1什么是無菌技術2什么是培養基？如何配制？3怎樣進行酵母菌的純培養1.2.1微生物的基本培養技術

向經過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細菌，再經過發酵就可以制成酸奶，由于制作工藝并不復雜，一些人會在家里自制酸奶，自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導致腸胃不適的事件屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發酵物中呢？

應該先對制作用具和原料進行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發酵條件，避免雜菌進入。酸奶這需要應用無菌技術和微生物的培養技術從社會中來1.微生物的概念：_________________________的統稱。難以用肉眼觀察的微小生物原核生物(細菌、藍細菌等)原生生物(如草履蟲、衣藻等)真菌(如酵母菌、霉菌等)病毒新冠病毒細菌草履蟲酵母菌2.研究和應用微生物的前提（也是發酵工程的重要基礎）是：_______________________、_______________________。防止雜菌污染獲得純凈的微生物培養物3.實驗室培養微生物的條件：1）提供微生物生長繁殖所需營養和環境條件——培養基2）確保其它微生物無法混入——無菌技術1.培養基概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。3.培養基類型：固體培養基液體培養基有

無

瓊脂分離、計數、鑒定等擴大培養、工業生產2.培養基作用：用以培養、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。長有酵母菌菌落盛有液體培養基一、培養基的配制劃分標準培養基種類特點用途物理性質化學成分（P44）用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業生產觀察微生物的運動、分類鑒定菌種分離、鑒定、計數、保藏菌種含化學成分不明確的天然物質工業生產培養基成分明確分類、鑒定添加（或缺少）某種化學成分培養、分離出特定微生物加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類微生物選擇培養基(P16)液體培養基半固體培養基固體培養基天然培養基合成培養基鑒別培養基補充：培養基的類型及用途具體處理原理目的選擇培養基加入青霉素青霉素能抑制細菌生長，對真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮氣不加有機碳源自養型微生物能利用無機碳源鑒別培養基加入伊紅-亞甲藍P30生長大腸桿菌菌落呈深黑色，并帶有金屬光澤加入剛果紅P20

剛果紅與纖維素能形成紅色復合物，當纖維素被分解后，復合物就無法形成，培養基中會出現以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養微生物鑒別大腸桿菌鑒別纖維素分解菌4、培養基的營養構成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽。①碳源：無機碳源：CO2、CO32-、HCO3-有機碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等（自養微生物的碳源）（異養微生物的碳源）②氮源：無機氮源：N2、NH4＋、NO3-、NH3等有機氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有機物是異養型微生物的碳源、氮源、能源。③無機鹽：Ca、K、Mg為大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能夠為微生物提供C、N等元素的營養物質。CO2是硝化細菌和藍細菌的碳源無機氮源NH3既是硝化細菌的氮源和能源；N2是固氮菌（如根瘤菌）的氮源補充說明：①

含有C、H、O、N的有機物可作為異養型微生物的碳源、氮源、能源。②

自養型微生物與異養型微生物培養基的主要差別在于碳源。③

自養型微生物所需的碳源來自無機碳源，異養型微生物所需的碳源來自有機碳源，因此可以根據培養基中營養物質判斷微生物的代謝類型。④

無機氮源不但能給自養型微生物提供氮源，也能作為能源物質，如NH3既作為硝化細菌的氮源，也作為能源（NH3氧化釋放的化學能）。⑤

無機鹽除了可以調節酸堿平衡、維持一定的滲透壓之外，有些無機鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細菌）。（2）特殊需求：滿足微生物對

______________________的需求④培養厭氧微生物時，需要提供_____的條件。①培養乳酸桿菌時，需要在培養基中添加_______；②培養霉菌時，需要將培養基調至_____；③培養細菌時，需要將培養基調至___________；維生素酸性中性或弱堿性無氧表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養基的營養組成組分含量提供的主要營養牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機鹽H2O定容至1000ml水pH、特殊營養物質、氧氣4.培養基的營養構成:【典例】下表是牛肉膏蛋白胨培養基的配方，分析回答：材料牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5g10g5g20g定容至1000mL(1)根據培養基的物理性質，該培養基屬于________培養基，理由是_____________________________________________________________。(2)該培養基中主要提供碳源和氮源的物質分別是什么？屬于有機物還是無機物？________________________________________________________。(3)該培養基培養的微生物同化作用類型是_____________，理由是_________________________________________________________。固體該培養基的配方中含有凝固劑瓊脂牛肉膏主要提供碳源，蛋白胨主要提供氮源。二者均屬于有機物異養型微生物該微生物的碳源是有機物如何獲得純凈的微生物培養物？避免雜菌污染——無菌技術（前提，基本保障、關鍵）◆目的：（1）防止培養物被污染（2）防止感染實驗操作者二、無菌技術防止雜菌污染手段：主要包括

