課程名稱食品理化檢測技術授課班級營養1431授課時間2016.4.20授課時數2本次內容維生素c的測定教具多媒體教學目標能力（技能）目標知識目標1.能配制維生素c標準溶液；2.能用2,6-二氯靛酚法進行維生素c的測定；3.能繪制標準曲線。了解維生素c對人體的作用，分類以及常見食物維生素c含量的高低；掌握維生素c的測定原理，實驗過程。重點

維C測定原理難點

樣品處理、標準曲線制作能力訓練方式方法講解、問答、互動教學環節時間安排復習：5min；講解、互動：75min小結：5min；看書鞏固知識點：5min課外作業預習課堂考勤47參考資料《食品分析與檢驗技術》《食品理化檢測技術》食品中維生素測定維生素缺乏會引起哪些疾病？壞血病：皮膚、牙齦以及黏膜上的出血點維c含量：橘肉：35mg/100g橘皮：>216mg/100g不同維生素在人體作用每100g食品中維生素c含量維c含量：橘肉：35mg/100g橘皮：>216mg/100g一、概述維生素C：又名抗壞血酸、強還原性維生素分類：脂溶性維生素水溶性維生素維生素含量測定方法液相色譜法1比色法2氧化還原法（2,6-二氯靛酚法，碘量法））3熒光法：紫外線照射下、硫色素發出熒光、熒光強度與硫色素量成正比4一、高效液相色譜

色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。液相色譜儀結構圖二、2,6二氯靛酚滴定法2,6二氯靛酚(染料）

顏色受存在狀態和外界環境影響。

存在狀態氧化態：深藍色還原態：無色外界環境酸性：淺紅色堿性：深藍色1.實驗原理

用藍色的堿性染料標準溶液,對含維生素C的酸性浸出液進行氧化還原滴定,染料被還原為無色,當到達滴定終點時,多余的染料在酸性介質中則表現為淺紅色,由染料用量計算樣品中還原型抗壞血酸的含量。還原型脫氫型二酮古樂糖酸水解新鮮食品主要以還原型存在當抗壞血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡紅色，即為終點。VC還原型脫氫VC氧化型2,6-二氯酚靛酚氧化型(酸性溶液中,呈粉紅色)2,6-二氯酚靛酚還原型(無色)2.儀器、試劑（1）1%，2%的草酸（乙二酸：HOOC—COOH）（2）維生素C標準溶液（3）2,6-二氯靛酚棕色瓶保存于冰箱內，需標定后使用。標定維生素c的濃度；計算滴定度（2,6-二氯靛酚相當于維生素c的量）（4）6%的KI溶液0.6g碘化鉀溶解于9.4g水中。

（5）0.001mol/L的KIO3若配制200ml上述濃度的碘酸鉀，需稱量碘酸鉀的量為多少？MKIO3=214m=cvM=0.001×200×10-3×214=0.0428g3.實驗步驟（5min）加入適量白陶土震蕩、靜止、過濾、收集濾液。脫色樣品50g，加入2%的草酸100ml，搗碎，過濾。提取

吸取5ml濾液用2,6-二氯二靛酚滴定至粉紅色。滴定

空白試驗應用什么代替樣品？空白用2%的草酸溶液5ml代替樣品，用燃料滴定至粉紅色。4.計算維生素c含量（mg/100g）：V1：樣品消耗燃料的量；V2：空白樣品消耗燃料的量；T:滴定度；m：滴定時濾液中樣品量。注意事項2012樣品應在草酸溶液中處理，避免維c氧化2013草酸可換做其他酸，如鹽酸、乙酸等。2014樣品處理中若有泡沫需用辛醇、硅油消泡。2015試劑配制需用重蒸餾水經過兩次蒸餾的水，出去雜質三、2,4-二硝基苯肼法原理：

活性炭氧化樣品中還原型抗壞血酸為脫氫抗壞血酸、與顯色劑2,4-二硝基苯肼生成紅色脎、根據脎在硫酸溶液中含量與抗壞血酸含量成正比進行比色測定二、試劑2012

硫酸溶液配制20132,4-二硝基苯肼：遇明火極易燃燒爆炸。干燥時經震動、撞擊會引起爆炸，過濾2014硫脲：空氣中易潮解、遇明火可燃2015活性炭處理：鹽酸回流、過濾、烘干01除去可溶性無機物、有機物三、實驗步驟樣品制備25ml樣品濾液2g活性炭振搖1min、過濾、濾液10ml10ml硫脲取4ml稀釋液1mi苯肼溶液37℃水浴3h試管放入冰水中5ml85%硫酸30min500nm測波長維C易被氧化、酸性介質中速度能得到緩解活性炭起氧化作用標準曲線

待測物質濃