一植物的不同位置對激素的要求有很大的變化，這主要取決于植物的內源激素水平。組織培養中使用的激素有的是天然的，如脫落酸（ABA）等，有的是合成的，如二氯苯氧乙酸（2，4－D）三、激素當前24頁，總共58頁。（一）、激素的種類：1、生長素類：在自然界中，生長素影響莖和節間的伸長、向性、頂端優勢、葉片脫落和生根等現象

在組織培養中的主要作用是：誘導細胞的分裂和根的分化，誘導愈傷組織）

當前25頁，總共58頁。

組織培養中常用的生長素：

1二氯苯氧乙酸（2，4－D）

2萘乙酸（NAA）

3吲哚乙酸（IAA）

4吲哚－－3－丁酸（IBA）

NAA、IAA、IBA被廣泛用于生根，2，4－D有利于愈傷組織的誘導和生長。

IAA容易光解，注意用棕色試劑瓶保存，保存時間不要太久。

溶解方法：1MNaOH或95％酒精，以前者為好保存：配成一定濃度后，冰箱冷藏保存當前26頁，總共58頁。2、細胞分裂素自然界中，細胞分裂素影響細胞分裂，頂端優勢的變化和莖的分化等

組織培養中，細胞分類素主要促進細胞分裂和由愈傷組織上或器官上分化不定芽。細胞分裂素常常與生長素相互配合，用以調節細胞分裂，細胞伸長，細胞分化和器官形成。常用的細胞分裂素有：

6－芐氨基嘌呤（6－BA）激動素（6-糠氨基嘌呤、KT）玉米素（ZT）噻二唑苯基脲（thidiazuron、TDZ）溶解方法：1MHCL

保存：配成一定濃度后，冰箱冷藏保存當前27頁，總共58頁。3、赤霉素由日本人黑澤1926年發現。自然界中，赤霉素能夠打破休眠、促進果實成長等效果。雖然已經用于頂端分生組織的培養和維管分化的研究，但在培養基中很少添加，因為它的作用往往是負面的。雖然也有赤霉素能刺激不定胚發育成正常小植株的報道，但在使用中仍需慎重，不可輕易添加。赤霉素有20多種，其中在組織培養中最常用的是GA3。在組織培養中與生長素和細胞分裂素相比，赤霉素不太常用，據報道赤霉素能刺激不定胚正常發育成小植株溶解方法：95％酒精保存：配成一定濃度后，冰箱冷藏保存赤霉素易溶于水，但溶于水后不穩定，容易分解

滅菌：高溫易分解，要過濾滅菌當前28頁，總共58頁。4、脫落酸在自然界中，脫落酸能阻礙發育、促進老化、形成休眠芽等作用。

經試驗表明，脫落酸有利于胚性愈傷組織形成正常不定芽。

材料的試管保存，加上脫落酸能抑制生長，使繼代培養時間延長。溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。保存：具有熱穩定性，但容易發生光解。配成一定濃度后，冰箱冷藏保存當前29頁，總共58頁。（二）、常見培養基中植物激素配方類型激素配方再生方式及用途1.無植物激素誘導生根、無性胚、愈傷組織形成2.單加生長素誘導生根、愈傷組織、無性胚、不定芽3.單加細胞分裂素誘導不定芽、側芽增殖、愈傷組織形成4.高生長素低細胞分裂素誘導芽、原球莖增殖、愈傷組織形成5.低生長素高細胞分裂素誘導叢芽、愈傷組織形成6.低生長素低細胞分裂素誘導不定芽、側芽增殖7.等量生長素與細胞分裂素誘導側芽增殖8.加生長抑制劑（多效唑、矮壯素等）壯苗、延緩生長、利于試管苗保存9.加GA3打破種子、芽休眠，促進伸長生長當前30頁，總共58頁。名稱分子量溶解性質主要作用吲哚乙酸（IAA）175.19易溶于熱水、乙醇、乙醚、丙酮促進細胞的延伸生長和細胞壁結構的松馳，也可用于誘導生根吲哚丁酸

(IBA)203.24溶于醇、丙酮、醚稀堿、稀酸液為生根刺激劑

a-萘乙酸

(NAA)186.20易溶于熱水、丙酮、醚、乙酸、稀堿液促進細胞生長，刺激生根2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)221.04易溶于醇、丙酮、乙醇、稀堿液促進愈傷組織形成赤霉酸(GA3)346.38易溶于醇、乙酸乙酯、碳酸氫鈉和醋酸鈉的水溶液，其鈉促進莖、葉伸長生長，打破休眠（三）、常見生長調節劑及主要性能一覽表當前31頁，總共58頁。（四）、常見生長調節劑的微摩爾/升濃度與毫克/升的換微摩爾/升毫克/升IAAIBANAA2,4-DKTBA2iPZTTDZGA310.1750.20320.18620.22100.21520.22530.20270.21900.22020.346420.35040.40640.37240.44210.43040.45050.40540.43800.44040.692730.52550.60940.55860.66310.64560.67580.60810.65700.66061.039140.70070.81280.74480.88420.86080.90100.81080.87600.88081.385550.87591.01600.93101.10521.07611.12631.01351.09501.10101.731961.05111.21921.11721.32621.29131.35161.21621.31401.32122.078271.22631.42241.30341.54731.50651.57681.41891.53301.54142.424681.40141.62561.48961.76831.72171.80211.62161.75201.76162.771091.57661.82881.67581.98941.93692.02731.82431.97101.98183.1173當前32頁，總共58頁。四、培養體支持材料1.瓊脂用量7－10g/L（0.7%-1%）注意：1若濃度過高，培養基就會變得很硬，營養物質就難于擴散到培養的組織中。