和

。（1）對實驗操作的____、操作者的

，進行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養的____、________和______等進行滅菌。消毒滅菌空間衣著和手器皿接種用具培養基超凈工作臺?為了避免周圍環境中微生物的污染，許多操作應在超凈工作臺上并在酒精燈火焰附近進行。消毒滅菌定義常用方法閱讀教材P10-P11回答以下問題使用較為溫和的物理、化學或生物等方法，殺死物體表面或內部一部分微生物。（1）概念：（2）消毒的方法：資料卡1.消毒①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。（適用于牛奶等不耐高溫的液體，可以殺死牛奶中的絕大多數微生物，并且不破壞牛奶的營養成分。）③化學藥劑消毒法：如用70%酒精進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒：接種室、超凈工作臺紫外線照射30min，適量噴灑石碳酸或煤酚皂溶液消毒。指某些細菌(如芽孢桿菌等)在一定條件下細胞質高度濃縮脫水所形成的一種抗逆性很強的球形或橢圓形的休眠體。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。指細菌、真菌、原生動物和植物等產生的一種有繁殖作用的生殖細胞。芽孢孢子2、滅菌（1）概念：指使用強烈的理化方法殺死物體內外所有微生物，包括芽孢和孢子。原理：高溫蒸汽破壞蛋白質、核酸等結構使其變性優點：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體。基本保持培養基的營養成分不被破壞。對象：培養基等。注：使用后的培養基必須滅菌后才能丟棄，以免污染環境。①濕熱滅菌：高壓蒸汽滅菌鍋內100kPa、121℃下維持15-30min.高壓蒸汽滅菌鍋（2）滅菌的方法：

原理：使微生物細胞膜破壞、蛋白質變性和原生質干燥等

對象：耐高溫，需保持干燥的物品，適用于

玻璃器皿(如試管、培養皿、吸管、注射器)

金屬器具(如針頭、鑷子、剪刀等)的滅菌②干熱滅菌：干熱滅菌箱內160-170℃下加熱2-3h干熱滅菌箱

③灼燒滅菌：酒精燈火焰灼燒效果：最徹底原理：使微生物燃燒對象：接種工具如接種環、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位。類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化學藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h濕熱滅菌培養基等,生產和實驗室常用高壓蒸汽滅菌鍋內,100kPa,溫度121℃,15～30min3.消毒與滅菌的比較接種室、接種箱，超凈工作臺

某同學將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的培養基上輕輕按一下；然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養基上輕輕按一下；將這兩個培養皿放入37℃恒溫培養箱中培養24h后，發現貼有“洗手后”標簽的培養皿中菌落較少。請分析回答下列問題。

【拓展應用P14】（1）這個材料中哪些材料用具需要滅菌處理？（2）從實驗結果來看，洗手后我們就能進行無菌操作了嗎？操作時，我們可以采用什么方法來避免手上的微生物的污染？培養皿、培養基不能用70%酒精等進行皮膚消毒；實驗操作應在超凈工作臺并在酒精燈火焰附近進行三、微生物的純培養1.培養物：在微生物學中，將接種于培養基內，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體成為培養物；2.純培養物、純培養：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養物，獲得純培養物的過程就是純培養。（一）相關概念：微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖3.菌落：分散的微生物在適宜的固體培養基表面或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞群體，這就是菌落。（二）純培養的步驟包括1）配制培養基2）滅菌3）接種4）分離5）培養（1）配制培養基稱取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖、15-20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000ml（定容）。1.制備培養基（三）酵母菌的純培養（2）滅菌將配制好的培養基轉移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15-30min。將5-8套培養皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入干熱滅菌箱內，在160-170℃滅菌2h。培養基：用高壓蒸汽滅菌鍋濕熱滅菌培養皿：在干熱滅菌箱內干熱滅菌防止污染和揮發滅菌時避免水蒸氣浸濕棉塞，取出時起到隔絕空氣中雜菌的作用3）倒平板3）倒平板待培養基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。倒平板注意事項：①溫度：50℃左右②操作：在酒精燈火焰附近③冷凝后平板倒置過高，太燙，不易操作過低，易凝固。既可以防止培養基表面的水分過快揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。根據倒平板的方法及注意事項回答下列問題：（1）培養基滅菌后，需要冷卻到________左右時，才能用來倒平板。（2）請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：_______________。（3）甲、乙、丙中的滅菌方法是__________。（4）丁中的操作需要等待_______________才能進行。為什么要將平板倒置？（5）整個過程為何要在酒精燈旁進行？（6）如何檢測培養基制備是否成功？50℃丙→乙→甲→丁灼燒滅菌

平板冷卻凝固

37℃倒置培養24～48h，觀察是否有微生物生長避免周圍環境中微生物污染既可防止培養基表面的水分揮發過快，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基造成污染。平板劃線法是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線后培養，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。三2.接種和分離酵母菌(1)原理：單個細胞微生物群單個菌落連續劃線分散或稀釋生長繁殖任務：觀看視頻1.歸納對接種環滅菌的注意事項。（1）方法（2）滅菌的時間點2.歸納劃線的注意事項，并說明原因。①灼燒接種環，直至接種環金屬絲燒紅②在火焰旁冷卻接種環，拔出酵母菌培養液試管的棉塞③試管口通過火焰④在火焰附近用接種環蘸取一環菌液⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞⑥將皿蓋打開一條縫隙，用接種環在培養基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋⑦灼燒接種環，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復以上操作，作第三、四、五次劃線注意不要將最后一區的劃線與第一區相連(2)“平板劃線法”實驗操作第1區劃線接種環滅菌第2區劃線接種環滅菌第3區劃線接種環滅菌接種環滅菌12345①接種環只蘸一次菌液,但要在培養基不同位置連續劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環進行滅菌④劃線后,培養皿倒置培養(