ICS11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofayianinfluenzavirus2004-02-14發布2004-02-15實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國國家標準禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法GB/T19438.1-2004中中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337.637874472004年2月第一版2004年11月電子版制作書號：155066·1-20518如有排版錯誤本本社負責解決版權專有侵權必究舉報電話：010)68533533

GB/T19438.1一2004前GB/T19438-2004《禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》分為以下四個部分：-GB/T19438.1一2004《禽流感病毒通用熒光RTPCR檢測方法》;-GB/T19438.2—2004《H5亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》；B/T19438.3—2004H7亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》；-GB/T19438.4—2004《H9亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》本部分的附錄A、附錄C是規范性附錄，附錄B是資料性附錄。本部分由中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局提出。本部分起草單位：中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、深圳市匹基生物工程股份有限公司本部分主要起草人：賴平安、張鶴曉、谷強、王甲正、周琦、楊偉、賴少梅。

GB/T19438.1一2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法1范圍本部分規定了禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測的操作方法本部分適用于活禽及其產品中禽流感病毒的檢測2縮略語下列縮略語適用于本部分21英光RT-PCR熒光反轉錄-集合酶鏈反應。2.2C值每個反應管內的熒光信號達到設定的閩值時所經歷的循環數2-3RNA24DEPC焦碳酸乙二酯、2.5PBS磷酸鹽緩沖鹽水（配方見附錄A）2.6T0g酶T4gDNA聚合酶原理禽流感病毒各亞型均屬A型流感病毒,根據A型流感病毒共有基因特定的序列，合成一對特異性引物和一條特異性的熒光雙標記探針。該探針與禽流感病毒特有的共同基因特異性結合，結合部位位于引物結合區域內。探針的5°端和3端分別標記不同的熒光素，如5°端標記FAM熒光素,它發出的熒光能夠被檢測儀器接收，稱為報告熒光基團(用R表示)3"端一般標記TAMRA熒光素,它在近距離內能吸收5°端報告熒光基團發出的熒光信號，稱為浮滅熒光基團(用Q表示)。當PCR反應在退火階段時，一對引物和一條探針同時與目的基因片段結合.此時探針上R基團發出的熒光信號被Q基團所吸收，儀器檢測不到R所發出的熒光信號：當PCR反應進行到延伸階段時T49酶在引物的引導下,以四種核苷酸為底物，根據堿基配對的原則,沿著模板鏈合成新鏈;當鏈的延伸進行到探針結合部位時，受到探針的阻礙而無法