2當進行營養需要研究時，應注意不要使用瓊脂，因為市場供應所有瓊脂含有雜質，特別是含有Ca,Mg和微量元素。2.其它

卡拉膠、玻璃纖維、濾紙橋、海綿等▲當前33頁，總共58頁。五、輔助性物質1.抗生素2.抗氧化物3.活性炭▲當前34頁，總共58頁。

抗生素1.常用種類：青霉素鏈霉素慶大霉素等2.用量：5%－20%3.作用：防止由外植體內生菌造成的污染。4過濾滅菌

▲當前35頁，總共58頁。

抗氧化物

常用抗氧化劑及使用：

半胱氨酸VC（50－200mg/L液洗滌外植體傷口表面）。活性炭

1.作用：具吸附作用；莖尖初代培養可防褐化；促進新梢增殖（濃度0.1－0.2%）；促進生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）。利于胚胎培養。2.常用濃度：0.5－10g/L

3.活性炭的作用

①對生長的抑制：其吸附了植物激素②對生長的刺激：其吸附了有抑制作用的物質▲當前36頁，總共58頁。

第二節培養基配制一、母液配制與保存二、培養基配制當前37頁，總共58頁。(一)母液配制流程圖

稱量

母液分裝確定培養基

溶解

定容

貼標簽保存于冰箱一、母液配制(以MS為例)當前38頁，總共58頁。

稱量藥品

天平預置全顯示清零稱藥當前39頁，總共58頁。(二)母液配制要求：1.母液濃縮倍數：10-100，大量元素10；微量元素、鐵鹽100；有機物50；2.選用蒸餾水、重蒸餾水、分析純或化學純試劑3.防止沉淀4.激素母液濃度：1mg/ml,1次配成50或100ml5.激素溶解：IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；

NAA先溶于熱水或95%酒精再加水；

2，4-D先溶于1MNaOH再加水；

KT、BA先溶于1MHCl再加水。

當前40頁，總共58頁。為什么要配制母液？1）方便2）準確（有些成分量太小）3）母液要分類配，否則有些成分混合一起會產生沉淀以MS培養基為例：當前41頁，總共58頁。MS培養基母液的配制當前42頁，總共58頁。母液保存：在冰箱內

低溫保存當前43頁，總共58頁。二、培養基配制移母液調PH值培養基熬制滅菌稱取蔗糖、瓊脂扎口定容分裝二次定容接種確定配方當前44頁，總共58頁。

大量元素母液

微量元素母液

鐵鹽母液

有機物母液

取100ml取10ml取10ml取10ml注：MS培養基配制容量瓶要求：一次性移取，不能吸進吸氣球里，數量看準，不滴不漏，吹凈為度。移母液當前45頁，總共58頁。用自來水定容至1升定容：當前46頁，總共58頁。稱取蔗糖、瓊脂用自來水定容到1升取蔗糖25－30g，瓊脂7－8g。當前47頁，總共58頁。培養基熬制：3.將容量瓶中剩余的液體一并倒入鋁鍋中，搖晃使均勻。1.將定容好的培養液取1/3倒入鋁鍋中，同時加入稱好的蔗糖和瓊脂，邊煮邊攪拌，防止糊底。2.用旺火煮開，再用文火加熱，直至瓊脂全部融化。當前48頁，總共58頁。用0.1MNaOH或HCl調PH值為6.0。調PH值：當前49頁，總共58頁。分裝：趁熱分裝，100ml的三角瓶約裝入30－40ml。當前50頁，總共58頁。扎口與滅菌:要求封口松緊適宜，系活扣，便于接種操作。培養基應及時滅菌，防止變質。當前51頁，總共58頁。

滅菌后，應盡快地轉移培養瓶使其冷卻，一般應將滅菌后的培養基儲藏于30℃以下的室內名，最好儲藏在4－10℃的條件下。應當注意的是，某些生長調節物質如IAA、ZT、ABA等以及某些維生素是不穩定的，不能和其他的培養基一起高壓滅菌，而要進行過濾滅菌。當前52頁，總共58頁。第三節培養基的選擇一、單因子試驗二、多因子試驗三、逐步增減法四、廣譜試驗法當前53頁，總共58頁。2種激素5種濃度的實驗組合Ⅰ6－BA（mg/L)A1A2A3A4A5

NAA（mg/L)B1B2

B4

B3B5B1A1B1A2B1A3B1A4B1A5B2A1B2A2B2A3B2A4B2A5B3A1B3A2