染色體G顯帶標本的制備_第1頁
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文檔簡介

染色體G顯帶標本的制備二、實驗原理常規制備的染色體標本經烤片后，用熱堿、各種蛋白酶、尿素、去垢劑或其它溶液等預處理再以Giemsa染色，在油鏡下可看到染色體兩臂顯示出著色深淺不同的橫紋。最常用的是胰蛋白酶法。染色體帶型的形成主要取決于DNA、核酸結合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的堿基組成及其與結合蛋白形成的特定結構對染料分子的作用?？赡艿臋C理是：G帶區含有較豐富的A-T對，在間期核呈固縮狀態，而且是DNA晚復制區之一，其與蛋白結合緊密而不易被胰酶分解，因而深染；而G陰性帶區富含G-C對，蛋白與其結合較疏松，易被胰酶消化分解而不易著色。（。。。深染區由許多二硫鍵交聯，淺染區則缺乏二硫鍵、多硫氫鍵。。。）Giemsa染料是天青-伊紅染料，著色首先取決于二個天青分子同蛋白結合，在此基礎上再結合一個伊紅分子，通過胰酶的顯帶預處理可除去陰性G帶區的蛋白。

試劑及器材試劑：胰蛋白酶、0.4%酚紅、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸鹽緩沖液，0.85%生理鹽水。器材：37℃恒溫水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴頭。實驗步驟取胰酶25mg，溶解于盛有50ml0.85%生理鹽水的染色缸中，置37℃恒溫水浴箱中，加入0.4%酚紅2滴，混勻，以5%NaHCO3調節pH為6.6-7.0。實驗步驟待胰酶液溫度升至37℃后，將染色體標本片（37℃烘箱烤片）放入胰酶液中，并輕輕擺動，數秒（視烤片時間而定）后取出，立即自來水沖洗。染色：pH7.4磷酸鹽緩沖液4.5ml

Giemsa原液

0.5ml染色8-10分鐘。自來水沖洗，空氣干燥，鏡檢。注意事項良好的培養效果為，標本片上中期分裂相要多，且染色體分散要好。染色體長度應能適應顯帶分析技術的要求。G顯帶成敗之關鍵取決于胰酶液的濃度和處理時間之搭配。顯帶不夠標本的補救（無水乙醇脫色1-2min；甲醇冰醋酸固定液脫色1h后烤片、消化、染色）標本實驗結果低倍鏡下可看到中期分裂相，進而轉至高倍鏡及油鏡下觀察，可見染色體較為飽滿，分布均勻，著色較好，沿染色體長軸可顯出深淺不同的G帶橫紋。人類染色體G帶歌謠：一禿二蛇三蝶飄，四像鞭炮五黑腰；六號像個小白臉，七蓋八下九苗條，十號長臂近帶好，十一低來十二高；十三、四、五一二一；十六長臂縊痕大，十七長臂帶腳鐐，十八白頭肚子飽；十九中間一點腰，二

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