第三節高效液相色譜儀

高效液相色譜儀由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、記錄系統等五大部分組成。11.儲液瓶（輸液管入口端安裝有過濾器）；2.高壓輸液泵；3.混合器和阻尼器；4.進樣器（閥）；5.色譜柱；6.檢測器；7.廢液瓶；8.數據處理和控制系統

2HPLC儀器結構示意圖貯液器輸液泵梯度裝置進樣裝置分離柱控溫裝置檢測器3

首先高壓泵將貯液器中流動相溶劑經過進樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當注入欲分離的樣品時，流經進樣器貯液器的流動相將樣品同時帶入色譜柱進行分離，然后依先后順序進入檢測器，記錄儀將檢測器送出的信號記錄下來，由此得到液相色譜圖。工作過程：4一、高壓輸液系統

高壓輸液系統由溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表等組成。

51.溶劑貯存器

溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為1到2L，用來貯存足夠數量、符合要求的流動相。62.高壓輸液泵

高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關鍵部件之一，其功能是將溶劑貯存器中的流動相以高壓形式連續不斷地送入液路系統，使樣品在色譜柱中完成分離過程。對泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無脈動，流量精度和重復性為0.5%左右。此外，還應耐腐蝕，密封性好。7

高壓輸液泵，按其性質可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動相粘度和柱滲透無關。8

9恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統阻力不發生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:31:44PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/33.梯度洗脫裝置

梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續改變它們之間的比例，從而使流動相的強度、極性、pH值或離子強度相應地變化，達到提高分離效果，縮短分析時間的目的。129、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:31:44PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3僅用弱溶劑僅用強溶劑梯度洗提14梯度洗脫裝置分類

一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統，僅需一臺泵即可。一類是內梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設置的程序，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統。

15二、進樣系統

進樣系統包括進樣口、注射器和進樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進行分離。16通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置,其結構如圖所示：17三、分離系統

色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內襯光滑的聚合材料的其他金屬。18柱管材料：耐腐蝕耐壓內徑：2.0、3.0、4.1、4.6mm長度：5、10、15、25cm等固定相：顆粒細、圓、均一、剛性強1920

一般在分離前備有一個前置柱，前置柱內填充物和分離柱完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經過前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過分離柱時不再洗脫其中固定相，保證分離技的性能不受影響。柱子裝填得好壞對柱效影響很大。對于細粒度的填料（＜20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內，經沖洗后，即可備用。柱溫一般為室溫或接近室溫。21四、檢測系統檢測器是液相色譜儀的關鍵部件之一。對檢測器的要求是：靈敏度高，重復性好、線性范圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等。

22在液相色譜中，有兩種類型的檢測器：一類是溶質性檢測器，它僅對被分離組分的物理或物理化學特性有響應。屬于此類檢測器的有紫外、熒光、電化學檢測器等；一類是總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理和化學性質響應。屬于此類檢測器有示差折光檢測器等。23㈠紫外光度檢測器24⒈作用原理依據被分析試樣組分對待定波長紫外光的選擇吸收性，組分濃度與吸光率的關系遵守比爾定律。25⒉工作過程

透鏡將光源射來的光束變成平行光，經過遮光板變成一對細小的平行光束，分別通過測量池與參比池，然后用紫外濾片濾掉非單色光，通過雙紫外光敏電阻，根據輸出信號差進行檢測。26⒊特點⑴靈敏度高，檢測濃度可達到10-9g/ml；⑵結構簡單，對溫度和流速不敏感；⑶溶劑的選用受限制。27㈡熒光檢測器

物質受紫外光激發后，能輻射出比紫外光波長較長的熒光，可用熒光檢測器檢測，而某些不發射熒光的物質也可通過化學衍生轉變成能發射熒光德物質而得到檢測。28優點：是一種選擇性強、靈敏度高，比紫外檢測器高23個數量級，可達pg量級或更低，可用于梯度淋洗。缺點：樣品適用范圍有限，定量分析的線性范圍較窄(104-105)。29㈢示差折光檢測器

借連續測定流通池中溶液折射率德方法來測定試樣濃度的檢測器。分為偏轉式和反射式兩種類型。是一種通用型檢測器，靈敏度可達10-7gcm-3。缺點是對溫度變化敏感，不能用于梯度淋洗。30㈣電導檢測器

是離子色譜法應用最多的檢測器，依據物質在某些介質中電離后所產生電導變化來測定電離物質的含量。受溫度的影響較大，需放在恒溫箱中。pH>7時不夠靈敏。319、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:31:44PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/