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第三節高速逆流色譜分離技術

化學系1303班郭麗麗201306311025目錄概述1工作原理2溶劑系統的選擇3應用4一、概述高速逆流色譜（High-SpeedCountercurrent

Chromatography,HSCCC）是一種連續高效的液-液分配色譜分離技術。該技術不需要固體支撐體，主要依據物質在兩相中分配系數的不同對物質進行分離，相對其他常用色譜（如柱色譜、高效液相色譜等）來說，具有無不可逆吸收和回收率高的特點，特別適合于天然活性成分的分離。二、HSCCC色譜的工作原理及其特點1、工作原理

HSCCC色譜包括儲液罐、泵、螺旋管分離柱、檢測器、色譜工作站或數據采集軟件或記錄儀以及餾分收集器等部分。選擇溶劑體系平衡選擇固定相充滿螺旋管柱高速旋轉螺旋管泵入流動相流動相流出，注入帶分離的樣品收集餾分2、HSCCC色譜的特點①應用范圍廣，適應性好②操作簡便，容易掌握③重現性好，回收率高④分離效率高，分離量較大⑥產品純度高三、溶劑系統的選擇1、溶劑系統的種類：

①弱極性溶劑體系

②中等極性溶劑體系

③強極性溶劑體系2、溶劑體系選擇的步驟（1）預測要分離物質的極性，粗選一個溶劑體系；（2）取少量樣品于上下相各2毫升的溶劑體系中，用TLC進行檢測，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來調節溶劑體系的極性，直到樣品在上下相中的分配比K為0.5~2為止；（3）用HPLC測定K值；（4)用分析型HSCCC進行預分離，再用制備型高速逆流色譜進行分離。3、選擇溶劑時應注意（1）溶劑不造成樣品的分解或變性；（2）樣品在溶劑中有足夠高的溶解度；（3）樣品在溶劑系統中有合適的分配系數值（固定相為管柱總體積的50%以上，分配系數為0.5~2）；（4）固定相能實現足夠高的保留。四、應用高速逆流色譜在分離純化木蝴蝶中的黃酮苷類化合物的應用1、分配系數的測定利用HPLC測定樣品在不同溶劑體系的分配系數。

2、溶劑系統的確定根據文獻及被分離物的性質選擇溶劑體系。包括：①氯仿-甲醇-水；②乙酸乙酯-正丁醇-水；③正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水。此處選用氯仿-甲醇-水

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