ICS65.020.01B21中華人民共和國國家標準GB/T19563—2004大豆種子品種鑒定實驗方法簡單重復序列間區法Experimentalidentifieationmethodforvarietyofsoybeanseed-ISSR2004-06-22發布2004-12-01實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布中國國家標準化管理委員會

GB/T19563一2004前本標準的附錄A為規范性附錄。本標準由國家質量監督檢驗檢疫總局提出本標準起草單位：國家農業標準化監測與研究中心（黑龍江)黑龍江省質量技術監督局.本標準主要起草人：王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業、郝兆軍。

GB/T19563—2004目前.我國農作物種子的鑒定多采用種植鑒定、快速測定法(苯酚染色法、大豆種皮愈創木酚染色法、高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測定法、燕麥種子熒光測定法、小麥種子氫氧化鉀測定法)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定大麥、小麥種子純度等。這些方法所需的檢驗周期較長.雖然電泳法所需時間短，但不具備分子水平鑒定的諸多優點。隨著分子生物學的發展，特別是20世紀90年代以來.分子生物學的相關技術已被廣泛應用.其檢測對象為DNA大分子——生物的遺傳基礎。以DNA為檢測對象,具有許多其他檢測水平所不具備的優點：首先.可供探測DNA標記的數量是無限的.這是同工酶技術所無法比擬的；其二.DNA分析技術不像其他技術那樣隨組織或發育階段而異，植物體任何部位、任何時期提供的DNA均可用于分析，其檢測結果都是一樣的:第三.DNA分析不受環境影響,其變異只源干等位基因DNA序列的變異.這和穩定性便于揭示品種間的遺傳變異，從而排除了環境變異所造成的表型變異。基于上述優點,DNA分析技術是農、林、牧、漁等品種鑒定的先進方法

GB/T19563-2004大豆種子品種鑒定實驗方法簡單重復序列間區法1范圍本標準規定了大豆種子品種鑒定的實驗方法。本標準適用于利用簡單重復序列間區（ISSR)法對大豆種子品種鑒定的實驗過程2術語、定義和縮略語2.1術語和定義下列術語和定義適用于本標準2.1.1聚合酶鏈式反應polymerasechainreaction少至一個拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費幾個小時即可擴增出數百萬個分子的酶催化反應，即DNA合成反應2.1.2簡單重復序列間區inter-simplesequencerepeat是在PCR技術基礎上發展起來的一種分子標記和檢測方法·根據某個簡單重復序列（微衛星位點）設計出一系列特異引物，通過PCR反應擴增微衛星位點間隔的堿基順序,以檢測其擴增片段長度的多態性。2.1.3微衛星DNAmmicrosatelliteDNA是一類由幾個核苷酸(一般為1個～5個）為重復單位的長達幾十至幾百個核音酸的串聯重復慶列。2.1.4核谷酸nuclcotide是構成核酸的基本單元，由三部分組成：五碳糖、磷酸和環狀的含氮堿基2.1.5引物primer一條互補結合在模板DNA鏈上的短的單鏈,提供3-OH末端作為DNA合成的起點，延伸合成模板DNA的互補鏈。2.1.6引物擴增多態性primeramplifiedpolymorphism-對引物在兩個或兩個以上不同材料基因組DNA之間擴增，得到數目不同或長度不同的DNA片斷。2.2縮略語下列縮略語適用于本標準ISSR簡單重復序列間區（Inter-SimpleSequence